本發明涉及用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀的藥物、用于其的構建體和方法。
背景技術:
1、遺傳性疾病是由基因中發生了某種異常,其基因表達降低或消失,或者基因表達量增加等基因未正常表達而引起的。另外,在這樣的遺傳性疾病中,無義突變型的遺傳性疾病是由于基因上的點突變而形成早期終止密碼子,阻礙蛋白質的表達而引起的疾病。在mrna上,當終止密碼子出現在從原始終止密碼子起的上游側(5’末端側)時,翻譯得到的蛋白質變短,不能得到功能性蛋白質,表現出遺傳性疾病。
2、另外,由于移碼突變,也有在本來的位置以外出現終止密碼子的情況,在基因中發生3的倍數以外數量的堿基的缺失、插入等,翻譯時的閱讀框架(reading?frame)偏離,由此可能發生遺傳性疾病。
技術實現思路
1、解決問題的方法
2、因此,本發明提供以下內容。
3、(項目1)
4、一種藥物,其特征在于,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該藥物包含:
5、cas核酸酶和/或包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
6、包含與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸,
7、其中,該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
8、(項目2)
9、根據上述項目所述的藥物,其中,該藥物包含載體,該載體包含構建體,所述構建體包含:對所述細胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
10、該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
11、(項目3)
12、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
13、(項目4)
14、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
15、(項目5)
16、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述載體包含腺相關病毒(aav)載體。
17、(項目6)
18、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
19、(項目6a)
20、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
21、(項目6b)
22、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
23、(項目6c)
24、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分(mit?specificity?score)值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
25、(項目a1)
26、一種構建體,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該構建體包含在載體中,該構建體包含:對細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使導入該載體后的該細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
27、該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
28、(項目a2)
29、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
30、(項目a3)
31、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
32、(項目a4)
33、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,所述載體包含腺相關病毒(aav)載體。
34、(項目a5)
35、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
36、(項目a5a)
37、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
38、(項目a5b)
39、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
40、(項目a5c)
41、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
42、(項目b1)
43、一種構建體,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該構建體包含:對細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在該細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
44、該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
45、(項目b2)
46、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
47、(項目b3)
48、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
49、(項目b4)
50、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
51、(項目b4a)
52、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
53、(項目b4b)
54、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
55、(項目b4c)
56、根據上述項目中任一項所述的構建體,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
57、(項目cc1)
58、一種藥物,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該藥物包含:
59、cas核酸酶,
60、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna,和
61、指示書,該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位的方式進行施用。
62、(項目cc2)
63、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以試劑盒提供,該試劑盒在不同的區域中包含:
64、所述cas核酸酶,和
65、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna。
66、(項目cc3)
67、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物作為組合提供,所述組合組合地包含:
68、所述cas核酸酶,和
69、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna。
70、(項目cc4)
71、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以合劑提供,該合劑混合地包含:
72、所述cas核酸酶,和
73、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna。
74、(項目cc5)
75、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
76、(項目cc5a)
77、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
78、(項目cc5b)
79、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
80、(項目cc5c)
81、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
82、(項目cd1)
83、一種藥物,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該藥物包含:
84、包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸,
85、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna,和
86、指示書,該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位的方式進行施用。
87、(項目cd2)
88、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以試劑盒提供,該試劑盒在不同的區域中包含:
89、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
90、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna。
91、(項目cd3)
92、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物作為組合提供,該組合組合地包含:
93、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
94、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna。
95、(項目cd4)
96、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以合劑提供,該合劑混合地包含:
97、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
98、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna。
99、(項目cd5)
100、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物包含載體,該載體包含構建體,該構建體包含:對所述細胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
101、該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
102、(項目cd6)
103、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
104、(項目cd7)
105、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
106、(項目cd8)
107、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
108、(項目cd8a)
109、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
110、(項目cd8b)
111、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
112、(項目cd8c)
113、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
114、(項目ce1)
115、一種藥物,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該藥物包含:
116、包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸,
117、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸,和
118、指示書,該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位的方式進行施用。
119、(項目ce2)
120、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以試劑盒提供,該試劑盒在不同的區域中包含:
121、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
122、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸。
123、(項目ce3)
124、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物作為組合提供,該組合組合地包含:
125、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
126、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸。
