一種天南星炮制方法及其制品與流程

本發明涉及一種中藥炮制方法，具體涉及一種天南星的炮制方法及其制品。

背景技術：

天南星為臨床常用中藥，來源于天南星科植物天南星arisaemaerubescens(wall.)schott、異葉天南星a.heterophyllumblume、東北天南星a.amurensemaxim.干燥塊莖，其性溫，味苦、辛，具有燥濕化痰，祛風解痙之功能，主治風疾眩暈、頑痰咳嗽及由于風邪夾痰、寒痰所引起眾多疾病。然而，文獻記載天南星有毒，毒性特征主要表現為對皮膚黏膜強烈刺激性，可致口唇腫痛、失音、流涎、痙攣、呼吸困難，甚至窒息死亡，國家衛生部早已把天南星列入28種毒性中藥之一，因此必須經過炮制減毒后方能內服。天南星毒性問題早已被歷代醫藥學家所認識，但對于引起毒性作用的物質卻一直沒有被確定下來，尤其是國內對天南星科常用藥用植物半夏、天南星等藥材的刺激性或毒性物質一直存在較大爭議，早期有學者推測認為天南星藥材中含有的生物堿或苷類成分為其麻辣刺激性的主要成分。國內對天南星科植物毒性物質研究開始較晚，起步于上世紀80年代，真正對毒性物質深入研究開始于2000年以后，目前取得顯著的研究成果。鐘凌云等查閱了國內外對于天南星科植物的刺激性成分研究的相關文獻，均認為刺激性成分是天南星科植物中所含有的特殊生物代謝產物草酸鈣針晶，刺激性被認為是草酸鈣針晶單獨起作用、草酸鈣針晶與酶類物質的共同作用以及草酸鈣針晶通過特殊的黏液細胞起作用。為了深入探討研究天南星科植物中刺激性物質，吳皓等對天南星科幾種常用藥材中草酸鈣針晶進行提取分離，并采用藥理學實驗方法進一步證明了產生刺激性作用的主要成分為草酸鈣針晶，被稱為“毒針晶”。其組成成分分析表明，毒針晶是由草酸鈣和蛋白質組成，并含有微量多糖。毒性的產生是由于針晶的物理刺激與蛋白的化學刺激共同作用結果。其中，針晶是產生刺激性毒性的主要物質基礎，刺激毒性與其結構形態有關，傳統炮制過程中使用明礬減毒機制可能是其al³⁺加速破壞了草酸鈣針晶的形態結構。為了進一步研究其毒性特點，探討針晶中所含凝集素蛋白與毒性的相關性，研究結果表明，天南星科四種有毒中藥毒針晶中均帶有共性的凝集素蛋白成分，且是毒針晶蛋白中的主要毒蛋白，80℃以下具有凝集活性，50℃以下凝集活性最強，85℃以上凝集活性全部喪失，而且毒針晶的毒性與毒針晶中帶有的凝集素蛋白含量呈正相關。毒針晶產生刺激性毒性的機制在于毒針晶刺入組織后，產生機械刺激性，同時毒針晶上的凝集素蛋白隨毒針晶進入組織，誘導中性粒細胞向刺入部位遷移，促使巨噬細胞活化，并刺激巨噬細胞釋放炎癥介質及導致嚴重的組織水腫和炎癥反應。

現行版藥典中，收載天南星的炮制品有制南星和膽南星兩種，其中制南星是天南星藥材主流炮制品，多采用藥典法進行炮制，廣泛應用于臨床。目前除藥典炮制法外，制南星還存在其它幾種炮制方法，現將制南星炮制方法歸納總結如下：

(1)藥典炮制法：采用中藥炮制復制法，即取凈選天南星，大小分檔后，用清水浸泡，每日換水2～3次，如水面起白沫，換水后加白礬(每100kg天南星，加白礬2kg)，泡1d后，再換水漂至切開口嘗微有麻舌感時取出。另取生姜片、白礬置鍋內加適量水煮沸后，倒入天南星共煮至內無干心時取出，除去姜片，曬至四至六成干，切薄片，干燥即得。該方法在整個炮制過程中，存在諸多弊端。首先，藥材在水中經過長時間浸泡，會導致藥材中水溶性成分流失，夏季還會發霉變質；其次，藥材在姜礬水溶液中經過長時間加熱共煮，會導致藥材中對熱不穩定成分的破壞；再次，在炮制過程中，使用白礬作為輔料，會使炮制品中a1³⁺含量增加，a1³⁺的攝入量過多，會引起大腦思維、意識及記憶等神經功能的損傷，甚至會引起老年癡呆；最后，整個炮制過程所需時間較長，炮制各環節控制多依靠經驗進行判斷，炮制品質量控制缺乏科學性。

