一種放射性核素標記的特異性前哨淋巴結顯像劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物制藥領域，具體地，涉及一種放射性核素標記的特異性前哨淋巴結顯像劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]手術是治療乳腺癌的主要手段，由于腋窩淋巴結狀態是影響乳腺癌病人生存的重要的獨立性預后因子，臨床上常用腋窩淋巴結清掃作為腋窩淋巴結狀態診斷和治療的一種手段，而單純乳腺切除加腋窩淋巴結清掃(axillary lymph node dissect1n, ALND)是最常用的手術方式。隨著乳腺癌的篩查和早期診斷，新發現的乳腺癌患者中50%?70%術后病理腋淋巴結陰性，對該部分患者施行ALND屬于過度治療；因此對所有乳腺癌患者均進行ALND的合理性受到質疑，迫切期待能夠替代ALND的準確、微創的腋窩分期技術一乳腺癌前哨淋巴結活檢(sentinel lymph node b1psy，SLNB)。SLN是乳腺癌淋巴轉移的第一個淋巴結，可獲得95%的診斷意義，并發癥少。
[0003]SLNB由于能夠提供較為準確的分期、減少傳統手術并發癥而成為研宄的熱點之一，也是有望成為乳腺癌治療的規范化手術式之一。在眾多研宄中，選取的放射性示蹤劑幾乎都是依靠淋巴結吞噬作用進行探測的放射性膠體("mTc-硫膠體或99mTc-人血清白蛋白等)，其顆粒大小不均，次級淋巴系統有顯影，每次注入示蹤劑顆粒總數不易控制，且顯像及活檢時間要求高，否則均可導致非SLN顯影，導致SLNB失敗。2013年3月美國藥監局首次批準用于淋巴結定位的新藥Lymphoseek。它能夠與淋巴網狀內皮細胞表面甘露糖受體(mannose receptor, CD206)特異性結合，精確檢測原發腫瘤(乳腺癌、黑色素瘤)向淋巴轉移情況。面對國外公司專利、技術保護的前提下，亟需發展新型特異性的淋巴結定位顯像劑，以應對國內臨床需求。
[0004]申請人前期通過2-氨基噻吩的方法，制備出99mTc-1T-Ri tuximab，并進行了該單抗在乳腺癌前哨淋巴結顯像中的臨床應用研宄，研宄內容見參考文獻(李囡，林保和，歐陽濤，等.99mTc-美羅華進行原發性乳腺癌前哨淋巴結活檢。中華醫學影像技術，2009，25 (4): 681-684.李囡，林保和，歐陽濤，等.467例乳腺癌患者99mTc-美羅華前哨淋巴結顯像及活檢結果分析。中華核醫學雜志，2009，29 (I):3-7)，該探針只能現制現用，不適合保存。申請人通過進一步研宄，制備出相應的藥盒(李艷，李囡，楊志等.特異性前哨淋巴結顯像劑99mTc-rituximab藥盒的制備及生物評價。同位素，2011，SI (24):85-89)。但這種藥盒的穩定性相對較差，且在藥盒中沒有惰性氣體的保護。在常溫條件下保存時間不超過3天，在-20度條件下的保留時間一般不能超過三個月。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種使用方便、性能穩定、可操作性強的放射性核素標記的特異性前哨淋巴結顯像劑。
[0006]本發明的再一個目的在于提供一種穩定性好的特異性前哨淋巴結顯像藥物的制備及藥盒化的方法。
[0007]本發明首先提供一種特異性前哨淋巴結顯像劑前體，是以雙功能螯合劑HYNIC或2-1T或巰基乙醇為偶聯基團對美羅華單抗進行化學修飾，獲得可用于放射性標記的SLN-F單抗前體。
[0008]優選地，本發明提供的特異性前哨淋巴結顯像劑前體是以雙功能螯合劑HYNIC為偶聯基團對美羅華單抗進行化學修飾獲得的。
[0009]具體地，本發明提供的特異性前哨淋巴結顯像劑前體通過以下方法制備得到:按照美羅華單抗與HYNIC雙功能螯合劑或2-1T或巰基乙醇物質的量比1:2?50混合，在4?25°C條件下，避光反應15?40min ;反應完成后以Η)_10柱分離、純化、收集。
