一種中藥組合物及其制備方法和應用與流程

本發明屬于中藥組合物技術領域，尤其涉及一種中藥組合物及其制備方法和應用。

背景技術：

急性痛風性關節炎是一種代謝紊亂類疾病，其主要癥狀為患病關節的紅、腫、熱、痛現象。急性痛風性關節炎在發作的同時，還會誘發高血壓、動脈粥樣硬化以及肝腎損傷等重大疾病，嚴重危害著人類的健康。

急性痛風性關節炎的發病機制為，患者體內嘌呤代謝紊亂，從而造成尿酸積聚增多，過量的尿酸以尿酸鈉結晶的形式沉積在關節、滑膜及周圍組織，造成該部位的炎癥反應。因此，可以將抗炎活性以及抑制黃嘌呤氧化酶的活性作為評價藥物抗急性痛風性關節炎活性的兩個指標。市售的治療急性痛風性關節炎的藥物主要有非甾體類抗炎藥、黃嘌呤氧化酶抑制劑、促尿酸排泄藥等，然而這些藥均存在較大的毒副作用。因此，從高效、低毒、多靶點的中藥中篩選出治療急性痛風性關節炎效果較好的藥物并組成組方可以達到較好的治療目的。

技術實現要素：

有鑒于此，本發明的目的是為了解決現有的治療急性痛風性關節炎的藥物毒副作用大且效果不顯著的問題，而提供一種中藥組合物及其制備方法和應用。

本發明首先提供一種中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏9.5～12重量份；

蒼術3～6重量份；

銀杏葉4.5～6重量份。

優選的是，所述的中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏10～11.5重量份；

蒼術3.5～5.5重量份；

銀杏葉4.5～5.5重量份。

優選的，所述的中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：黃柏10重量份、蒼術5重量份、銀杏葉5重量份。

本發明還提供了一種中藥組合物的制備方法，包括：

a)將黃柏加入醇類溶劑中超聲提取，得到黃柏提取液；

b)將蒼術加入醇類溶劑中超聲提取，得到蒼術提取液；

c)將銀杏葉加入醇類溶劑中超聲提取，得到銀杏葉提取液；

d)將a)、b)、c)中得到的黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取物混合，得到中藥組合物。

優選的，所述a)、b)、c)中的黃柏、蒼術及銀杏葉均需粉碎后進行提取。

優選的，所述a)、b)、c)中的醇類溶劑均為65％～75％的乙醇水溶液。

優選的，所述a)、b)、c)中的黃柏、蒼術或銀杏葉的體積與醇類溶劑的體積比均為1：(8～10)。

優選的，所述a)、b)、c)中，提取溫度為25～50℃，提取時間為1～2h。

本發明還提供上述中藥組合物在制備治療急性痛風性關節炎藥物中的應用。

本發明的藥理作用如下：

黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮，其性味苦、寒，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效。其現代藥理作用主要為，抗炎、抗菌、抑制黃嘌呤氧化酶、抗痛風等。

蒼術為菊科植物北蒼術的干燥根莖，其性味辛、苦、溫，具有燥濕徤脾，祛風散寒，明目的功效。同時還具有抗菌、抗炎、促排尿、抗痛風等現代藥理作用。

銀杏葉銀杏科植物銀杏的干燥葉，其性味干、苦、澀、平，具有活血化瘀，通絡止痛，斂肺平喘，化濁降脂的功效。同時還具有抗炎、抑制黃嘌呤氧化酶等現代藥理活性。

本發明的有益效果

本發明提供一種中藥組合物及其制備方法和應用，該中藥組合物由以下重量份的中藥原料制成：黃柏9.5～12重量份；蒼術3～6重量份；銀杏葉4.5～6重量份。本發明將黃柏、蒼術與銀杏葉進行組方，黃柏與銀杏葉具有較好的抗炎及抑制黃嘌呤氧化酶的活性，蒼術具有較好的抗炎及促進尿酸排泄的活性。將上述幾味中藥進行配伍，相互作用，具有抗炎、抑制尿酸生成及促進尿酸排泄的作用，從多個角度達到治療急性痛風性關節炎的作用，具有較好的效果，且組合物由于采用中藥成分，毒副作用小。

附圖說明

圖1為本發明黃嘌呤氧化反應產物尿酸及內標物質5-氟尿嘧啶的質譜總離子流圖。

具體實施方式

下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。

本發明首先提供了一種中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏9.5～12重量份；

蒼術3～6重量份；

銀杏葉4.5～6重量份。

優選的是，所述的中藥組合物由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏10～11.5重量份；

蒼術3.5～5.5重量份；

銀杏葉4.5～5.5重量份。

更優選的是，所述的中藥組合物由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏10重量份；

蒼術5重量份；

銀杏葉5重量份。

本發明還提供了一種中藥組合物的制備方法，包括：

a)將黃柏加入醇類溶劑中超聲提取，得到黃柏提取液；

b)將蒼術加入醇類溶劑中超聲提取，得到蒼術提取液；

c)將銀杏葉加入醇類溶劑中超聲提取，得到銀杏葉提取液；

d)將a)、b)、c)中得到的黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取物混合，得到中藥組合物。

