本發(fā)明涉及鳳尾草總黃酮的新用途，屬于醫(yī)藥新用途
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：鳳尾蕨科植物鳳尾草(pterismultifidapoir.)又名井欄邊草、小葉鳳尾草，我國(guó)資源豐富，并擁有上千年的應(yīng)用歷史。其“味淡，微苦，性寒”(《中藥大辭典》)；“入腎、胃二經(jīng)”、“治濕熱小便不通、血淋、咽喉腫痛”(《泉州本草》)；《分類草藥性》則云：“治一切熱毒。消腫，清火”；《貴州民間方藥集》云：“解熱，利尿”；《新藥志》記載它具有清熱利濕，消腫解毒，涼血止血，主治淋證、痢疾等功效。鳳尾草總黃酮能抑制人腦膠質(zhì)瘤u251細(xì)胞遷移(劉銀風(fēng)等：承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，3l(2)：93-95)、對(duì)丙酸睪酮誘導(dǎo)的去勢(shì)大鼠前列腺增生也有明顯治療作用(代光成等：中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2013，30(12)：2506-2508)。鳳尾草總黃酮對(duì)心腦血管疾病也有很好的預(yù)防和治療作用(夏玉葉等，專利公開號(hào)cn101091728a)。新近報(bào)道鳳尾草總黃酮具有抗氧化作用，因而可自備新型的天然抗氧化劑(楊成東，專利公開號(hào)：cn106038617a)。公開號(hào)為cn1555869的專利申請(qǐng)公開了鳳尾草提取物(總黃酮部位)的制備工藝及抗炎用途。但是，有關(guān)鳳尾草總黃酮在降血脂或抗動(dòng)脈粥樣硬化方面的用途到目前為止尚未見報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了鳳尾草總黃酮的新用途，特別是在制備治療降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所說的動(dòng)脈粥樣硬化(as)是一種常見的大動(dòng)脈疾病，由動(dòng)脈壁膽固醇代謝不平衡所致，在形成初期，內(nèi)膜下的巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞大量吞噬低密度脂蛋白(ldl)，細(xì)胞內(nèi)膽固醇沉積，從而形成泡沫細(xì)胞。高脂血癥是as的重要危險(xiǎn)因素和臨床表現(xiàn)，其中低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)過高、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)過低及炎癥反應(yīng)對(duì)as的影響最為引人關(guān)注。動(dòng)脈壁病灶內(nèi)泡沫細(xì)胞的外遷和單核巨噬細(xì)胞的內(nèi)遷是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程，如果內(nèi)皮下間隙募集的單核巨噬細(xì)胞越多，而外遷的泡沫細(xì)胞越少，就會(huì)導(dǎo)致其大量蓄積與崩解，促進(jìn)斑塊形成及血管壁的惡性重構(gòu)，導(dǎo)致嚴(yán)重的心腦血管臨床事件。因此，研究挖掘降血脂、防治as的新藥是醫(yī)藥行業(yè)的重點(diǎn)之一。本發(fā)明所說的鳳尾草總黃酮為一種鳳尾草提取物，其有效部位為總黃酮，換言之，也即同上述鳳尾草提取物(總黃酮部位)。本發(fā)明通過諸多的研究及藥物篩選試驗(yàn)，意外地發(fā)現(xiàn)上述總黃酮口服給藥可明顯降低血清膽固醇(tc)、甘油三酯(tg)和ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值，顯著性減少主動(dòng)脈內(nèi)脂肪沉積和斑塊面積；顯著性減少斑塊內(nèi)膽固醇的積累。提示鳳尾草總黃酮能夠降低血脂，防治動(dòng)脈硬化。因此，鳳尾草總黃酮具有降低血脂，防治動(dòng)脈硬化，能夠用于制備防治高脂血癥及動(dòng)脈硬化的藥物；而且該有效部位從天然植物中提取，具有更低的毒性。具體生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論包括以下方面：(1)模型組大鼠在給予高脂飼料14天后血清tg、cho和ldl-c含量較正常組明顯升高，h/l比值顯著降低(p<0.01)，提示造模成功。