含有稻殼多酚的抗肺癌保健品的制作方法

本發明屬于保健品領域，具體涉及一種含有稻殼多酚的抗肺癌保健品。

背景技術：

肺癌是發病率和死亡率近年來增長最快的一種惡行腫瘤，每年死于肺癌的人數已經超過了一百萬，約占惡行腫瘤死亡人數的四分之一，近50年來許多國家都報道肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡行腫瘤的第一位，女性發病率占第二位，死亡率占第二位。近年來中藥組分配伍抗腫瘤研究是治療惡性腫瘤的新方向，尋找有效的抗癌藥物和方法，是世界醫學面臨的重要課題，中藥作為祖國醫學用來防治疾病的有力武器，與化學合成藥物相比，除了具有取材方便、價格低廉和毒副作用小等優點外，更重要的是，中藥的優勢在于改變腫瘤細胞的生物學行為從而抑制其生長發展，并保護機體的正常功能，使患者延長壽命，減輕痛苦，保持良好生活質量。同時，隨著社會的進步，生產力的發展，現代人越來越把注意力從化合成藥轉向天然藥，希望從天然藥物中開發出更為安全有效的新藥以替代前者，從而減少藥源疾病的發生，發展中草藥不僅傳承了中華民族千百年的精華，也具有廣大的市場前景及經濟效益。

技術實現要素：

本發明目的是提供一種具有抗肺癌功能的含有稻殼多酚的天然保健品，該保健品是以我國廣泛種植的禾本科糧食作物水稻的加工副產物稻殼出發，制備稻殼多酚和其他中藥提取物混合。

本發明采用的技術方案為：

含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚50-70％，地黃提取物5-10％，紫花地丁提取物5-10％，

水牛角提取物5-10％，女貞子提取物5-10％，中邊蓮提取物5-10％。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，所述稻殼多酚的制備方法如下：

1)纖維素酶酶解提取：料液比按質量比1:10-1:30，將稻殼粉末溶于水，纖維素酶加入量為120-180u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50-60℃，ph范圍值5.0-6.0，酶解時間為1-2h，離心，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續進行乙醇輔助提取；

2)乙醇輔助提取：料液比按質量比1:10-1:30，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數為50-70％，提取時間為2-3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續進行超聲浸提；

3)超聲浸提：超聲波功率為160-200w，超聲時間為20-30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗稻殼多酚干粉。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，所述地黃提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的地黃固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取地黃固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得地黃提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，所述紫花地丁提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的紫花地丁固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取紫花地丁固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得紫花地丁提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，水牛角提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的水牛角固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取水牛角固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得水牛角提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，女貞子提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的女貞子固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取女貞子固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得女貞子提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，中邊蓮提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的中邊蓮固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取中邊蓮固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得中邊蓮提取物。

本發明的有益效果是：

本發明開創性的技術是將稻殼多酚作為抗肺癌的核心功能性原料，提出用于治療肺癌的中藥組合物，配伍合理，形成具有抗肺癌的多酚、中草藥混合保健品。本發明通過對人體外肺癌細胞的實驗研究，發現稻殼多酚的組合物對體外腫瘤細胞具有較好的抑制作用，對于肺癌的防治有著非常顯著的效果，可以避免過多的化學合成藥物造成的毒副作用，而且價格低廉，來源廣泛，也使得稻殼多酚組合物受到廣泛關注。

本發明采用水稻加工副產物稻殼粉末提取的多酚作為活性物質，制備抗肺癌保健品或藥品，提取方法簡單，不存在合成藥劑的毒副作用，對設備的要求低，中間產物及終產物均無毒，安全性高，生產成本低，而且服用和攜帶十分的方便，吸收快速且效果好，因此擁有十分廣闊市場前景，適合工業生產。

