一種環孢菌素緩釋微球制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及環孢菌素緩釋微球。
【背景技術】
[0002] 環孢菌素（也簡稱為環孢素）是一類通常具有免疫抑制或抗炎活性的多肽，臨床 上在器官和組織移植中廣泛使用。環孢菌素可與腎上腺皮質激素或其他免疫抑制劑合用， 也可用于治療類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、腎病型慢性腎炎、自身免疫性溶血性貧 血、銀屑病、葡萄膜炎等自身免疫性疾病。
[0003] 最常見的環孢菌素是環孢菌素-A。其他形式的環孢菌素包括：環孢菌素-B、-C、-D 和-G及其衍生物。應理解，本文所用術語"環孢菌素"表示一些環孢菌素衍生物或其前藥 中的任一種，或是任意上述物質的混合物。
[0004] 環孢菌素在水中的溶解性差，而用于輸注的市售產品Sandimmune? (山地明 ?)被配制成含50mg/ml環孢菌素和聚乙氧基化菌麻油（polyoxylatedcastoroil, (^〇1〇?11〇出1^):)在乙醇中的濃縮物，并且在使用之前必須用氯化鈉等滲溶液或5%葡萄糖 溶液稀釋，然后緩慢靜脈輸入，時間應大約為2~6小時，一經稀釋，溶液必須于24小時內 使用或遺棄（環孢素注射液（山地明?)藥品說明書）。
[0005]CremophorEL是巴斯夫公司（BASFCrop)為其聚乙氧基化菌麻油版本注冊的商 標。它是通過使35摩爾環氧乙烷與每摩爾蓖麻油反應而制備的。所得產物是混合物（CAS 號為61791-12-6):主要組分是其中蓖麻油甘油三酯的羥基被環氧乙烷乙氧基化從而形成 聚乙二醇醚的材料。次要組分是蓖麻油酸的聚乙二醇醚、聚乙二醇和甘油的聚乙二醇醚。 CremophorEL是合成的非離子型表面活性劑。其效用來自其在水性系統中穩定非極性材料 的乳液的能力。
[0006]據報道，CremophorEL?與過敏反應相關，靜脈內施用含Crem〇Ph〇rEL?的環孢菌 素組合物與過敏反應相關，會引起從輕度皮膚反應到過敏反應和心臟衰竭的不良反應（環 孢素注射液（山地明? )藥品說明書）。因此，需要不含Cremophor?的環孢菌素組合物。
【發明內容】
[0007] 有必要進一步開發這樣的組合物，其不含有Cremophor?和乙醇。該組合物獲得環 孢菌素治療作用的同時，避免了Cremophor?.和乙醇的不良作用，進而避免了使用皮質類固 醇和/或抗組胺劑進行術前用藥（皮質類固醇和/或抗組胺劑的使用會帶來不良作用同 時，還會對合并用藥的選擇產生影響）。
[0008] 也有必要進一步開發這樣的組合物，其通過皮下注射，避免了山地明濃縮液需稀 釋可能帶來的污染，同時給藥時間短，避免長時間輸注給藥。
[0009] 本發明提供了一種用于皮下注射的不含Cremophor的環孢菌素緩釋微球制劑，其 降低了環孢菌素的給藥頻率。本發明所敘的"微球"包括制劑學中類似球形的微囊或顆粒 微小的微囊。本發明的環孢菌素緩釋微球制劑在體內的緩釋周期可達到7-35天。
[0010] 本發明還提供了 一種環孢菌素緩釋微球制劑的制備方法。
[0011] 本發明的環孢菌素緩釋微球制劑，包括環孢菌素、乙交酯丙交酯共聚物，其質量百 分比為：環孢菌素0. 1% -18. 5%，乙交酯丙交酯共聚物71. 5% -99%。
[0012] 乙交酯丙交酯共聚物[poly(lactide-co-glycolide)即PLGA]是有乙交酯和丙 交酯以不同比例嵌段共聚而成的一種高分子材料，具有良好的生物相容性和可降解性，其 最終降解產物是二氧化碳和水。本發明中所述的乙交酯丙交酯共聚物是乙交酯：丙交酯為 25 :75~75 :25的共聚物，其分子量為2000~25000道爾頓，特性粘度為0. 1~0. 5dL/ g°