127、(項目ce4)
128、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以合劑提供,該合劑混合地包含:
129、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸,和
130、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸。
131、(項目ce5)
132、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物包含載體,該載體包含構建體,該構建體包含:對所述細胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
133、該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
134、(項目ce6)
135、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
136、(項目ce7)
137、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
138、(項目ce8)
139、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
140、(項目ce8a)
141、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
142、(項目ce8b)
143、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
144、(項目ce8c)
145、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
146、(項目cf1)
147、一種藥物,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該藥物包含:
148、cas核酸酶,
149、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸,和
150、指示書,該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位的方式進行施用。
151、(項目cf2)
152、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以試劑盒提供,該試劑盒在不同的區域中包含:
153、所述cas核酸酶,和
154、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸。
155、(項目cf3)
156、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物作為組合提供,該組合組合地包含:
157、所述cas核酸酶,和
158、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸。
159、(項目cf4)
160、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物以合劑提供,該合劑混合地包含:
161、所述cas核酸酶,和
162、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的核酸序列的核酸。
163、(項目cf5)
164、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述藥物包含載體,該載體包含構建體,該構建體包含:對所述細胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
165、該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
166、(項目cf6)
167、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
168、(項目cf7)
169、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
170、(項目cf8)
171、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
172、(項目cf8a)
173、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
174、(項目cf8b)
175、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
176、(項目cf8c)
177、根據上述項目中任一項所述的藥物,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
178、(項目c1)
179、一種方法,其用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀,該方法包括:
180、將載體導入該細胞中的步驟,其中該載體包含構建體,該構建體包含對該細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列;以及
181、將所述細胞配置在發生所述切割的條件的步驟;
182、其中,該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
183、(項目c2)
184、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
185、(項目c3)
186、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,由所述移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網膜色素變性。
187、(項目c4)
188、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,所述載體包含腺相關病毒(aav)載體。
189、(項目c5)
190、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
191、(項目c5a)
192、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
193、(項目c5b)
194、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
195、(項目c5c)
196、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
197、(項目d1)
198、一種制造用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療狀態、疾病、障礙或癥狀的產品的方法,該方法包括:
199、檢測成為該狀態、疾病、障礙或癥狀的原因的一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變的步驟,
200、基于該移碼突變,設計構建體的步驟,其中,該構建體包含:對細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,
201、制造該構建體并插入到載體中的步驟,以及
202、制造包含該載體的產品的步驟;
203、其中,該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
204、(項目d2)
205、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。
206、(項目d3)
207、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,所述載體包含腺相關病毒(aav)載體。
208、(項目d4)
209、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中滿足規定的得分。
210、(項目d4a)
211、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50%以上。
212、(項目d4b)
213、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna在grna的設計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90%以上。
214、(項目d4c)
215、根據上述項目中任一項所述的方法,其中,與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30%以上,或者顯示出在其它設計工具中的其相應值以上。
216、(項目ea1)
217、一種用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療患者中一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀的方法,該方法包括:
218、對來自該患者的核酸中的該靶核酸序列進行測序的步驟,
219、基于該測序,選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟,
220、將載體導入該細胞中的步驟,其中該載體包含構建體,該構建體包含對該細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,以及
221、將所述細胞配置在發生所述切割的條件的步驟;
222、其中,該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
223、(項目ea2)
224、根據上述項目中所述的方法,其還包括上述項目的任意一個或多個特征。
225、(項目eb1)
226、一種載體的用途,其用于制造用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療患者中一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀的藥物,其中,該載體包含構建體,該構建體包含對該細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的grna的序列,該改變、預防或治療通過包括下述步驟的方法來實現:
227、對來自該患者的核酸中的該靶核酸序列進行測序的步驟,
228、基于該測序,選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟,
229、將該載體導入該細胞中的步驟,以及
230、將所述細胞配置在發生所述切割的條件的步驟;
231、其中,該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
232、(項目eb2)
233、根據上述項目中所述的用途,其還包括上述項目的任意一個或多個特征。
234、(項目ec1)
235、一種用于通過切割細胞內核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預防或治療患者中一個或多個堿基的插入或缺失導致的移碼突變引起的狀態、疾病、障礙或癥狀的藥物,該藥物包含:
236、cas核酸酶,
237、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結合的grna,和
238、指示書,該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位的方式進行施用,
239、該改變、預防或治療通過包括下述步驟的方法來實現:
240、對來自該患者的核酸中的靶核酸序列進行測序的步驟,
241、基于該測序,選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟,
242、將載體導入該細胞中的步驟,其中,該載體包含構建體,該構建體包含對該細胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導入該載體后的細胞中的grna能夠表達的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結合的該grna的序列,以及
243、將所述細胞配置在發生所述切割的條件的步驟;
244、其中,該構建體被構成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產生切割部位。
245、(項目ec2)
246、根據上述項目中所述的藥物,其還包括上述項目的任意一個或多個特征。
247、在本發明中,上述一個或多個特征除了寫明的組合之外,還旨在可以進一步組合來提供。需要說明的是,根據需要,在閱讀并理解以下的詳細說明后,本領域技術人員能夠認識到本發明的進一步的實施方式及優點。
248、需要說明的是,通過參照以下的發明的實施方式的項及附圖,上述以外的本發明的特征及顯著的作用、效果,對本領域技術人員來說將變得明確。
249、發明的效果
250、根據本發明,通過以細胞內基因組中的靶核酸序列為靶,將發生了移碼突變的基因復原為正常序列或與其近似的序列,從而可廣泛應用于各種遺傳性疾病的治療或許多突變矯正。