血清脂類代謝物在構建預測妊娠期高血壓疾病嚴重程度的聯合診斷模型中的應用

本發明屬于生物醫藥，具體涉及一種血清脂類代謝物在構建預測妊娠期高血壓疾病嚴重程度的聯合診斷模型中的應用。

背景技術：

1、妊娠期高血壓疾病(hypertension?disorders?of?pregnancy，hdp)是與高血壓相關的一系列妊娠期疾病，主要指妊娠期收縮壓≥140mmhg或舒張壓≥90mmhg，伴有或不伴有蛋白尿或神經精神癥狀。hdp包括妊娠期高血壓、子癇前期、重度子癇前期、子癇、慢性高血壓合并妊娠、慢性高血壓并發子癇前期。但母兒結局和遠期預后無法通過上述分類來進行嚴格劃分，目前急需尋找更標準的指標來判斷疾病嚴重程度。疾病的嚴重程度不同，后期母兒結局不同。嚴重者會導致早產、胎兒生長受限、胎盤早剝、產后出血、遠期心血管事件等等。

2、hdp損傷全身血管內皮細胞，血壓逐步升高影響腎臟功能，尿蛋白是反映腎臟功能的有力指標，產科醫生根據患者尿蛋白的多少進行初步篩查，做出觀察、用藥、住院治療甚至緊急剖宮產的決定。尿蛋白是反映hdp嚴重程度的重要指標，也是醫生做出診斷決定的重要標志。因此，可以將尿蛋白的多少，如尿蛋白陰性、±、+歸為普通疾病組，2+、3+歸為疾病嚴重組。

3、目前認為hdp的發生源于胎盤局部缺血缺氧造成了氧化應激的增加，進而引起廣泛的全身炎癥反應、嚴重影響血管生成因子的信號傳導，繼而造成全身血管內皮功能障礙。疾病嚴重的患者胎盤缺血缺氧情況更加嚴重，導致母親全身各臟器功能紊亂和胎兒生長受限、胎兒宮內窘迫。

4、脂質代謝被認為在全身代謝功能中占有舉足輕重的地位。脂肪的積累可通過激活炎癥、免疫、線粒體功能障礙、活性氧生成等信號通路影響細胞功能，進而引發高血壓或其他心血管疾病。大量研究表明，hdp患者外周血中脂質代謝物水平升高，bmi值更高的患者疾病嚴重的傾向更大，這意味著越嚴重的患者的外周血中脂質代謝物水平更高。但是，尚缺乏具有預測hdp嚴重程度的脂質代謝物模型。因此，挖掘具有預測價值的脂質代謝物并構建預測模型，在對hdp患者分級治療、判斷遠期預后有重要意義。

技術實現思路

1、針對現有預測妊娠期高血壓疾病的生物標志物方法的缺陷，本發明的目的在于提供一種血清脂類代謝物在構建預測妊娠期高血壓疾病嚴重程度的聯合診斷模型中的應用。

2、為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

3、本發明提供一種血清脂類代謝物在構建預測妊娠期高血壓疾病嚴重程度的聯合診斷模型中的應用，所述血清脂類代謝物為棕櫚酸、油酸、二十二碳三烯酸、二十二烯酸、肉堿c16:0和肉堿c22:4的組合。

