藜蘆雌激素受體拮抗劑樣新作用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及一種中藥藜蘆提取物的新用途，特別涉及藜蘆提取物的雌激素受體拮 抗劑樣作用。
【背景技術】：
[0002] 雌激素替代療法（estrogen replacement therapy，ERT)是治療絕經后綜合征 的首選治療方案，但是長期應用導致子宮內膜增生、乳腺癌等。選擇性雌激素受體調節 劑（Selective estrogen receptor modulators, SERM)能緩解圍絕經期癥狀，預防骨質 疏松與尿失禁，穩定陰道內環境，但不增加惡性腫瘤的發生率。SERM主要通過雌激素受體 (estrogen receptor, ER)亞型、共調節子、革E啟動子等機制實現其組織選擇性，在發揮骨 骼、心血管保護作用的同時，減少了對乳腺及生殖系統的副作用。其中ICI 182, 780是一種 新型的競爭性，"純粹的" ER拮抗劑，不具有部分ER激動作用，和ER結合后可以阻斷ER信 號傳導通路，迅速下調和降解腫瘤ER，不引起子宮內膜增殖且潮熱發生率低。近年來，大量 實驗研宄表明，植物雌激素（phytoestrogen，PE)是非留類、植物來源的具有雌激素活性的 天然化合物，具有雌激素和抗雌激素雙向調節作用。隨著植物雌激素研宄的深入以及中藥 在乳腺癌患者中越來越多的應用，尋找類似于ICI 182, 780具有雌激素受體拮抗劑作用的 中藥或者活性成分，具有廣闊的市場前景。
[0003] 藜蘆（Veratrum nigrum L.)為雙子葉植物藥百合科植物黑藜蘆的根及根莖 (Falsehellebore Root and Rhizome)。苦辛，寒，有毒。具有祛痰，催吐，殺蟲之功效。藜 蘆屬植物在我國資源比較豐富，藜蘆早已作為中醫用藥，并且民間驗方中也將其用于治療 癌癥。藜蘆屬植物主要含留體生物堿、蠻類化合物等。藥理研宄證實其留體生物堿具有增 強心肌收縮力、降低血壓、抗血栓等作用；蠻類化合物具有抗腫瘤、抑制血小板凝結作用。但 未見報道其具有抗雌激素樣作用。本研宄通過體內外實驗考察藜蘆雌激素受體拮抗劑樣作 用，以期開發新的腫瘤內分泌治療藥物提供科學依據，服務于臨床。
【發明內容】
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[0004] 本發明的一個目的是提供藜蘆的新用途，特別是提供藜蘆的雌激素受體拮抗劑樣 作用。為此，本發明提供藜蘆在制備具有雌激素受體拮抗劑樣作用的藥物中的應用。
[0005] 本發明所述具有雌激素受體拮抗劑樣作用的應用，是藜蘆能夠抑制未成鼠小鼠的 子宮重量的增加和子宮陰道的生長發育。
[0006] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是（1)藜蘆具有抑制未成熟小鼠 的子宮系數的增長的作用，（2)藜蘆具有抑制人參各劑量組子宮系數升高的作用。
[0007] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是（1)藜蘆具有降低未成熟小鼠 血清中雌二醇（estrogen, E2)含量，升高促卵泡素（follicle-stimulating hormone, FSH) 和黃體生成素 （luteinizing hormone，LH)含量的作用，（2)藜蘆拮抗具有雌激素樣作用人 參各劑量組的升高血清中E2含量，并降低FSH和LH含量的作用。
[0008] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是（1)藜蘆具有抑制未成熟小鼠 的子宮和陰道正常的生長發育的作用，（2)藜蘆拮抗具有雌激素樣作用人參各劑量組促進 子宮和陰道組織的生長發育作用。
[0009] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是（1)藜蘆能夠降低未成熟小鼠 的子宮和陰道組織ERa、ERf3蛋白水平的表達。（2)藜蘆能夠拮抗人參各劑量組促進子宮 和陰道組織中雌激素受體ERs表達的作用。
[0010] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是藜蘆，對去卵巢小鼠的子宮系 數未產生明顯抑制作用；當藜蘆配伍陽性藥戊酸雌二醇（Estradiol valerate, EV)時，表 現出明顯抑制陽性藥EV的促子宮增重作用；當藜蘆配伍具有雌激素作用的中藥人參時，表 現出明顯抑制人參給藥組的促子宮增重作用。
[0011] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是當藜蘆配伍陽性藥EV時，表現 出明顯抑制陽性藥EV的升高血液中E2含量的作用；當藜蘆配伍具有雌激素作用的中藥人 參時，表現出明顯抑制人參給藥組的升高血液中E 2含量的作用。
[0012] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是當藜蘆配伍陽性藥EV時，表現 出明顯抑制陽性藥EV促進子宮陰道生長發育的作用；當藜蘆配伍具有雌激素作用的中藥 人參時，表現出明顯抑制人參給藥組促進子宮陰道生長發育的作用；
[0013] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是當藜蘆配伍陽性藥EV時，表現 出明顯抑制陽性藥EV增強雌激素受體ERs表達的作用；當藜蘆配伍具有雌激素作用的中藥 人參時，表現出明顯抑制人參給藥組增強雌激素受體ERs表達的作用。