[0013] 為了實現環孢菌素緩釋微球具有理想的載藥量，使其在臨床上應用成為一種 可能。發明人對環孢菌素的理化性質以及處方因素進行研究，結果發現，采用環孢菌素 0. 1% -18. 5%，乙交酯丙交酯共聚物71. 5% -99%的處方制備成緩釋微球，可以實現載藥 量為0. 5% -10. 8%的環孢菌素緩釋微球，通過改變處方中乙交酯丙交酯共聚物的用量可 以對微球的載藥量進行調節，方便臨床用藥。
[0014] 本發明所述的環孢菌素緩釋微球制劑還包含質量百分比為0. 1-10. 0%的保護劑， 該保護劑選自人血清白蛋白、明膠、海藻糖、庶糖、硫酸接或甘露醇中的一種或任意兩種或 兩種以上的組合。
[0015] 發明人在研究過程中發現，保護劑的濃度在0. 1-10. 0%時，由于加入保護劑可提 高環孢菌素的穩定性；意外的發現，當保護劑的質量百分比為0. 1-10. 0%時，可增加緩釋 微球的載藥量。
[0016] 本發明所述的環孢菌素緩釋微球制劑還包括質量百分比為0.01% -10.0%的助 懸劑，該助懸劑選自西黃蓍膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、明膠、果膠、脫乙酰甲殼素、甲基纖維 素、羧甲基纖維素鈉、羥丙甲基纖維素、羥丙基纖維素、卡波姆、聚維酮、聚乙烯醇中的一種 或任意兩種或兩種以上的組合。若本發明采用復乳法（W/ 0 /W)制備環孢菌素緩釋微球 時，由于環孢菌素難溶于水，助懸劑能以降低微粒的沉降速度并增加微粒親水性。發明人在 研究過程中發現，當助懸劑濃度小于0. 01 %時，其增加包封率和緩釋微球的載藥量的作用 不明顯，而當其濃度大于10.0%時會由于粘度過大而微球的制備帶來困難。
[0017] 由于本發明處方組成合理，可以通過普通的緩釋微球技術制備獲得，該緩釋微球 的緩釋周期可以實現長達7-35天。采用復乳法（W/ 0 /W)制備環孢菌素緩釋微球會有 更好的技術效果。
[0018] 在完成本發明的過程中，申請人發現以下制備方法會使上述緩釋微球制劑獲得更 佳的效果，該制各方法包括以下步驟：
[0019] a)將乙交酯丙交酯共聚物溶于有機溶劑，形成油相，其中有機溶劑為二氯甲烷、乙 酸乙酯中的一種或其組合；
[0020] b)將環孢菌素、保護劑、助懸劑溶于水，形成內水相；
[0021] c)將內水相與所述油相混合形成初乳，并將該初乳加入到含有表面活性劑的外水 相中形成復乳。所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸鈉、硬脂酸鈉、吐溫、或司 盤中的一種或任意兩種或兩種以上的組合。
[0022] d)持有機溶劑揮發后，得到包裹有環孢菌素的緩釋微球。
[0023] 本發明緩釋微球的制各方法a)步驟和b)步驟其目的是制備初乳所需的半成品， 所以制各方法a)步驟和b)步驟可以同時進行，可以不分先后順序的進行。
[0024] 上述制各方法優選包括以下步驟：
[0025] 將乙交酯丙交酯共聚物溶于有機溶劑，制成所述乙交酯丙交酯共聚物濃度為 10% -40%(W/V)的油相，其中有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或其組合物。
[0026] 將環孢菌素、保護劑、助懸劑溶于水，形成環孢菌素濃度為5% -50%(W/V)的內 水相。
[0027] 將內水相與所述油相混合形成初乳，并將該初乳加入到含有表面活性劑的外水 相中形成復乳。所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸鈉、硬脂酸鈉、吐溫、或 司盤中的一種或任意兩種或兩種以上的組合。優選的表面活性劑為聚乙烯醇，其濃度為 0? 1% -5%(w/V)。
[0028] 持有機溶劑揮發后，得到包裹有環孢菌素的緩釋微球。