(2)制南星的炮制方法：取生天南星過篩，按大小分開；將凈選過的天南星放入洗藥機，用流動水快速清洗干凈；將清洗過的天南星置于潤藥機內進行熱潤，加壓0.4mpa，溫度50℃，加水量為天南星的4倍，大者浸潤時間2小時，小者浸潤1小時，浸泡至透心為度；將浸潤過的天南星取出濾干，轉入至用水煮沸的生姜片和白礬的水液中，每100kg生品用生姜12.5kg，白礬6kg，煮沸2小時，水液面要高于藥物；煮制后，取出洗凈，干燥至四至六成干，切成薄片，于60℃真空度為0.04mpa下烘干。該炮制方法雖然能夠通過加壓、真空一定程度縮短潤藥和干燥藥材時間，調高炮制效率，但存在與藥典炮制方法同樣的缺點，達不到科學炮制的目的。

(3)天南星的中藥炮制方法：取天南星生品置于密閉容器中，加體積比濃度為65％～80％的乙醇溶液悶潤36～96小時；將悶潤后的天南星取出置煮制容器中，加生姜汁，混勻，煮至姜汁被吸干，晾至四至六成干，干燥得天南星炮制品。該炮制方法雖然采用乙醇溶液悶潤藥材，減少了傳統炮制方法中長時間水浸泡過程中而致的有效成分損失，但藥材組織細胞中草酸鈣毒針晶的結構沒有得到破壞，達不到最佳減毒效果，存在一定弊端。

(4)一種天南星的炮制方法：取重量份數為80～120份天南星，加清水至浸沒天南星，浸泡一天至透撈出；取重量份數為5～15份生石灰塊，加水至浸沒生石灰塊，調成混懸液，過篩得石灰液；將石灰液加到已浸透的天南星中，至浸沒天南星，攪勻浸制，干燥即得成品。采用本法炮制天南星，雖然未使用白礬作為輔料，會消除a1³⁺帶來的毒副作用，但同樣也存在諸多弊端。首先，藥材在水中經過長時間浸泡，夏季不但會發霉變質，還會導致藥材中水溶性成分流失；其次，炮制過程中，使用強堿性石灰液浸泡藥材，會導致藥材中黃酮類成分結構破壞或流失，影響藥效；最后，藥材在強堿溶液中浸泡，雖然能使毒針晶中凝集素蛋白變性，但草酸鈣針晶的結構沒有破壞，達不到徹底減毒的目的。

根據目前對天南星藥材的毒性作用及毒性物質的認識，本發明在現有制南星炮制方法的基礎上，通過科學實驗研究，對原有的炮制方法進行改進并優化，使制南星炮制方法更為科學合理，以期更好地實現減毒增效目的，進而保證制南星炮制品質量，提高其臨床療效。

技術實現要素：

為克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種天南星炮制方法及其制品。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種天南星炮制方法，包括如下步驟：

(1)取天南星干燥塊莖，置于壓力為0.15±0.02mpa的蒸制容器內蒸至內無干心；

(2)將經蒸制后的天南星切成薄片，干燥；

(3)將酸性乙醇水溶液均勻噴灑至干燥后的天南星薄片上，拌勻，立即放置在50±5℃的密閉環境中，悶潤，取出干燥即得制南星。

優選的，步驟(1)中蒸制溫度為121±10℃。

優選的，步驟(1)中蒸制時間為10～15min。

優選的，步驟(2)中天南星薄片的厚度為1-2mm。

優選的，步驟(3)中酸性乙醇水溶液的ph為4±0.5，該溶液由乙醇及鹽酸混合而成。

優選的，步驟(3)中燜潤時間為48±4h。

優選的，步驟(3)中酸性乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為50％。

優選的，步驟(3)中酸性乙醇水溶液的質量為干燥后的天南星薄片質量的0.5～0.6倍。

本發明還提供了一種天南星制品，按照如上所述的任一種方法制備得到。

本發明基于藥材組織中草酸鈣晶體在酸性條件下易于溶解，凝集素蛋白在加熱和酸性乙醇溶液中變性失去活性的性質，采用酸性乙醇水溶液作為炮制輔料，以炮制品中ca²⁺含量變化為評價指標，通過對炮制過程中乙醇溶液的濃度、乙醇溶液的ph、密閉悶潤溫度及悶潤時間四個主要影響因素進行考察，優選得到制南星的一種最佳炮制方法。

