用于治療溶酶體貯積癥的環糊精的制作方法
【專利說明】用于治療溶酶體貯積癥的環糊精
[0001] 聯邦咨助的研究
[0002] 本工作得到聯邦政府支持。政府具有對本發明的某些權利。
[0003] 相關申請
[0004] 本申請要求于2012年8月3日提交的美國臨時申請第61/679, 668號的優先權， 在此將其全文并入作為參考。 發明領域
[0005] 本發明提供使用環糊精化合物以及結合其他藥劑使用環糊精化合物治療大量溶 酶體貯積癥和/或降低非膽固醇脂類的方法。
【背景技術】
[0006] 環糊精（CD)是環形式的糖分子。a -CD (6糖）、β -CD (7糖）和γ -CD (8糖）是常 用的環糊精。羥丙基環糊精（ΗΡβ⑶）已被批準作為藥物賦形劑用于制藥用途。最近 的報道顯示，包括HP β⑶和β -甲基環糊精（Μ β⑶）的β -環糊精在C型尼曼匹克（NPC) 疾病小鼠模型中降低膽固醇聚積和神經元細胞損失。在CD治療之后這些NPC KO小鼠的壽 命也增加了 80-100%。在NPC疾病的貓科動物模型中也獲得了類似的陽性結果。另有報道 β -CD增加了原代NPC成纖維細胞中的胞吐。
[0007] 最近已經發現，δ-生育酚增加膽固醇從NPC細胞的外排，并降低膽固醇聚積。已 經表明提高溶酶體胞吐是針對所有溶酶體貯積癥開發新治療的治療策略，上述溶酶體貯積 癥由因溶酶體蛋白質基因的基因突變導致的50種不同的疾病組成。這些疾病中的表型變 化是溶酶體中脂類、糖蛋白和/或其他大分子的聚積以及患者細胞中溶酶體尺寸的增大， 其可以導致受感染組織中的細胞功能障礙和細胞死亡。
【發明內容】
[0008] 在一方面，本發明提供治療受試者中溶酶體貯積癥的方法，其包括：確定受試者需 要降低非膽固醇脂類或降低非膽固醇主要脂類和大分子聚積，以及對有需要的受試者施用 有效量的環糊精化合物或其藥學可接受的鹽、酯、溶劑化物或水合物。
[0009] 另一方面，本發明提供治療受試者中溶酶體貯積癥的方法，其中受試者之前已經 識別為需要降低非膽固醇脂類或降低非膽固醇主要脂類和大分子聚積，上述方法包括對有 需要的所述受試者施用有效量的環糊精化合物或其藥學可接受的鹽、酯、溶劑化物或水合 物。
[0010] 另一方面，本發明提供治療受試者中溶酶體貯積癥的方法，其包括以下步驟：對受 試者施用有效量的環糊精化合物或其藥學可接受的鹽、酯、溶劑化物或水合物和額外的治 療劑。
[0011] 在某些方面，本發明提供降低受試者中非膽固醇脂類或降低非膽固醇主要脂類和 大分子聚積的方法，該方法包括：對受試者施用環糊精化合物或其藥學可接受的鹽、酯、溶 劑化物或水合物；以及檢測脂類降低的量。
[0012] 在另一方面，本發明提供一種藥物組合物，其包括環糊精化合物或其藥學可接受 的鹽、酯、溶劑化物或水合物和維生素 E(例如δ-生育酚）以及藥學可接受的載體或賦形 劑。
[0013] 在另一方面，本發明提供治療患有溶酶體貯積癥的受試者的方法，其包括結合其 他藥劑使用如上所述的藥物組合物。
[0014] 在任一上述方面的一實施方式中，施用環糊精化合物的步驟包括以大約0.0 lmg/ Kg/天至100mg/Kg/天的劑量將環糊精化合物施用于受試者例如人。
[0015] 在任一上述方面的另一實施方式中，以單一劑量或每天大約0. 5mg/Kg至8mg/Kg 的量將環糊精化合物施用于受試者例如人。
[0016] 在任一上述方面的一實施方式中，以單一劑量或每天大約3mg/Kg的量將環糊精 化合物施用于受試者例如人。在任一上述方面的又一實施方式中，以單一劑量或每天大約 I. 0mg/Kg、l. 25mg/Kg、l. 5mg/Kg、l. 75mg/Kg、2. 0mg/Kg、2. 25mg/Kg、2. 5mg/Kg、2. 75mg/Kg、 3. 25mg/Kg、3. 5mg/Kg、3. 75mg/Kg、4. 0mg/Kg、4. 25mg/Kg 或 4. 5mg/Kg 的量將環糊精化合物 施用于受試者例如人。
[0017] 在任一上述方面的又一實施方式中，以單一劑量或每天大約0. lmg/Kg至0. 3mg/ Kg、0. lmg/Kg 至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 6mg/Kg 或 0· lmg/Kg 至 0. 7mg/Kg的量將環糊精化合物施用于受試者例如人。
[0018] 在任一上述方面的又一實施方式中，以單一劑量施用環糊精化合物。
[0019] 在任一上述方面的一實施方式中，以單一劑量或每天大約0. 05-lmg/Kg的量將額 外的治療劑（與環糊精化合物不同）施用于受試者例如人。在任一上述方面的另一實施方 式中，以單一劑量或每天大約 〇· lmg/Kg 至 0· 3mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg至0· 6mg/Kg或0· lmg/Kg至0· 7mg/Kg的量將額外的治療劑（與環糊精 化合物不同）施用于受試者例如人。