[0010]優選地，美羅華單抗與HYNIC雙功能螯合劑摩爾比1:3混合，在4°C條件下，避光反應30min。
[0011]本發明提供了含有上述特異性前哨淋巴結顯像劑前體的藥盒。
[0012]具體地，該藥盒通過以下方法制備得到:
[0013](I)在無菌條件下，按照顯像劑前體與賦形劑的質量比1:10?40向其中加入賦形劑，于l-100Pa，-100?-50°C條件下冷凍干燥10?30h ；
[0014](2)充入惰性氣體至標準大氣壓；
[0015](3)無菌條件下，(-20°C包裝即得SLN-F藥盒。
[0016]所述賦形劑為尿素、蔗糖、果糖、甘露糖、葡萄糖中的一種或者多種；所述惰性氣體為氦氣、氬氣、氪氣或氮氣。還可以加入穩定劑，所述穩定劑為人血白蛋白、維生素C、IgG。
[0017]進一步，本發明提供了一種放射性核素標記的特異性前哨淋巴結顯像劑，含有對上述特異性前哨淋巴結顯像劑前體進行放射性核素標記的分子探針。
[0018]所述分子探針通過如下方法制備得到:取出SLN-F藥盒一支，向其中加入0.2-2.0ml的PBS緩沖液，而后向其中加入500_5000eq摩爾當量的trieine溶液，及500-5000eq摩爾當量的EDDA溶液，而后向其中直接加入0.5-1.5mL (185_740MBq)的99mTcCV溶液，最后向其中加入10-20 μ L lmg/mL的氯化亞錫0.1M高純鹽酸溶液。于室溫條件下反應10-45min。以Rad1-HPLC/Rad1_TLC分析。但標記率小于95%時，需要PD-10柱分離，即得到可用于前哨淋巴結顯像99mTc-SLN-F分子探針。
[0019]本發明還提供了上述特異性前哨淋巴結顯像劑在制備乳腺癌檢測試劑盒中的應用。
[0020]本發明提供的特異性前哨淋巴結顯像劑具有以下優點:選擇性使用HYNIC，EDDA體系作為美羅華標記Tc-99m的螯合劑，由于HYNIC偶聯的蛋白在進行冷凍干燥后，能夠在室溫下有較長的穩定性。且藥盒中以惰性氣體保護，進一步隔絕了空氣中含有的氧氣與水對蛋白的氧化作用。藥盒在室溫條件下可以保存3個月，而在-20度條件下保存期可達12個月，對該顯像劑前體進行99mTc放射性核素標記，得到特異性前哨淋巴結顯像劑藥物99mTc-SLN-F,標記率達到95%以上。本發明制得的顯像劑可以精確定位特異性前哨淋巴結，顯像及活檢時間不受限，從注射后30min-24h都能很好顯影，另外在次級淋巴結攝取低、注射點滯留低，本發明的顯像劑在乳腺癌的治療和診斷方面具有良好的應用前景。特異性前哨淋巴結顯像劑99mTc-SLN-F放化純度大于95%，使用方便、性能穩定，具有更好的安全性，同時成本低，具有較好的臨床應用前景。
【附圖說明】
[0021]圖1為SLN-F藥盒的Rad1-HPLC分析。圖1A放射性檢測器ADCl中沒有任何放射化學物質存在。圖1B相應的VWD 280nm處的保留時間Rt = 6.19min.
[0022]圖2為99niTc-SLN-F前哨淋巴結特異性分子探針的Rad1-HPLC分析，其中圖2A中放射性檢測器ADCl的保留時間為6.69min，且僅有一個放射性峰，代表其放化產率大于99%，圖2B為相應的VWD 280nm處的保留時間Rt = 6.39min。
[0023]圖3為99niTc-SLN-F顯像劑在裸鼠的前哨淋巴結不同時間的SPECT顯像圖。
【具體實施方式】
[0024]以下實施例進一步說明本發明的內容，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。
[0025]若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領