本發明在現有天南星炮制方法的基礎上，打破了傳統觀念的束縛，針對目前天南星幾種炮制方法的優點和不足，及目前對天南星藥材的毒性作用及毒性物質的認識，通過科學實驗研究，對原有的炮制方法進行改進并優化，使天南星炮制方法更為科學合理，以期更好地實現減毒增效目的，進而保證天南星炮制品的質量，提高其臨床療效，使其更好的服務于人類健康。

本發明的炮制方法與以往炮制方法比較，存在以下優點：

1、縮短了生產時間，提高了生產效率，減少了環境污染；

2、減少了輔料用量，節約了生產成本，簡化了生產流程，充分保留了天南星的有效成分；

3、炮制過程中未使用白礬，可避免白礬殘留過量攝入a1³⁺對神經系統等的毒害，保證臨床使用安全；

4、解決了長時間水浸泡或煮沸造成的有效成分損失問題，以及炎熱天氣情況下長時間水浸泡引起的天南星發霉變質問題；

5、酸性乙醇作為輔料，既可以殺死藥材表面霉菌，使藥材易于保存，也有利于藥材中有效成分溶出，調高臨床療效。

具體實施方式

現結合實施例對本發明進一步詳細的說明。應當理解，本實施例僅用于說明本發明，而不用于限定本發明的保護范圍。

實施例1一種天南星的炮制方法

(1)取天南星干燥塊莖，經凈選分檔后，置于壓力為0.15mpa的蒸制容器內于121℃蒸至內無干心(約10-15min)；

(2)將經蒸制后的天南星切成1-2mm的薄片，干燥；

(3)將質量為干燥后的天南星薄片質量的0.5-0.6倍的ph為4的酸性乙醇水溶液(乙醇體積百分比為50％，其余為鹽酸)均勻噴灑至干燥后的天南星上，拌勻，立即放置在50±5℃的密閉環境中，悶潤48h，取出干燥即得制南星。

實施例2一種天南星的炮制方法

(1)取天南星干燥塊莖，經凈選分檔后，置于壓力為0.13mpa的蒸制容器內于123℃蒸至內無干心(約10-15min)；

(2)將經蒸制后的天南星切成1-2mm的薄片，干燥；

(3)將質量為干燥后的天南星薄片質量的0.5-0.6倍的ph為4.5的酸性乙醇水溶液(乙醇體積百分比為50％，其余為鹽酸)均勻噴灑至干燥后的天南星上，拌勻，立即放置在50±5℃的密閉環境中，悶潤50h，取出干燥即得制南星。

實施例3效果實驗

為了評本發明炮制方法的合理性，本實驗以a1³⁺含量差異、眼結膜刺激性、急性毒性及亞急性毒性為評價方法，對按照本發明方法炮制品安全性進行評價，并與天南星生品、藥典法炮制品進行比較，進而闡明天南星新炮制方法的科學性。

一、鋁離子含量測定

由于藥典法炮制天南星時，采用白礬作為炮制輔料，白礬水溶液中含有大量的a1³⁺，人體攝入a1³⁺量過多，會引起大腦思維、意識及記憶等神經功能損傷，甚至會引起老年癡呆。本實驗對天南星生品、藥典法炮制品和本發明的新法炮制品進行了a1³⁺含量分析和比較，證實論本發明方法的安全性及炮制方法的可行性。

1、實驗材料

1.1實驗試劑

乙二胺四醋酸二鈉(天津市瑞金特化學有限公司，批號：20130620，分析純)；氧化鋅(天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20131108，分析純)；硫酸鋅(天津市密歐化學試劑有限公司，批號：20080716，分析純)；十二水合硫酸鋁鉀(廣東光華化學廠有限公司，批號：20070830，分析純)；鉻黑t指示劑(天津市光復精細化工研究所，批號：20120307)；鹽酸、冰乙酸、氨水、乙酸銨、甲基紅、二甲酚橙均為分析純。

