花葉假杜鵑在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用及藥物的制作方法

本發明涉及藥物領域，具體而言，涉及一種花葉假杜鵑在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用及藥物。

背景技術：

花葉假杜鵑為雙子葉植物爵床科假杜鵑屬植物花葉假杜鵑(barlerialupulinalindl.)的干燥全草，鮮用或曬干。花葉假杜鵑又名七星劍、血路草、刺血紅等。有關花葉假杜鵑的藥用記載，始見于廣州空軍《常用中草藥手冊》。嶺南民間以地上部分入藥。其性溫，味辛、苦，入心、肝經，通經活絡、續筋骨、解毒消腫，主治毒蛇咬傷，犬咬傷，跌打損傷，癰腫，外傷出血等。另外，花葉假杜鵑的提取物具有抗氧化，抗潰瘍，抗糖尿病的功效。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種花葉假杜鵑在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用及藥物，其旨在提供一種用于制備治療中樞神經變性疾病藥劑的藥物；提供一種花葉假杜鵑的新的用途。

本發明提供一種技術方案：

花葉假杜鵑在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用。

進一步地，上述花葉假杜鵑的提取物在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用；

花葉假杜鵑的提取物主要通過以下步驟制得：將花葉假杜鵑采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，花葉假杜鵑與溶劑的重量比為1:5～20。

進一步地，上述神經退行性疾病包括帕金森病、阿爾茲海默病、亨廷頓病和tau蛋白病中的至少一種。

本發明還提供一種技術方案：

一種預防和/或治療神經退行性疾病的藥物，藥物主要由包括花葉假杜鵑的原料制成。

進一步地，上述藥物主要通過以下步驟制得：將花葉假杜鵑采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，花葉假杜鵑與溶劑的重量比為1:5～20。

進一步地，上述溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或者多種。

進一步地，上述溶劑為質量分數為30-95％乙醇水溶液。

進一步地，上述將花葉假杜鵑在30-90℃下超聲提取15-60min。

進一步地，上述分離得到提取液后還包括對提取液濃縮、干燥。

進一步地，上述對提取液進行蒸發濃縮、減壓濃縮或者膜濃縮；對濃縮后的提取液進行常壓干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥或者噴霧干燥。

本發明提供的花葉假杜鵑在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用及藥物的有益效果是：

發明人發現花葉假杜鵑及其提取物能夠用于制備治療或者預防中樞神經元逐漸發生變性、凋亡的藥物中；其能夠保持神經細胞健康形態和增殖，阻止或延遲神經細胞死亡，以延緩中樞神經變性疾病的發病時間。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1顯示了mtt法檢測的實施例1提供的藥物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。

圖2顯示了顯微鏡下觀察的實施例1提供的藥物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。

具體實施方式

為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

下面對本發明實施例的花葉假杜鵑在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用及藥物進行具體說明。

進一步地，上述神經退行性疾病為中樞神經變性疾病。

進一步地，上述花葉假杜鵑的提取物在制備預防和/或治療神經退行性疾病的藥物中的應用；

花葉假杜鵑的提取物主要通過以下步驟制得：將花葉假杜鵑采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，花葉假杜鵑與溶劑的重量比為1:5～20。進一步地，花葉假杜鵑與溶劑的重量比為1:10-15。

上述溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或者多種。

進一步地，上述神經退行性疾病包括帕金森病、阿爾茲海默病、亨廷頓病和tau蛋白病中的至少一種。具體地，tau蛋白病包括額顳癡呆、皮層基底節變性、皮克氏病、進行性核上性麻痹等。

在本發明的其他實施例中，上述神經退行性疾病也包括威爾遜氏病、朊病毒病及其他癡呆包括血管性癡呆、肌萎縮側索硬化(als)、急性中風(腦中風引起的神經損傷)及其他外傷性損傷；腦血管意外(如，年齡相關性黃斑變性)；腦和脊髓外傷、周圍神經病、視網膜病和青光眼。

