苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用圖
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥領域,涉及苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]糖尿病腎病(diabeticnephropathy, DN)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)常見的并發癥,已成為糖尿病病死率增加的重要的原因。以往研究結果也發現,第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因編碼的蛋白(phosphatase and tensin homo logdeleted on chromosome ten, PTEN)不僅是腫瘤抑制因子,而且在腎纖維化過程中表現出抗纖維化的作用。但是在糖尿病大鼠腎組織中PTEN表達顯著減少,使TGF-β過度激活磷脂酸肌醇 3 激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶 B (protein kinaseB, PKB/Akt)通路,促進DN的發生發展[1]。PTEN作為PI3K/Akt的負調控因子,共同參與了 DN小管上皮細胞的分化、脂質代謝以及系膜細胞增生肥大等生理活動[2]。預防緩解糖尿病的并發癥對于改善病人的生活質量具有非常重要的意義,苦瓜不僅有良好的食用價值,而且有抗病毒、抗癌、降血糖等多種藥用功效,然而至于苦瓜皂苷緩解糖尿病發展的機制以及它能否有效緩解糖尿病腎病的發生均尚未明確。
[0003]
【發明內容】
[0004]要解決的技術問題:本發明的目的是明確苦瓜皂苷在治療和緩解糖尿病腎病中的作用,進而明確苦瓜在治療糖尿病腎病藥物中的用途。
[0005]技術方案:本發明公開了苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,所述的治療糖尿病腎病藥物包括苦瓜皂苷和其他輔料。
[0006]優選的,所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,所述的治療糖尿病腎病藥物劑型包括口服制劑、吸入劑、注射劑、栓劑。
[0007]優選的,所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,所述的口服制劑包括片劑、丸劑、膠囊、顆粒、膏劑、脂質體、酊劑、湯劑。
[0008]優選的,所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中重量比為0.001wt%-50wt%o
[0009]進一步優選的,所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中重量比為0.01wt%-10wt%o
[0010]更進一步優選的,所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中重量比為0.lwt%_5wt%。
[0011]所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途,所述的其他輔料為粘合劑、潤滑劑、甜味劑、潤濕劑、載體、填充劑中的一種或幾種。
[0012]有益效果:本發明通過明確苦瓜皂苷在緩解和治療糖尿病腎病中的效果,進而對苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途進行開發,提出了含有苦瓜皂苷的治療糖尿病腎病藥物的新型藥物。
【附圖說明】
[0013]圖1為免疫組織化學(Envis1n法)檢測各組實驗小鼠腎組織中p_PI3Kρ85 (Υ458)、p-Akt (Ser 473)及 PTEN 三種蛋白的表達情況(400Χ)。
[0014]圖2為Western blotting檢測各組中相關蛋白的表達情況。
[0015]圖3為Western blotting檢測各組中相關蛋白及相對灰度值分析。
[0016]
【具體實施方式】
[0017]實施例1
一、材料
1.藥物苦瓜皂苷:相當于生藥71.9g/Kg,購于由遼寧省中藥現代化工程技術中心,用蒸餾水配制。
[0018]2.試劑:飼料配方基礎飼料78.8%、蛋黃粉10%、豬油10%、膽固醇1%、膽酸鈉0.2%);胰島素注射液購自南京新百藥業有限公司;鏈尿佐菌素(STZ)粉劑購自美國Sigma公司,格列本脲購自浙江嘉興生化制藥廠;ΡΤΕΝ、β-actin抗體購自Santa Cruz公司;SABC試劑盒和DAB試劑盒均購自武漢博士德生物技術有限公司;PI3K ρ85、ρ_ΡΙ3Κρ85 (Υ458)、Akt 和 p-Akt (Ser 473)抗體購自 B1world 公司;HRP 標記的二抗購自 Jackson公司。
[0019]3.動物:清潔級小鼠C57BL/6J,18_24g,實驗動物均為雄性小鼠,由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供,合格證號為SCXK(滬)2012-0002,飼養在室溫保持在22°C?25°C,濕度約50%的動物房中,每晝夜給予12h光照和12h黑暗。
[0020]二、方法
1.動物模型的制備和給藥:高脂飲食2個月聯合小劑量鏈尿佐菌素(STZ)制備糖尿病腎病小鼠模型,STZ注射劑量為85mg/kg,于高脂飲食誘導3周后開始注射,連續注射兩次,每次間隔三天,正常對照組注射等量的檸檬酸緩沖液。注射鏈脲佐菌素(STZ)3天后,禁食12h,尾靜脈取血測其空腹血糖>350mg/dl。實驗分為模型組(A組)、格列本脲組(B組)、正常對照組(C組)、苦瓜皂苷低劑量組(Dl組)、中劑量組(D2組)、高劑量組(D3組)。B組采用優降糖蒸餾水溶液0.16 g-lkg-1 d-1灌胃,連續給藥14天;D1組、D2組、D3組分別為給予苦瓜皂苷30、60、120mg-lkg-ld-l灌胃,連續給藥14天。
[0021]2.組織芯片制備及免疫組化:腎臟組織標本經4%多聚甲醛固定后常規石蠟包埋切片,HE染色后,在顯微鏡下標記定位,制備成(2X2)的組織陣列的獨立蠟塊(每個標本取直徑為1.6mm的組織芯片),芯片技術的專利號為:200920350099.2。免疫組化按Envis1n免疫組化法說明書進行。
[0022]3.免疫組化結果判定:PTEN、PI3K/Akt陽性表達于腫瘤細胞核及細胞漿呈現棕黃色顆粒為陽性信號。在圖像采集過程中保證設備參數一致性,每例標本在顯微鏡下隨機選取5個視野(X400),選擇視野中呈棕黃色陽性反應的區域并統計這些區域的累積光密度值(1D)和面積(Area),計算光密度平均值10D/area( mean density )即為該標本的免疫組化評分(IHS)。
[0023]4.組織蛋白提取及Western bloting:剪碎20mg?40 mg新鮮的腎臟組織,加入1.0 ml預冷的RIPA裂解液,置冰浴用勻漿器充分勻漿后,冰浴10 min。將勻漿液轉移至EP管中,12 000 Xg,4 °C離心15 min,取上清加等體積的2X loadding buffer,于100°C加熱5min,蛋白質樣品的分離用100 g/L SDS-PAGE,每泳道上樣量為20 μ g,100 V電壓,電泳90?120 min后,電轉印至PVDF膜上。將膜相應的一抗抗體,4 °C孵育16 h,然后與相應的HRP標志的IgG 二抗(1:10 000),室溫孵育I h ;然后與內參鼠抗β-a