[0014] 本發明所述應用具有雌激素受體拮抗劑樣作用，是水提物、醇提物、乙酸乙酯提取 物、藜蘆定堿和介芬胺具有抑制MCF-7細胞增殖的作用。
[0015] 本發明所述藜蘆，包括藜蘆的原料藥材以及用該原料藥材制備的藥物產品，如藜 蘆提取物，以及以該提取物為藥物活性成分的藥物制劑。其中藜蘆提取物包括水提物、醇 提物、優選95%乙醇提取物、乙酸乙酯提取物、藜蘆定堿、芥芬胺。
[0016] 其中水提物的制備方法可以是：
[0017] 將藜蘆藥材粉碎成粗粉，加入6倍量的蒸餾水，回流提取2-3次，每次1小時。根 據實際給藥濃度，減壓濃縮或者稀釋至相應濃度，用于體內外實驗研宄。
[0018] 其中醇提物的制備方法可以是：
[0019] 將藜蘆藥材粉碎成粗粉，加入6倍量的60-80%乙醇，回流提取2-3次，每次1小 時。根據實際給藥濃度，減壓濃縮或者稀釋至相應濃度，用于體內外實驗研宄。
[0020] 其中其他提取物的制備方法可以是：
[0021] 將藜蘆藥材粉碎成粗粉，加入2倍量體積分數為28%的氨水溶液，浸潤1小時；再 加入氯仿-甲醇（體積比為4:1)混合體積20倍量，置于70°C水浴上加入回流2小時，過 濾，加入混合溶劑沖洗濾渣，收集濾液，減壓濃縮或者稀釋至相應濃度，用于體外實驗研宄。
[0022] 本發明進一步提供以藜蘆提取物為活性成分的藥物組合物在制備雌激素受體拮 抗劑樣作用的藥物中的應用。
[0023] 本發明的藥物組合物，其中藜蘆提取物在組合物中所占重量百分比可以是 0. 01-99. 99%，其余為藥物可接受的載體。本發明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所 述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑 每袋等。
[0024] 本發明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括：片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸 劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴 劑、貼劑。本發明的制劑，優選的是口服劑型，如：膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、 丹劑、膏劑等。
[0025] 本發明的藥物組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充 劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調味劑和濕潤劑，必要時可對片劑進行包衣。
[0026] 適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包 括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬 脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉。
[0027] 可通過混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進行反復混合可使活 性物質分布在整個使用大量填充劑的那些組合物中。
[0028] 口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑， 或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復配的干燥產品。這種液體制劑可含有 常規的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基 纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯膠；非水性載體（它們可以包括食用油），例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需 要，可含有常規的香味劑或著色劑。
[0029] 對于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發明的活性物質和無菌載體。根據載體 和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質溶解在一種載 體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉 劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩定性，可在裝入小瓶以后將這 種組合物冰凍，并在真空下將水除去。
[0030] 本發明的藥物組合物，在制備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的載 體，所述藥物可接受的載體選自：甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽 酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素 c、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價堿金屬的碳酸鹽、醋 酸鹽、磷酸鹽或其水溶液