按照本發明，所述的黃柏、蒼術和銀杏葉在進行超生提取前，優選先進行粉碎，所述的a)、b)、c)中用醇類溶劑作為提取溶劑，所述的醇類溶劑為本領域技術人員熟知的醇類溶劑即可，并無特殊的限制，本發明中優選為乙醇，更優選為65％～75％的乙醇；所述醇類溶劑的體積與黃柏、蒼術或銀杏葉體積的比例均優選為(8～10)：1；所述提取溫度優選為25～50℃，所述提取時間優選為1～2h。

按照本發明，本發明對原料黃柏、蒼術和銀杏葉的來源并沒有特殊的限制，為市售即可。

本發明還提供了上述中藥組合物在制備治療急性痛風性關節炎藥物中的應用。

為了進一步說明本發明，以下結合實施例對本發明提供的一種中藥組合物及其制備方法進行詳細描述。

以下實施例中所用的試劑均為市售。

實施例1

將10重量份的黃柏粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到黃柏提取液；

將3.5重量份的蒼術粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到蒼術提取液；

將5.5重量份的銀杏葉粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到銀杏葉提取液；

將上述黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

實施例2

將10重量份的黃柏粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到黃柏提取液；

將5重量份的蒼術粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到蒼術提取液；

將5重量份的銀杏葉粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到銀杏葉提取液；

將上述黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

實施例3

將11.5重量份的黃柏粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到黃柏提取液；

將5.5重量份的蒼術粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到蒼術提取液；

將4.5重量份的銀杏葉粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到銀杏葉提取液；

將上述黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

對比例1

將8重量份的黃柏粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到黃柏提取液。

將8重量份的蒼術粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到蒼術提取液。

將4重量份的銀杏葉粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到銀杏葉提取液。

將上述黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

對比例2

將6.7重量份的黃柏粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到黃柏提取液。

將6.7重量份的蒼術粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到蒼術提取液。

將6.7重量份的銀杏葉粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到銀杏葉提取液。

將上述黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

對比例3

將5重量份的黃柏粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到黃柏提取液。

將10重量份的蒼術粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到蒼術提取液。

將5重量份的銀杏葉粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到銀杏葉提取液。

將上述黃柏提取液、蒼術提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

下面通過抗炎實驗及體外抑制黃嘌呤氧化酶實驗進一步說明本發明的效果：

1抗炎實驗

本實驗以尿酸鈉結晶誘導的huvec損傷為模型結合mtt實驗，以藥物抑制huvec損傷的抑制率為指標，對藥物的抗炎活性進行評價。

1.1實驗材料與試劑

黃柏、蒼術、銀杏葉均購自吉林省長春市吉林大藥房。huvec細胞株購買于。dmem(thermo)，青霉素，鏈霉素，胰蛋白酶，二甲基亞砜(dmso)，3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(mtt)均購自美國sigma公司；胎牛血清(thermo)。96孔細胞培養板(greiner，德國)；酶標儀(tecan，澳大利亞)；二氧化碳培養箱(mco-175，sanyo)；光學倒置顯微鏡(xds-1b，重慶光學儀器廠)。

1.2msu溶液的制備方法

稱取10mg的msu結晶，高壓滅菌1h，加入100μl的dmso，再加dmem定容至10ml,超聲30min至溶解，制成1mg/ml的msu儲備液，用時以dmem稀釋至相應濃度。

1.3huvec的體外培養

huvec經0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的dmem培養液中和，3500r/min離心10min后，棄去上清液，加含10％胎牛血清的dmem培養液，移入細胞培養瓶中，放入37℃、5％co2培養箱中培養至對數生長期。

1.4huvec細胞活性檢測

用0.25％的胰蛋白酶消化huvec，以8000/孔的密度，100μl接種到96孔板中，培養24h，棄去培養液。每孔加入50μl的msu溶液(空白組以50μl的dmem代替)，每組設置6個平行孔。當生藥濃度為0.2mg/ml時，達到黃柏、蒼術、銀杏葉等中藥的安全濃度。因此，每孔加入50μl的實施例1、2、3、4中的藥液，使其終濃度為生藥濃度0.2mg/ml(空白組及模型組以50μl的dmem代替)。放入培養箱中培養24h，棄去藥液，每孔加入100μl的msu溶液，放入培養箱培養4h，棄去孔內溶液，加入150μl的dmso，放入酶標儀中，37℃低速震蕩溶解10min，570nm處檢測吸光度，進行統計分析。細胞存活率按以下公式得出：

ic％＝(試驗孔吸光度均值/空白孔吸光度均值)×100％

1.5實驗結果

表1不同配比復方及相同生藥濃度的黃柏蒼術藥對與銀杏葉單味藥的抗炎活性(mean±sd，n＝6)