[0020] 在任一上述方面的一實施方式中，以單一劑量施用額外的治療劑。
[0021] 在另一方面，本發明特征在于治療受試者中溶酶體貯積癥的方法，其包括：確定受 試者需要降低非膽固醇脂類或降低非膽固醇主要脂類和大分子聚積；以單一劑量或每天大 約0. 05mg/Kg至lmg/Kg的量對有需要的受試者施用有效量的環糊精化合物或其藥學可接 受的鹽、酯、溶劑化物或水合物；以及以單一劑量或每天大約〇. 〇5mg/Kg至lmg/Kg的量對受 試者施用與環糊精化合物不同的額外的治療劑（例如維生素 E)。
[0022] 在另一方面，本發明特征在于治療受試者中溶酶體貯積癥的方法，其包括：確定受 試者需要降低非膽固醇脂類或降低非膽固醇主要脂類和大分子聚積；對有需要的受試者施 用有效量的環糊精化合物或其藥學可接受的鹽、酯、溶劑化物或水合物；以及對受試者施用 與環糊精化合物不同的額外的治療劑（例如維生素 E)。
[0023] 在一實施方式中，以單一劑量或每天大約0· lmg/Kg至0· 3mg/Kg、0. lmg/Kg至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 6mg/Kg 或 0· lmg/Kg 至 0· 7mg/Kg 的量將環 糊精化合物施用于受試者例如人。
[0024] 在另一實施方式中，以單一劑量或每天大約0· lmg/Kg至0· 3mg/Kg、0. lmg/Kg至 0· 4mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 5mg/Kg、0. lmg/Kg 至 0· 6mg/Kg 或 0· lmg/Kg 至 0· 7mg/Kg 的量將額 外的治療劑（與環糊精化合物不同）施用于受試者例如人。
[0025] 在又一實施方式中，以單一劑量或每天大約50 μ M的量將環糊精化合物與10 μ M 的額外的藥劑結合施用于受試者例如人。
[0026] 在進一步優選的實施方式中，以單一劑量或每天大約50 μ M的量將環糊精化合物 與10 μΜ δ-生育酚結合施用于受試者例如人。
[0027] 在其他方面，本發明提供一種試劑盒，其包括單位劑型的有效量的環糊精化合物 或其藥學可接受的鹽、酯、溶劑化物或水合物，以及用于將化合物施用于患有溶酶體貯積癥 的受試者的說明書。
[0028] 本發明的各種優勢包括以下：用環糊精包括羥丙基環糊精治療所有的溶酶 體貯積癥，但在某些方面C型尼曼匹克病除外；用環糊精包括羥丙基-β -環糊精與維生素 E結合治療所有的溶酶體貯積癥，用以協同或附加的治療效果，用于降低使得環糊精治療實 際上更加可行所需的環糊精的劑量，并通過減少兩種藥物的劑量使副作用更小；用環糊精 (例如β-和γ-形式）與修飾的環糊精結合治療所有的溶酶體貯積癥，效力更好，副作用 更小；用環糊精和修飾的維生素 E治療所有的溶酶體貯積癥，效力更好，副作用更小。
[0029] 而且，本發明提供以本發明的化合物給藥，以便基于環糊精作用機制（增加溶酶 體胞吐）治療40-50種溶酶體貯積癥中的許多種。
[0030] 本發明的其他方面在下文中公開。
【附圖說明】
[0031] 圖1是一組顯示用δ-生育酚、α-生育酚、甲基-β-環糊精、δ-生育酚和甲 基-β-環糊精的組合、以及α-生育酚和甲基-β-環糊精（MB⑶）的組合進行處理的 Wolman成纖維細胞（Wolman fibroblasts)中總膽固醇（包括膽固醇醋和游離膽固醇）的 降低的圖。
[0032] 圖2是一組顯示用δ -生育酚（D-T)、α -生育酚（a-T)、甲基-β -環糊精、δ -生 育酚（D-T)和甲基-β-環糊精（MB⑶）的組合、以及α-生育酚和甲基-β-環糊精的組合 進行處理的Wolman成纖維細胞尼羅紅染色的照片。
[0033] 圖3是一組顯示通過HEXB分泌所測量的Wolman成纖維細胞中胞吐水平的圖。
[0034] 圖4是一組顯示在存在和不存在δ-生育酚、α-生育酚、甲基-β-環糊精、δ-生 育酚和甲基-環糊精的組合、以及α -生育酚和甲基-β -環糊精的組合的情況下野生 型成纖維細胞和溶酶體貯積癥成纖維細胞中溶酶體鈣外排的圖。
[0035] 圖5Α-?是多組顯示使用Lysotracker檢定所測量的各種形式的環糊精（a-CD、 r-⑶）、δ -生育酚（D-T)及組合在7種疾病和野生型成纖維細胞系中的效果的照片。高度 分枝的環糊精（HBCD)也稱作Kl印tose。
[0036] 圖6是一組顯示環糊精減輕Wolman病細胞中病理學超微結構變化的照片。縮寫： 甲基-β -環糊精（MBCD)、δ -生育酷（δ -toco)。
[0037] 圖7是一組顯示用甲基-β -環糊精（MB⑶）、α -環糊精（α -⑶）或γ -環糊精 (γ -⑶）處理的Farber成纖維細胞的電子顯微鏡分析的照片。
[0038] 圖8是一組顯示用甲基-β