鳳尾草總黃酮10和20mg/kg口服給藥可明顯降低脂質(zhì)代謝紊亂模型大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值，對(duì)模型大鼠的髙脂血癥能發(fā)揮很好的預(yù)防及治療作用；(2)鳳尾草總黃酮20mg/kg口服灌胃給藥，可明顯降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值，抑制vd3和髙脂飼料誘導(dǎo)的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的形成，對(duì)vd3和髙脂飼料誘導(dǎo)的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)揮很好的預(yù)防和治療作用。因此，鳳尾草總黃酮在降低血脂、防治抗動(dòng)脈粥樣硬化方面具有良好的效果，可制備成應(yīng)用于此方面疾病的新藥。具體實(shí)施方式以下所列實(shí)施例，僅為幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1鳳尾草總黃酮的制備根據(jù)上述公開號(hào)為cn1555869專利文獻(xiàn)實(shí)施例1的工藝來制備，即將3公斤鳳尾草，用300公斤70％乙醇動(dòng)態(tài)提取兩次，收集提取液，真空濃縮，石油醚萃取脂溶性雜質(zhì)，水液過大孔樹脂柱，水液上柱達(dá)飽和后，用水及30％的乙醇洗去親水性雜質(zhì)，用50％的乙醇洗脫黃酮苷，將洗脫液干燥，用有機(jī)溶劑精制一次得鳳尾草總黃酮。也可通過本發(fā)明人使用的下列工藝制備鳳尾草總黃酮，制備方法為：將5公斤鳳尾草以70％乙醇浸泡后滲漉，滲漉液減壓濃縮后過大孔樹脂(d101型，天津正天成澄清技術(shù)有限公司產(chǎn)品)，依次以水、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫部分，減壓濃縮后干燥，即得鳳尾草總黃酮。實(shí)施例2鳳尾草總黃酮口服給藥對(duì)脂質(zhì)代謝紊亂大鼠血脂的影響1.1供試品配制：將實(shí)施例1制得的總黃酮精確稱量后用0.5％的cmc-na配制成終濃度分別為2mg/kg和4mg/kg混懸液。1.2陽(yáng)性對(duì)照品配制：精確稱取阿托伐他汀，加入0.5％cmc-na配成濃度為2mg/kg的混懸液，備用。1.3試驗(yàn)方法：雄性sd大鼠30只，體重170-180g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，將動(dòng)物按體重分層隨分為4組，每組6只。高脂飼料配比如下：豬油10％，膽固醇2％，丙基硫氧嘧啶0.2％，豬膽鹽0.5％，基礎(chǔ)飼料87.3％。表1.試驗(yàn)分組動(dòng)物喂養(yǎng)高脂飼料造模(正常組除外)的同時(shí)根據(jù)分組情況給予相應(yīng)的受試樣品，連續(xù)14天。實(shí)驗(yàn)期間，每2或3天加一次高脂飼料(正常組加普通全營(yíng)養(yǎng)飼料)。實(shí)驗(yàn)第15天，大鼠以12％水合氯醛麻醉(0.3ml/100g)，從第1組開始，至第5組，每組一只，循環(huán)經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，離心分離血清，測(cè)定tg、cho、hdl-c、ldl-c含量并計(jì)算hdl-c與ldl-c比值。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以上所有指標(biāo)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，均數(shù)之間差異的比較用t檢驗(yàn)。1.5試驗(yàn)結(jié)果：1.5.1鳳尾草總黃酮對(duì)脂質(zhì)代謝紊亂模型大鼠血清cho、tg的影響試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2.鳳尾草總黃酮對(duì)脂代謝紊亂模型大鼠血脂含量的影響(n＝6，)*p<0.05；**p<0.01，與模型組比較結(jié)果表明模型組大鼠在給予高脂飼料14天后血清tg和cho較正常組有非常明顯的升高(p<0.01)。鳳尾草總黃酮10mg/kg口服給藥可顯著降低脂質(zhì)代謝紊亂模型大鼠血清tg和cho含量(p<0.05，與模型組比較)；鳳尾草總黃酮20mg/kg口服給藥組動(dòng)物血清tg和cho含量較模型對(duì)照組非常顯著降低(p<0.01)。陽(yáng)性對(duì)照藥阿托伐他汀10mg/kg口服給藥可非常顯著降低脂質(zhì)紊亂模型大鼠血清cho值(p<0.01，與模型組比較)，但對(duì)模型大鼠血清tg無明顯影響(p>0.05，與模型組相比)。1.5.2鳳尾草總黃酮對(duì)模型大鼠高、低密度脂蛋白膽固醇含量和比值的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3.