中樞神經變性疾病是一組以中樞神經系統神經元逐漸發生變性、凋亡所導致的神經退行性疾病或神經病癥。其病因大多不明，發病機制和病理表現復雜，臨床表現各異。該組疾病多見于中老年，呈慢性或亞急性起病，進行性加重，病程較長，且多數疾病和病癥之間相互重疊，如10％左右的帕金森病合并癡呆，太平洋關島的阿爾茨海默、帕金森綜合征等。由于缺乏特異的生化、影像學和病理生理學特征，往往主要依靠臨床醫生的經驗作出診斷。除少數疾病(如帕金森病)依靠藥物或手術可能暫時改善臨床癥狀外，對大多數疾病目前尚無特效的治療方法。例如缺血性中風的治療策略主要包括溶栓治療和神經保護治療。溶栓藥物阿替普酶(rt-pa)是首個也是迄今為止唯一被fda批準用于治療中風的溶栓藥物。盡管rt-pa已經被證實能有效治療急性缺血性中風，但其治療時間窗窄，作用機理不明確，有出血風險，因此只有少數病人能夠及時接受rt-pa的有效治療。復方左旋多巴是治療pd的首選藥物，但患者長期服用會出現開關現象、劑末惡化等嚴重并發癥。因此開展神經保護性治療，可能推遲發病時間或延緩病情的發展，已成為當前研究的熱點。

神經保護治療是通過阻礙缺血級聯反應涉及的一種或多種機制，在初始階段保護缺血引起的半暗帶神經元損傷，從而阻止或延遲神經細胞死亡。可以通過藥物實現血液迅速回流入缺血組織，從而抑制缺血所引起的生化水平、代謝水平和細胞水平上的損害。腦缺血觸發了復雜的病理生化級聯反應，神經保護治療的途徑多樣，環節不同，神經保護的前景是很可觀的。

經過發明人的研究以及探討發現，花葉假杜鵑在制備治療、輔助治療或預防神經退行性疾病的藥物中具有較好的療效。花葉假杜鵑對中樞神經元逐漸發生變性、凋亡具有療效。花葉假杜鵑有助于保護神經細胞免受細胞損傷和/或抵抗神經變性過程以及神經元功能損害的治療劑或活性物質。

本發明還提供一種技術方案：

一種預防和/或治療神經退行性疾病的藥物，藥物主要由包括花葉假杜鵑的原料制成。進一步地，上述藥物主要通過以下步驟制得：將花葉假杜鵑采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，花葉假杜鵑與溶劑的重量比為1:5～20。

進一步地，上述溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或者多種。

進一步地，上述溶劑為質量分數為30-95％乙醇水溶液。在本實施例中，為質量分數95％的乙醇水溶液。

進一步地，上述將花葉假杜鵑在30-90℃下超聲提取15-60min。

進一步地，上述分離得到提取液后還包括對提取液濃縮、干燥。

進一步地，上述對提取液進行蒸發濃縮、減壓濃縮或者膜濃縮；具體地，采用減壓濃縮。在本發明較佳的實施例中，采用旋轉蒸發儀蒸發濃縮。

對濃縮后的提取液進行常壓干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥或者噴霧干燥。對濃縮后的提取液進行常壓干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥或者噴霧干燥。具體地，在本發明中采用減壓干燥。

花葉假杜鵑對中樞神經元逐漸發生變性、凋亡具有療效。花葉假杜鵑的提取物或者藥物具有保護神經元損傷，從而阻止或延遲神經細胞死亡的效果；能推遲發病時間或延緩病情的發展。花葉假杜鵑制備的藥物能夠細胞保持健康形態和增殖，抑制細胞凋亡；該藥物對于神經細胞具有顯著的保護作用。

此外，在其他實施例中，該藥物還包括藥學上可接受的載體或輔料。

例如：稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

此外，為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。如：葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。

進一步地，本發明實施例的藥物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等。可以是普通制劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。

此外，本發明實施例的藥物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥。

承上所述，在給藥過程中，可改變藥物組合物中各活性成分的實際劑量水平，以便所得的活性化合物量能有效針對具體患者、組合物和給藥方式得到所需的治療反應。劑量水平須根據具體化合物的活性、給藥途徑、所治療病況的嚴重程度以及待治療患者的病況和既往病史來選定。但是，本領域的做法是，化合物的劑量從低于為得到所需治療效果而要求的水平開始，逐漸增加劑量，直到得到所需的效果。

以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取花葉假杜鵑25g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入300ml95％乙醇水溶液，于60℃超聲提取30min，過濾，用旋轉蒸發儀濃縮成浸膏狀后置于蒸發皿中蒸干，于恒溫烘箱內(50℃)烘至恒重。

實施例2

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取花葉假杜鵑10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入50ml30％乙醇水溶液，于30℃超聲提取15min，過濾，減壓濃縮成浸膏狀后置于蒸發皿中蒸干，于恒溫烘箱內(50℃)烘至恒重。

實施例3

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取花葉假杜鵑10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入200ml60％1，2-丙二醇水溶液，于90℃超聲提取60min，過濾，減壓濃縮成浸膏狀后真空冷凍干燥至恒重。