1.2實驗儀器

常規實驗器材，ab204-n型電子分析天平(梅特勒-托利多有限公司，中國上海)。

1.3實驗藥材

天南星采于佳木斯市樺川縣松木河林場，為天南星科植物東北天南星arisaemaamurensemaxim.的干燥塊莖。

天南星藥典法炮制品的制備：取凈選天南星，大小分檔后，用清水浸泡，每日換水2～3次，如水面起白沫，換水后加白礬(每100kg天南星，加白礬2kg)，泡1d后，再換水漂至切開口嘗微有麻舌感時取出。另取生姜片、白礬置鍋內加適量水煮沸后，倒入天南星共煮至內無干心時取出，除去姜片，曬至四至六成干，切薄片，干燥即得。

天南星新法炮制品的制備：按照實施例1所述的方法制備得到。

2、實驗方法

2.1標準液的配制

乙二胺四醋酸二鈉(0.05mol/l)：準確稱取19g乙二胺四醋酸二鈉，加蒸餾水溶解后，定容至1000ml，搖勻即得。

鋅滴定液(0.05mol/l)：取硫酸鋅15g，加稀鹽酸10ml與水適量，加水定容至1000ml，搖勻即得。

乙二胺四醋酸二鈉的標定：按《藥典》附錄xvf下乙二胺四醋酸二鈉滴定液進行標定。標定后得出，乙二胺四醋酸二鈉溶液濃度為0.04998mol/l。

鋅滴定液的標定：按《藥典》附錄xvf下鋅滴定液進行標定。標定后得出，鋅滴定液濃度為0.04993mol/l。

2.2測定方法

采用《中國藥典》(2015版)中白礬含量測定方法，制天南星供試品溶液的制備方法：精密稱取制南星細粉(過65目篩)約2g，置于坩堝中，將坩堝在電爐上低溫炭化后，升溫至灰化4h后，放置冷卻。向坩堝中加入10ml稀鹽酸，蓋上蓋，并置于水浴上加熱20分鐘后，用5ml熱蒸餾水分次沖洗表面皿，并將清洗液放入坩堝中，用25ml水分次洗滌適用于濾過、濾渣等容器后，合并濾液與洗液。滴1滴加甲基紅，搖勻，再滴加氨試液至溶液由紅色轉為黃色，加25ml的ph6.0的醋酸-醋酸銨緩沖液，加25ml乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/l)，煮5分鐘左右，置冷，加入1ml二甲酚橙指示劑，用0.05mol/l鋅滴定液，滴定至溶液由黃色轉變為橘紅色,并用空白試驗校正滴定的結果。

2.3方法學考察

2.3.1精密度試驗

精密稱量0.2g十二水合硫酸鋁鉀，平行精密稱定三份，按照2.2項下測定方法測定，rsd＝0.73％，滴定方法良好。

2.3.2重復性試驗

精密稱定10份樣品，按2.2項下的方法測定白礬含量，同時進行空白試驗校正。結果顯示，rsd＝0.14％，方法重現性好。

2.3.3穩定性試驗

精密稱定樣品5份，制備供試品溶液，分別放置0、2、4、6、8h后進行滴定，滴定方法同2.2，測得rsd為0.46％，符合含量測定要求。

2.3.4回收率試驗

取天南星藥典法炮制品2g，平行操作6份，精密稱定，置坩堝中，分別精密加入十二水合硫酸鋁鉀0.1g，按2.2項下自“將坩堝在電爐上低溫炭化”起操作，測定白礬中a1³⁺含量，結果見表1。

表1天南星藥典法炮制品a1³⁺含量測定

回收率實驗結果顯示，十二水合硫酸鋁鉀回收率為98.38％，rsd＝1.75％(n＝6)，表明測定方法具有一定的準確性。

3、實驗結果

按2.2項下的方法，對天南星新法炮制品中a1³⁺進行含量測定，并與生南星及藥典法炮制品中a1³⁺測定含量進行比較，結果見表2。

表2天南星新法炮制品a1³⁺含量測定

4、小結與討論

對實驗樣品進行灼燒灰化處理，使a1³⁺充分游離，再用edta滴定。由于a1³⁺在水中容易水解并形成絡合物，且a1³⁺與edta反應慢，絡合物不穩定，所以用反滴定法來測定鋁的含量。結果顯示，天南星藥典法炮制品中a1³⁺含量明顯高于生品組及新法炮制組，天南星新法炮制品未經白礬處理，a1³⁺含量比生品組還低，可見經過本發明的方法炮制后，天南星的毒性有所降低。

二、刺激性作用研究

為了進一步證實天南星新法炮制品的刺激性是否降低，本實驗采用刺激性試驗研究方法，通過觀察天南星新法炮制品混懸液對兔眼結膜的刺激性，并與天南星生品及藥典法炮制品刺激性強度差異進行比較，用以評價天南星新法炮制品的安全性。