鳳尾草總黃酮對(duì)脂代謝紊亂模型大鼠高低密度脂蛋白膽固醇含量和比值的影響(n＝6，)*p<0.05；**p<0.01，與模型組比較結(jié)果表明模型組大鼠在給予高脂飼料14天后hdl-c較正常組無明顯改變(p>0.05)，但ldl-c含量較正常組明顯升高，h/l比值顯著降低(p<0.01)。鳳尾草總黃酮10mg/kg口服給藥，雖可降低模型大鼠血清ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值，但與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，其血清hdl-c未見明顯變化(p>0.05，與模型組比較)；鳳尾草總黃酮20mg/kg口服給藥，可顯著降低模型大鼠血清ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值(p<0.05，與模型組比較)，對(duì)hdl-c無明顯影響(p>0.05，與模型組比較)。陽(yáng)性對(duì)照藥阿托伐他汀可非常顯著降低模型大鼠血清ldl-c含量(p<0.01，與模型組比較)，顯著升高h(yuǎn)/l比值(p<0.05，與模型組比較)，對(duì)hdl-c無明顯影響(p>0.05，與模型組比較)。1.6結(jié)論試驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠在給予高脂飼料14天后血清tg、cho和ldl-c含量較正常組明顯升高，h/l比值顯著降低(p<0.01)，提示造模成功。鳳尾草總黃酮10和20mg/kg口服給藥可明顯降低脂質(zhì)代謝紊亂模型大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值，對(duì)模型大鼠的髙脂血癥能發(fā)揮很好的預(yù)防及治療作用。實(shí)施例3鳳尾草總黃酮對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響2.1供試品配制：將實(shí)施例1制得的總黃酮精確稱量后用0.5％的cmc-na配制成終濃度為4mg/kg的混懸液，備用。2.2陽(yáng)性對(duì)照品配制：精確稱取辛伐他汀，加入0.5％cmc-na配成濃度為4mg/kg混懸液，備用2.3試驗(yàn)方法：將動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后稱體重，并根據(jù)體重進(jìn)行均勻分組，每組動(dòng)物數(shù)10只(見表4)。表4.試驗(yàn)分組組別動(dòng)物數(shù)喂飼飼料給藥劑量(mg/kg)給藥體積(ml/kg)正常組n＝8普通全營(yíng)養(yǎng)飼料--------模型組n＝8高脂飼料0.5％cmc-na5鳳尾草總黃酮n＝8高脂飼料205辛伐他汀組n＝8高脂飼料205所有動(dòng)物在分組后正常飼養(yǎng)3天開始造模：除正常組動(dòng)物外各組均肌肉注射vd3三次，每日一次，每次劑量30萬iu/kg。vd3第三次注射結(jié)束后24小時(shí)開始口服給予各受試藥物，給藥體積均為5ml/kg，模型組和正常組給予同體積的0.5％cmc-na溶液，連續(xù)給藥10周。給藥期間前7周均給予正常標(biāo)準(zhǔn)飼料，第8周開始除正常組以外各組均給予高脂飼料(高脂飼料配方：含普通全營(yíng)養(yǎng)飼料87.3％、豬油10％、膽固醇2％、豬膽鹽0.5％、丙基硫氧嘧啶0.2％)，持續(xù)時(shí)間為3周。另外，第8周除正常組動(dòng)物以外的各組動(dòng)物再次肌肉注射vd3一次，劑量30萬iu/kg。開始給藥后第10周末，將動(dòng)物麻醉，腹主動(dòng)脈采血，測(cè)定血清tg、cho、hdl-c、ldl-c含量，取大動(dòng)脈(從主動(dòng)脈弓至腹主動(dòng)脈分叉處)對(duì)動(dòng)脈內(nèi)壁斑塊出現(xiàn)的長(zhǎng)度和面積進(jìn)行觀察和統(tǒng)計(jì)。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以上所有指標(biāo)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示均數(shù)之間差異的比較用t檢驗(yàn)。2.5試驗(yàn)結(jié)果2.5.1鳳尾草總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清脂質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。表5.