實施例4

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取花葉假杜鵑10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入100ml乙酸乙酯，于60℃超聲提取45min，過濾，膜濃縮后減壓干燥至恒重。

實施例5

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取花葉假杜鵑10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入150ml水，于45℃超聲提取60min，過濾，用旋轉蒸發儀濃縮成浸膏狀后置于蒸發皿中蒸干，于恒溫烘箱內(50℃)烘至恒重。

試驗例

本試驗例對實施例1得到的藥物進行神經保護測試。

1.ht-22神經細胞的培養

將(三批)ht-22細胞用胰酶(0.25％，1ml)從中皿消化下來(1min內)，吹散成單細胞懸液，加入少量胎牛血清fbs(100μl)。1000rpm離心5min，去上清，將細胞沉淀分散在3ml完全培養基中，取1ml細胞懸液加入到24ml完全培養基中，來回顛倒10次混勻，取0.1ml用于計數。稀釋至適當的細胞濃度(8×10⁴cell/ml)后，48孔板先加50μl培養基，使培養基徹底分布于孔板邊緣。種植在48孔板中(三批細胞三塊板，100μl，8×10⁴cell/ml)。邊種邊旋轉離心管，種一半孔用力吹打細胞，使之均勻，同時讓細胞懸液鋪滿孔板底部，全部種完后在顯微鏡下觀察細胞分散是否均勻，十字搖勻使細胞在孔板底部分散均勻。放置24小時(細胞融合度約為30～40％)用于實驗。

2.mtt法測試

將實施例1中獲得藥物200μg分散于2ml完全培養基中，用于3×48孔板換液，做mtt實驗。取種好細胞的48孔板，分為control(對照組)，glutamate(谷氨酸)組，nac(n-acetylcysteine)(n-乙酰半胱氨酸)組，trolox(水溶性維生素e)組和樣品組(實施例1提供的藥物組)。每組三個復孔，培養基換液，每孔200μl，每次換液前，吹打培養基，使藥物分散均勻。換液完37℃孵育1h后加入谷氨酸使終濃度達到3mm(6μl)。搖勻后放置在37℃培養24h。觀察細胞形態，并檢測細胞存活率(mtt法)，然后用20μl的mtt(5mg/ml)避光37℃孵育2h，輕輕吸去液體，每孔加200μl的dmso，搖床5min搖勻。然后用多功能酶標儀計算490nm下各吸光值(下面圖中數據均為490nm下測得，損傷組細胞存活率約為control組的20％)。取三孔od值，求平均值，減去空白dmso的od值，然后除以對照組的平均值標準化。三批細胞的mtt的od值的平均值用sigmaplot12.5軟件做統計差異。

統計結果如表1所示，表1示出了control組、glutamate組、nac組，trolox組和樣品組中細胞存活率。

表1各實驗組細胞存活率對比(n＝3)

將表1中的實驗數據繪制柱狀圖，結果如圖1所示，具體地，圖1顯示了mtt法檢測的花葉假杜鵑提取物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。圖中：“+”代表相應的試驗組有相應的組分，“-”代表相應的試驗組沒有相應的組分。其中，**p<0.01，***p<0.001與谷氨酸組比較(單因素方差分析，dunnett法)。trolox(10μm)作為陽性對照使用。

由圖1的結果顯示，實施例1提供的藥物對于ht-22神經細胞具有顯著的保護作用。

3.顯微鏡下觀察的花葉假杜鵑提取物的保護作用

實施例1提供的藥物20μg分散于2ml完全培養基中，用于3×48孔板換液。取種好細胞的48孔板，分別是control組，glutamate組，glu(glutamate)+nac(n-acetylcysteine)組，glu+trolox和glu+樣品組(實施例1提供的藥物組)，每組三個復孔，培養基換液，每孔200μl，每次換液前，吹打培養基，使藥物分散均勻。換液完37℃孵育1h后加入谷氨酸使終濃度達到3mm(6μl)。搖勻后放置在37℃培養24h。最后在顯微鏡下觀察細胞形態，并拍照，結果如圖2所示。圖2顯示了顯微鏡下觀察的花葉假杜鵑提取物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。由圖2可知，實施例1提供的藥物可以使細胞保持健康形態和增殖，抑制了l-glutamate(l-谷氨酸)引起的細胞凋亡。

從本實驗例可知，實施例1提供的藥物能夠細胞保持健康形態和增殖，抑制細胞凋亡；該藥物對于ht-22神經細胞具有顯著的保護作用。

以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。