1、實驗材料

1.1實驗動物

大耳白兔，雌雄不限，體重1.5～2.5kg，健康，雙眼無紅腫，由黑龍江中醫藥大學glp中心提供，動物生產許可證號：scxk(黑)2013—004。

1.2實驗藥材

取適量天南星生品、藥典法炮制品、新法炮制品適量(按照實施例1所述的方法制備得到)，粉碎后過200目篩。準確稱取三種樣品粉末適量，加入生理鹽水，配置成0.1g/ml混懸液，空白組以生理鹽水作為對照，其它各組分別調試成不同的滲透壓和ph值混懸液備用。

1.3實驗試劑

氯化鈉注射液(哈爾濱三聯藥業有限公司，規格：500ml，批號：140505d6)；75％醫用酒精(山東利爾康消毒科技股份有限公司，規格:500ml，批號：1403101a)；其他試劑均為分析純。

2、實驗方法

取健康家兔，于實驗前24h檢查兩眼(包括使用熒光素鈉檢查)。剔除眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結膜損傷的動物。將家兔隨機分為4組，分別作為天南星生品組、藥典法組、新法炮制組和空白組。輕輕拉開兔的下眼瞼，使其離開眼球,將各混懸液滴入眼瞼內，每只兔眼滴入50μl各混懸液。給藥后，輕輕合眼上下眼瞼10s左右，以防供試液流出，使樣品混懸液和眼充分接觸，2min后用30ml左右生理鹽水沖洗至家兔肉眼觀察兔眼中無任何異物。1h后觀察兔眼情況，并通過拍照等記錄家兔的刺激性反應情況。

3、評分方法

表中評價的標準為：根據每隔一段時間記載的，觀察家兔的眼角膜、虹膜和結膜的刺激反應情況，并將其轉換成分值，相加得總積分，再除以動物數，得到的最后分值，作為判斷其刺激程度的依據，見表3和表4。

表3眼刺激性評價標準

表4眼刺激性評分

4、統計分析

實驗數據以均數±標準誤表示，用spss17.0進行數據統計分析。組間比較釆用單因素方差分析，兩組間比較采用q檢驗，以p＜0.01和p＜0.05分別代表極顯著性差異和顯著性差異。

5、實驗結果

藥典法組與新法組對兔眼的刺激性作用不明顯，與空白組比較，存在極顯著性和顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)，尤其生品組對兔眼的刺激性明顯，與空白組比較，存在極顯著性(p＜0.01)；藥典法組和新法組對兔眼結膜的刺激性作用均得到降低，與生品組比較，存在顯著性和極顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)；新法組刺激性明顯，與藥典法組比較，存在極顯著性差異(p＜0.01)。結果表明，天南星經藥典法和新法炮制后，刺激性作用都得到明顯降低，尤其新法炮制品刺激性作用降低更為明顯。結果見表5。

表5天南星新法炮制品對家兔眼結膜刺激性影響(n＝6)

注：*p＜0.05**p＜0.01與空白對照組比較；△p＜0.05，△△p＜0.051與生品組比較；▲p＜0.05，▲▲p＜0.01與藥典法組比較。

6、小結與討論

天南星生品刺激性作用強烈，藥典法炮制品對兔眼的刺激性相對減弱，新法炮制品幾乎對兔眼沒有刺激性，只是對虹膜造成輕度的充血，癥狀很快便可消失。表明天南星新法炮制品對皮膚黏膜的刺激性得到明顯降低，結果證明該炮制方法合理，能夠達到降低刺激性作用的目的。

天南星生品對人體的毒副作用主要表現為對皮膚、黏膜的強烈刺激作用，人口嚼生天南星，可使舌、咽、口腔麻木和腫痛，出現黏膜糜爛，音啞、張口困難，甚至呼吸緩慢、窒息等。皮膚接觸可致過敏瘙癢，尚有報道稱長期使用天南星可引起智力發育障礙。誤服本品中毒者，可服稀醋、鞣酸或濃茶、蛋清等洗胃，或服鮮姜汁或鮮姜湯內服解毒。口腔糜爛者，可用雙氧水和復方硼酸溶液漱口，并用龍膽紫涂口腔，必要時給以吸氧，或氣管切開。如果皮膚接觸時產生紅腫脹痛等毒性反應時，可以用水或者稀醋酸清洗。