鳳尾草總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂的影響(n＝8，)*p<0.05；**p<0.01，與模型組比較結(jié)果表明與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠血清tg和cho非常顯著升高。鳳尾草總黃酮口服灌胃20mg/kg，可非常顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清tg含量(p<0.01)；顯著降低cho值(p<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照藥辛伐他汀20mg/kg口服灌胃給藥可顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清cho含量，對(duì)模型大鼠tg含量無明顯影響(p>0.05)。2.5.2鳳尾草總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠高低密度脂蛋白膽固醇含量和比值的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。表6.鳳尾草總黃酮對(duì)脂代謝紊亂模型大鼠高低密度脂蛋白膽固醇含量和比值的影響(n＝8，)*p<0.05；**p<0.01，與模型組比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠血清ldl-c含量明顯升高(p<0.01，與正常組比較)；h/l比值非常顯著降低(p<0.01，與正常組比較)；hdl-c未見明顯變化(p>0.05，與正常組比較)。陽(yáng)性藥辛伐他汀20mg/kg口服灌胃給藥，可非常顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清ldl-c含量(p<0.01，與模型組比較)；升高h(yuǎn)dl-c含量和h/l比值(p<0.01，與模型組比較)。與模型組比較，鳳尾草總黃酮20mg/kg口服灌胃給藥可顯著降低模型大鼠血清ldl-c含量(p<0.01)，升高h(yuǎn)/l比值(p<0.01)，對(duì)hdl-c無明顯影響(p>0.05)。2.5.3鳳尾草總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠斑塊長(zhǎng)度和面積的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。表7.鳳尾草總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管動(dòng)脈硬化斑塊的影響－斑塊長(zhǎng)度和面積(n＝8，)*p<0.05；**p<0.01，與模型組比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠在肌肉注射vd3和飼喂髙脂飼料后動(dòng)脈明顯形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，其斑塊長(zhǎng)度和面積與正常組相比差異有非常顯著意義(p<0.01)。模型大鼠口服灌胃給予鳳尾草總黃酮20mg/kg，僅2例出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化病變，其動(dòng)脈粥樣硬化斑塊長(zhǎng)度和面積較模型組相比明顯降低，差異有非常顯著意義(p<0.01)；陽(yáng)性藥辛伐他汀20mg/kg組，僅1只動(dòng)物出現(xiàn)少量輕度動(dòng)脈粥樣硬化病變，該組動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化斑塊長(zhǎng)度和面積較模型組相比明顯降低，差異亦具有非常顯著意義(p<0.01)。2.6結(jié)論試驗(yàn)結(jié)果顯示鳳尾草總黃酮20mg/kg口服灌胃給藥，可明顯降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h(yuǎn)/l比值，抑制vd3和髙脂飼料誘導(dǎo)的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的形成，對(duì)vd3和髙脂飼料誘導(dǎo)的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)揮很好的預(yù)防及治療作用。結(jié)論：從上述效果實(shí)施例1～2可見，鳳尾草總黃酮在降低血脂、防治抗動(dòng)脈粥樣硬化方面具有良好的效果，可制備成應(yīng)用于此方面疾病的新藥。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出：對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12