從表1中可以看出，三個對比例對尿酸鈉引起的huvec細胞損傷的抑制作用較差，即抗炎作用較差，且組成復方的中藥間并不存在明顯的協同作用。與之相比，實施例1-3的中藥組合物均具有較好的抗炎活性，且抑制率明顯高于與復方中生藥濃度相同的黃柏蒼術藥對及銀杏葉單味藥的抑制率的加和，因此可以說以這些比例組成組方后，銀杏葉與黃柏蒼術藥對在抗炎方面產生了協同作用，具有一定的研發價值。

2體外抑制黃嘌呤氧化酶活性實驗

黃嘌呤氧化酶氧化黃嘌呤生成尿酸是人體內尿酸產生最重要的途徑，本節將加入藥物后黃嘌呤氧化酶氧化黃嘌呤所生成尿酸的量，與不加藥物時生成尿酸的量進行比較，對藥物對黃嘌呤氧化酶的抑制率進行分析檢測。

2.1實驗材料與試劑

黃柏、蒼術、銀杏葉購自吉林省長春市吉林大藥房。黃嘌呤氧化酶和tris購自美國sigma公司；5-氟尿嘧啶購自中國上海的aladdin公司。乙腈、甲酸均為色譜純(美國fisher公司)；實驗用水為milli-q超純水。其它未提到的藥品和試劑均為北京化學試劑公司產品。

2.2實驗儀器與設備

uplc-q-tof/ms為waterssynaptg2四極桿飛行時間質譜儀配備acquityuplc系統(waters，美國)；超高效液相色譜-三級四極桿質譜儀(acquity-xevotq,waterscorp.,milford,ma,usa)；centrifuge5810r超速速冷凍離心機(eppendorf，德國)。

2.3黃嘌呤氧化酶抑制率的測定

終體積為200μl，20mu/ml的黃嘌呤氧化酶，150m的黃嘌呤，50mm的tris-hcl緩沖溶液(ph8.7)，5mg/ml生藥濃度的中藥提取液(且黃柏蒼術與銀杏葉的濃度與其占復方中的生藥濃度相同)，在37攝氏度反應5min，用四倍量的冰乙腈終止反應，加入終濃度為4μm/l的5-氟尿嘧啶作為內標，過0.22μm濾膜，進行超高效液相色譜-三級四極桿質譜分析。

液相條件：watersacquityuplcbehc18色譜柱(4.6×150mmi.d.,5μm；美國)；流動相a為乙腈，b為含0.1％的甲酸的水溶液；流速：0.3ml/min；柱溫：25℃；梯度：0-4min，10％a(90％b)-30％a(70％b)；4-7min，30％a(70％b)-80％a(20％b)；7-9min,80％a(20％b)-100％a(0％b)。

質譜條件：esi離子源，負離子掃描模式，毛細管電壓3.0kv；脫溶劑氣溫度350℃；脫溶劑氣流速650l/h；錐孔氣流速50l/h；離子源溫度120℃。抑制率(％)按下式計算：

i＝(a1-a2)/a1×100％

式中，i為藥液對黃嘌呤氧化酶的抑制率；a1為未加藥液的反應體系中尿酸相對內標物的峰面積；a2為有藥液的反應體系中尿酸相對內標物的峰面積。黃嘌呤氧化反應產物尿酸及內標物質5-氟尿嘧啶的質譜總離子流圖如圖1所示。

2.4質譜方法優化

表2尿酸和內標物5-氟尿嘧啶的質譜條件

2.5實驗結果

表3不同配比復方及相同生藥濃度的黃柏蒼術藥對與銀杏葉對黃嘌呤氧化酶的抑制率(mean±sd，n＝6)

從表3中可以看出，各對比例與實施例相比，抑制黃嘌呤氧化酶的活性較差，且組成復方的單位藥間并不存在協同作用。而各實施例均對黃嘌呤氧化酶活性具有較好的抑制作用，且復方抑制率明顯高于與復方中生藥濃度相同的黃柏蒼術藥對及銀杏葉單味藥的抑制率的加和，因此可以說以這些比例組成組方后，銀杏葉與黃柏蒼術藥對在抑制黃嘌呤氧化酶活性方面產生了協同作用，具有一定的研發價值。

通過上述實施例，本發明已經完全有效的達到了發明目的。熟悉該項技藝的人士應該明白本發明包括但不限于附圖、附表和上述實施例中描述的內容。任何不偏離本發明的功能和原理的修改都將包括在權利要求書的范圍中。