4、優選地，所述聯合診斷模型包括試劑盒、芯片。

5、優選地，所述聯合診斷模型用于檢測棕櫚酸、油酸、二十二碳三烯酸、二十二烯酸、肉堿c16:0和肉堿c22:4的含量水平以診斷妊娠期高血壓疾病嚴重程度。

6、優選地，所述聯合診斷模型的構建方法包括：

7、步驟一，進行妊娠期高血壓疾病患者外周血血清樣本的采集和分離；將尿蛋白陰性、±、+的患者歸為普通疾病組，2+、3+歸為疾病嚴重組；

8、步驟二，進行血清樣本親水性物質和疏水性物質的提取；

9、步驟三，采用超高效液相色譜和串聯質譜采集親水性物質和疏水性物質；

10、步驟四，利用三重四級桿質譜的多反應監測模式進行代謝物定量；

11、步驟五，進行特征選擇和聯合診斷模型構建。

12、優選地，步驟一中，所述進行外周血血清樣本的采集和分離包括：

13、使用含分離膠的促凝管采集妊娠期高血壓疾病患者外周血，靜置后吸取上層血清，分裝到離心管中，迅速轉入液氮速凍，過夜后于-80℃冰箱中凍存。

14、優選地，步驟二中，所述血清樣本親水性物質和疏水性物質的提取包括：

15、(1)親水性物質提取：

16、從-80℃冰箱中取出樣本放在冰上解凍，采用含有乙腈和甲醇的內標提取液在低溫下進行離心，移取上清液到對應進樣瓶內襯管中，用于上機分析；

17、(2)疏水性物質提取：

18、從-80℃冰箱中取出樣本放在冰上解凍，采用含有甲基叔丁基醚和甲醇的內標脂質提取液在低溫下進行離心和濃縮，濃縮至完全干后加入含有乙腈和異丙醇的脂質復溶液進行離心，移取上清液用于上機分析。

19、優選地，步驟四中，所述利用三重四級桿質譜的多反應監測模式進行代謝物定量包括：

20、四級桿首先篩選目標物質的前體離子，排除掉其他分子量物質對應的離子以初步排除干擾；前體離子經碰撞室誘導電離后斷裂形成很多碎片離子，碎片離子再通過三重四級桿過濾選擇出所需要的一個特征碎片離子，排除非目標離子干擾；獲得不同樣本的代謝物質譜分析數據后，對所有物質質譜峰進行峰面積積分，并對其中同一代謝物在不同樣本中的質譜出峰進行積分校正。

21、優選地，步驟五中，所述進行特征選擇和模型構建包括：

22、(1)處理質譜數據，通過三重四級桿篩選出每個物質的特征離子，在檢測器中獲得特征離子的信號強度，打開樣本下機質譜文件，進行色譜峰的積分和校正工作，每個色譜峰的峰面積代表對應物質的相對含量，最后導出所有色譜峰面積積分數據保存；

23、(2)篩選基于opls-da模型得到的變量重要性投影大于1，且在疾病嚴重組中上調的血清脂類代謝物；

24、(3)使用kegg分析富集血清脂類代謝物富集到的通路，反向尋找與之高度相關的6種代謝物，包括：棕櫚酸、油酸、二十二碳三烯酸、二十二烯酸、肉堿c16:0和肉堿c22:4；

25、(4)在疾病嚴重組中上調的代謝物中，尋找與上述6種代謝物的交集代謝物，最終構建6種血清脂類代謝物用于妊娠期高血壓疾病嚴重程度的聯合診斷模型。

26、本發明取得的有益效果有：

27、1、本發明專注于預測妊娠期高血壓疾病的嚴重程度，而不僅僅是診斷是否存在該疾病，為臨床提供了更為精細的風險評估工具，有助于及時調整治療策略，預防嚴重并發癥。

28、2、本發明通過精心選擇的六種血清脂類代謝物(棕櫚酸、油酸、二十二碳三烯酸、二十二烯酸、肉堿c16:0和肉堿c22:4)作為標志物，這些代謝物與疾病嚴重程度密切相關，能夠更準確反映疾病進程和病理狀態，提高了診斷的特異性和準確性。

29、3、本發明將患者按尿蛋白等級分為普通疾病組和疾病嚴重組，這一分類依據臨床實踐，使研究更具針對性，便于更精確地評估模型在不同病程階段的適用性。

30、4、本發明聯合診斷模型結合了多種分析技術(如uplc-ms/ms、三重四級桿質譜等)，以及先進的生物信息學方法(opls-da模型、kegg通路分析)，能夠綜合分析代謝物變化，不僅實現定量分析，還能深入探究代謝物變化背后的生物學機制，增強模型的科學性和實用性。

31、5、本發明從樣本采集到分析的全過程嚴格控制，包括低溫處理、高效的親水性和疏水性物質提取方法，以及嚴格的質譜定量步驟，確保了數據的高質量和可重復性，提升了診斷模型的穩定性和可靠性。

32、6、本發明通過特征選擇和模型構建過程中嚴格的統計分析與驗證(如變量重要性投影閾值設定)，確保了最終模型的穩健性，能有效區分不同疾病嚴重程度的患者，為臨床決策提供有力支持。