三、急性毒性研究

急性毒性試驗是指以觀察動物接受單次或24h內多次給藥后，動物表現出的毒性反應情況，其目的是盡可能多了解受試藥物的毒理學特點，為早期判斷該藥是否具有研究開發價值提供其毒性強度的信息，也為設計進一步的毒性試驗提供參考。為了探討天南星新法炮制品是否具有毒性及其毒性特點，本試驗采用急性毒性實驗方法對天南星新法炮制品的毒性進行了研究，以期揭示新法炮制品是否具有毒性及其毒性特點。

1、實驗材料

1.1實驗動物

icr種系小鼠(spf)，體重20±2g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物生產許可證號：scxk(黑)2013—004。

1.2實驗儀器

同鋁離子含量測定部分。

1.3實驗藥材

同鋁離子含量測定部分。

天南星新法炮制品混懸液的制備：取天南星新法炮制品(按照實施例1所述的方法制備得到)，用粉碎機粉碎成粗粉后，過100目藥典篩，得到樣品細粉,臨用前用蒸餾水混懸，配制成含生藥量0.5g/ml的混懸劑，供動物灌胃給藥使用。

天南星新法炮制品水煎劑的制備：取天南星新法炮制品(按照實施例1所述的方法制備得到)，用粉碎機粉碎成粗粉后，過24目藥典篩，得到樣品粗粉。取粗粉適量，加入8倍量蒸餾水浸泡20min后，煎煮30min，提取液離心(3000r/m，10min)，殘渣再加入8倍量蒸餾水，再煎煮30min，提取液離心，合并兩次提取液，減壓回收至含生藥量3.0g/ml的濃縮液，置于4℃冰箱內保存備用。

1.4實驗試劑

同刺激性作用研究部分。

2、實驗環境

實驗動物飼養于通風、避光環境中，溫度(24±2)℃，相對濕度55％～70％，明暗交替(12h:12h)，動物自由獲取食物和水。實驗前動物在實驗室飼養一周，使之適應環境，并于每日上午8點進行實驗。

3、實驗方法

3.1天南星新法炮制品給藥劑量預實驗

3.1.1天南星新法炮制品混懸劑對小鼠死亡率的影響

取小鼠40只，禁食16h后(不禁水)，按體重隨機分為空白組、生品組、藥典法組和新法組，每組10只，雌雄各半。各組分別以最高濃度(0.5g/ml)、最大給藥體積(0.4ml/10g)一次灌胃各樣品混懸劑(相當于人用量的156倍)，空白組灌胃給予同體積的蒸餾水。連續觀察7天，詳細記錄各組小鼠毒性反應情況。

3.1.2天南星新法炮制品水煎劑對小鼠死亡率的影響

取小鼠40只，禁食16h后(不禁水)，按體重隨機分為空白組、生品組、藥典法組和新法組，每組10只，雌雄各半。分別以最高濃度(3.0g/ml)、最大給藥體積(0.4ml/10g)一次灌胃各樣品水煎劑(相當于人用量的933倍)，空白組灌胃給予同體積的蒸餾水。連續觀察7天，詳細記錄各組小鼠毒性反應情況。

3.2天南星新法炮制品水煎劑最大給藥量試驗

取小鼠40只，禁食16h后(不禁水)，按體重隨機分為空白組和新法組，每組20只，雌雄各半。新法組以最高濃度(3.0g/ml)、最大給藥體積(0.4ml/10g)一日3次灌胃給予水煎劑，每次給藥間隔時間4h，空白組平行灌胃給予同體積蒸餾水。連續觀察14天，詳細記錄各組小鼠毒性反應表現和特點，毒性反應出現和消失的時間，觀察小鼠的活動和行為表現，并計算各組小鼠體重變化率。通過總給藥量可推算出相當于臨床用藥量及其倍數。

4、統計分析

實驗數據以均數±標準誤表示，用spss17.0進行數據統計分析。組間比較釆用單因素方差分析，兩組間比較采用q檢驗，以p<0.05，p<0.01分別代表顯著性差異和極顯著性差異。