[0029] 本發明中內水相和油相的體積比、外水相和初乳的體積比均會影響到最終緩釋微 球制劑的粒徑、載藥量和藥物的釋放。發明人在研究過程中發現當內水相與油相的體積比 大于1 :5時雖然會提高微球的載藥量，但藥物的包封率會下降，造成藥物的浪費；而當其體 積比小于1 :1〇〇時則會造成載藥量的下降。當外水相與初乳的體積比小于20 :1時會由于 外水相的體積過小造成微球的固化緩慢，固化時間延長，大量的藥物會進入水中，導致載藥 量下降；當其體積比大于2000 :1時會由于外水相過大而使微球固化速度過快，影響微球的 球形度和外觀。因此本發明中所述的內水相與油相的體積比為1 :5_1 :100,外水相與初乳 的體積比20 :1-2000 :1。
[0030] 本發明中的初乳可以采用高速攪拌、高壓均質或超聲破碎等方式制備，只要能夠 保證初乳的粒徑符合要求即可。所制備的初乳要存放在20°C以下的環境中以增加初乳的穩 定性。
【具體實施方式】
[0031] 實施例一
[0032] 稱取800mg環孢素A和300mg明膠溶于5ml注射用水中，作為內水相；稱取6g乙 交酯丙交酯共聚物溶于15ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加入到內水相中，采用高速攪 拌（23000rpm) 30秒，得初乳，存放在200°C以下的環境中；將此初乳在攪拌的狀態下加入到 6000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得復乳，將此復乳持續攪拌3小時揮去二氯甲烷， 離心、洗滌、700目篩收集得到微球，收集的微球經過一定的溫度和時間干燥后，采用150目 篩網分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒徑小于100微米。載藥量為9.6%，包封 率為86. 0%。
[0033] 實施例二
[0034] 稱取200mg環孢素A、300mg羧甲基纖維素鈉和IOOmg蔗糖溶于5ml注射用水中， 作為內水相；稱取12. 5g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加 入到內水相中，采用高速攪拌（25000rpm)30秒，得初乳，存放在200°C以下的環境中；將此 初乳在攪拌的狀態下加入到5000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得復乳，將此復乳持 續攪拌3小時揮去二氯甲烷，離心、洗滌、700目篩收集得到微球，收集的微球經過一定的溫 度和時間干燥后，采用150目篩網分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒徑小于100 微米。載藥量為0.45%，包封率32. 5%。
[0035] 實施例三
[0036] 稱取150mg環孢素A、200mg羧甲基纖維素鈉和150mg蔗糖溶于5ml注射用水中， 作為內水相；稱取15g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加入 到內水相中，采用高速攪拌（21000rpm)45秒，得初乳，存放在200°C以下的環境中；將此初 乳在攪拌的狀態下加入到4000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得復乳，將此復乳持續 攪拌3小時揮去二氯甲烷，離心、洗滌、700目篩收集得到微球，收集的微球經過一定的溫度 和時間干燥后，采用150目篩網分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒徑小于100微 米。載藥量為30. 3%，包封率72. 5%。
[0037] 實施例四
[0038] 稱取500mg環孢素A、300mg羧甲基纖維素鈉和200mg鹿糖溶于5ml注射用水中， 作為內水相；稱取15g乙交酯丙交酯共聚物溶于30ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加入 到內水相中，采用高速攪拌（1500