體重變化率＝(當時體重-原始體重)/原始體重×100％

5、實驗結果

5.1天南星新法炮制品混懸劑對小鼠行為體征及死亡率的影響

生品組小鼠在給藥期間個別小鼠表現食少，大便溏稀現象，個別小鼠出現死亡的情況。新法組和藥典法組小鼠給藥后，均未出現食少，精神狀態萎靡、少動、流涎、豎毛、大便濕軟等情況，活動行為正常，未見有小鼠死亡和明顯毒性反應。生品組、藥典法組及新法組小鼠給藥后，體重增長均受到影響，與空白組比較，存在極顯著性差異和顯著性差異(p＜0.01，p＜0.05)；藥典法組和新法組小鼠給藥后，體重增長明顯，與空白組比較，均存在顯著性差異(p＜0.05)；藥典法組和新法組小鼠給藥后，體重增長無明顯差異。結果表明，一次給藥無法測出新法炮制品混懸劑的ld50劑量，故采用多次給藥測定最大給藥量。結果見表6。

表6天南星各樣品混懸劑對小鼠行為體征及死亡率的影響(n＝10)

注：*p<0.05**p<0.01與空白組比較；δp<0.05與生品組比較。

5.2天南星新法炮制品水煎劑對小鼠行為體征及死亡率的影響

生品組小鼠在給藥期間個別小鼠表現大便溏稀現象，未出現小鼠死亡的情況。新法組和藥典法組小鼠在給藥后，均未出現食少，精神狀態萎靡、少動、流涎、豎毛、大便濕軟等情況，活動行為正常，未見小鼠死亡和明顯毒性反應。生品組小鼠給藥后，體重增長緩慢，與空白組比較，存在極顯著性差異(p＜0.01)；藥典法組和新法組小鼠給藥后，體重增長明顯，與空白組比較，均無顯著性差異；藥典法組和新法組小鼠給藥后，體重增長無明顯差異。表明一次給藥無法測出新法炮制品水煎劑的ld50劑量，故采用多次給藥測定最大給藥量試驗。結果見表7。

表7天南星各樣品水煎劑對小鼠行為體征及死亡率的影響(n＝10)

注：*p<0.05**p<0.01與空白組比較；δp<0.05與生品組比較。

5.3天南星新法炮制品水煎劑最大給藥量試驗結果

結果表明，小鼠一日灌胃給予天南星新法炮制品水煎劑360g/kg，未見小鼠死亡和異常表現，說明天南星新法炮制品水煎劑毒性很低或無毒性。

6、小結與討論

急性毒性結果表明，天南星生品混懸劑具有一定毒性，毒性大于生品水煎劑。經過炮制后，其混懸劑和水煎劑毒性都得到明顯降低；通過灌胃給藥無法測出天南星新法炮制品水煎劑ld50劑量，且最大給藥量實驗中小鼠每日給藥劑量360g/kg，相當于成人臨床用量的2800倍。說明天南星新法炮制品毒性不明顯，較為安全，達到炮制降低毒性的目的。

四、亞急性毒性研究

亞急性毒性實驗，是通過對動物重復給藥的試驗，表征受試物的毒性作用，并且預測其可能對人體產生的不良反應，降低臨床試驗受試者和藥品上市后使用人群的用藥風險。為了進一步評價天南星新法炮制品長期給藥對機體毒性作用特點，本研究在急性毒性實驗基礎上，對天南星新法炮制品水煎劑多次給藥毒性特征進行了評價研究。

1、實驗材料

1.1實驗動物

sd大鼠(spf級)，體重180±20g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物生產許可證號：scxk(黑)2013—004。

1.2實驗儀器

同鋁離子含量測定部分。

1.3實驗藥材

同鋁離子含量測定部分。

1.4實驗試劑

同刺激性作用研究部分。

2、實驗環境

同急性毒性研究部分。

3、實驗方法

取大鼠40只，雌雄各半，隨機分為四組，即空白對照組、生品組、藥典法組及新法組，每組10只。適應環境一周后，每日上午8:00開始灌胃給藥，每日一次，給藥劑量50g/kg(相當于成人用量的60倍)，空白組給予同體積的生理鹽水。同時，每周精確稱量大鼠體重，并按體重變化調整動物給藥劑量。給藥期間，每天觀察各組大鼠行為學變化。連續給藥30天后，采血和取主要臟器進行生化及病理學分析。

4、統計分析

實驗數據以均數±標準誤表示，用spss17.0進行數據統計分析。組間比較釆用單因素方差分析，兩組間比較采用q檢驗，以p＜0.01,p＜0.05分別代表極顯著性差異和顯著性差異。

5、實驗結果

5.1天南星新法炮制品水煎劑對大鼠行為體征的影響

藥典法組及新法組大鼠在給藥期間，均未出現食少，精神狀態萎靡、少動、流涎、豎毛、大便濕軟等情況，活動行為正常。生品組大鼠在給藥期間個別大鼠表現食少，大便溏稀等現象。各組大鼠在給藥期間均未出現死亡情況。

5.2天南星新法炮制品對大鼠體重變化率的影響

給藥第一周，生品組大鼠體重增長相對緩慢，與空白組比較，存在顯著性差異(p＜0.05)；藥典法組與新法組體重變化率，與生品組比較，無明顯差異；給藥第二周以后，各給藥組大鼠體重變化率，與空白組比較，差異均無顯著性意義。各組大鼠的體重變化率見表8所示。

體重變化率：變化率＝(當時體重-原始體重)/原始體重。

表8天南星各炮制品水煎劑對大鼠體重變化率的影響(n＝10)

注：*p<0.05與空白組比較；δp<0.05與炮制組比較。

5.3天南星新法炮制品水煎劑對大鼠主要血常規指標的影響

給藥30天后，生品組、藥典組、新法組白細胞(wbc)值均有升高，尤其生品組升高明顯，與空白組比較，存在極顯著性差異和顯著性差異(p＜0.01，p＜0.05)；藥典法組與新法組(wbc)值雖均有升高，與生品組比較，存在顯著性差異(p＜0.05)；藥典法組與新法組(wbc)值比較，無顯著性差異；生品組、(rbc)值升高明顯，與空白組比較，存在顯著性差異(p＜0.05)；藥典法組與新法組(rbc)值雖有降低，與生品組比較，存在顯著性差異(p＜0.05)；藥典法組與新法組(rbc)值比較，無顯著性差異；生品組、藥典法組及新法組血小板數(plt)值無顯著性差異。結果見表9。

表9天南星各炮制品對大鼠主要血常規指標的影響(n＝10)

注：*p<0.05與空白組比較，**p<0.01與空白組比較；δp<0.05與生品組比較。

5.4天南星新法炮制品對大鼠主要生化指標的影響

給藥30天后，生品組大鼠ck值升高,與空白組比較，存在顯著性差異(p<0.05),藥典法組與新法組ck值沒有明顯變化,與空白組比較,無顯著性差異；生品組、藥典法組及新法組alt、ast、crea、urea值均有升高，與與空白組比較,無顯著性差異。結果見表10。

表10天南星給藥30天對大鼠生化指標的影響(n＝10)

注：*p<0.05與空白組比較；δp<0.05與炮制組比較。

5.4天南星新法炮制品對大鼠臟器指數的影響

給藥30天后，生品組大鼠心臟指數偏高，與空白組比較，存在顯著性差異(p<0.05)，藥典法組和新法炮制組心臟指數正常，與空白組比較，差異不顯著；生品組大鼠肺臟指數偏高，與空白組比較，存在顯著性差異(p<0.05)，藥典法組和新法炮制組肺臟指數正常，與空白組比較，差異不顯著性；其它各組的臟器指數未見明顯差異，結果見表11。

表11天南星新法炮制品對大鼠臟器指數的影響(n＝10)

注：*p<0.05與空白組比較。

5.5天南星新法炮制品對大鼠病理的影響

大鼠連續30天灌胃給予新法炮制品水煎劑，對大鼠心臟、肝、肺、脾、腎、胃及食管等主要臟器未見影響，表明天南星新法炮制品水煎劑毒性很小或無毒。

6、小結與討論

亞急性毒性實驗目的是通過對動物重復給藥，表征受試藥物的毒性作用，并且預測其可能對人體產生的不良反應，降低臨床試驗受試者和藥品上市后使用人群的用藥風險。機體炎癥指標wbc、心肺功能指標rbc、hgb和hct是血常規中重要指標。ck主要存在于心肌和骨骼肌等肌肉中。urea是腎臟功能是否改變的一個重要指標。

本研究在急性毒性實驗基礎上，對天南星新法炮制品水煎劑多次給藥毒性特征進行了評價研究，進一步探討天南星新法炮制品長期給藥對機體毒性作用特點。

大鼠連續30天灌胃給予新法炮制品水煎劑，給藥期間行為體征正常，體重變化率穩定，血常規指標未見異常。病理切片顯示，新法炮制品水煎劑對大鼠心臟、肝、肺、脾、腎、胃及食管臟等主要臟器未見影響，表明天南星新法炮制品水煎劑毒性很小或無毒。

本發明的實施例內容揭露如上，然而本實施例并非用以限定本發明實施的范圍，依據本發明的權利要求書及說明內容所作的簡單的等效變化與修飾，仍屬于本發明技術方案的范圍內。