附圖說明

圖1是稻殼多酚組合物對人肺癌細胞株973細胞生長影響。

圖2是稻殼多酚組合物抑制973細胞集落形成的集落試驗結果。

圖3是稻殼多酚組合物抑制973細胞遷移試驗結果。

具體實施方式

實施例1含有稻殼多酚的抗肺癌保健品

(一)稻殼多酚的制備

采用纖維素酶酶解—乙醇浸提—超聲波分步法的工藝組合提取稻殼多酚步驟如下：

1)纖維素酶酶解提取：將稻殼去除雜質，干燥，經粉碎機粉碎，過60目篩，制成稻殼粉末。料液比按質量比1:30，將稻殼粉末溶于水，纖維素酶加入量為150u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50℃，ph5.0，酶解時間為2h，4000r/min進行離心15min，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續進行乙醇浸提；

2)乙醇輔助提取：料液比按按質量比1：20，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數為60％，提取時間為3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續進行超聲提取；

3)超聲浸提：料液比按按質量比1:20，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分數為60％，超聲波功率為180w，超聲時間為30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗稻殼多酚干粉。

(二)地黃提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的地黃固體粉末；按質量比1:10比例稱取地黃固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得地黃提取物。

(三)紫花地丁提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的紫花地丁固體粉末；按質量比1:10比例稱取紫花地丁固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得紫花地丁提取物。

(四)水牛角提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的水牛角固體粉末；按質量比1:10比例稱取水牛角固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得水牛角提取物。

(五)女貞子提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的女貞子固體粉末；按質量比1:10比例稱取女貞子固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得女貞子提取物。

(六)中邊蓮提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的中邊蓮固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取中邊蓮固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得中邊蓮提取物。

(七)含有稻殼多酚的抗肺癌保健品組合物(簡稱稻殼多酚組合物)

由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚60％,地黃提取物5％,紫花地丁提取物10％，

水牛角提取物5％，女貞子提取物10％，中邊蓮提取物10％

(八)mtt實驗

本實施例使用人肺癌細胞株973細胞，采用mtt法檢測稻殼多酚組合物體外抗癌活性，實驗步驟如下：

1)取對數生長期的肺癌細胞系(973)細胞接種于96孔板，過夜培養使其貼壁；

2)稻殼多酚組合物的濃度(6.25、12.5和25mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后將96孔板放在37℃恒溫培養箱中繼續培養4h；

5)處理結束后，將mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓚晶體完全溶解；

6)通過測量每個孔在490nm處的吸光度值來評估973細胞的增值；結果如圖1所示。

如圖1所示，不同濃度的稻殼多酚組合物(6.25、12.5和25mg/ml)分別孵育973細胞24h，然后利用mtt比色法檢測。結果顯示，處理肺癌細胞一段時間后，濃度為12.5和25mg/ml的稻殼多酚組合物均表現出顯著的抑制作用，濃度為25mg/ml組抑制率在24h后達到了77.4％，結果表明，稻殼多酚組合物在體外可抑制人肺癌細胞生長。

(九)集落形成實驗

不同的處理組的肺癌細胞以每孔1000個細胞的密度接種于孔板上，培養過夜使其貼壁。分別加入12.5和25mg/ml的稻殼多酚組合物培養10d，吸出培養基，每孔用pbs仔細洗兩次。使用甲醇將集落固定20min，然后用0.5％結晶紫染色15min，用清水沖洗并拍照，結果如圖2所示。

如圖2所示，稻殼多酚組合物抑制肺癌細胞集落形成的集落試驗結果。稻殼多酚組合物孵育973細胞一段時間后，集落數量與對照組相比明顯降低。24小時后濃度為12.5mg/ml時能夠顯著減少肺癌細胞形成的集落，濃度為25mg/ml時集落的減少極顯著。

(十)transwell實驗

腫瘤細胞遷移實驗采用直徑為6.5mm的transwell小室，其中內孔大小為8.0μm。將973細胞血清饑餓24h，然后使用胰蛋白酶消化，計數，并用無血清1640培養基重懸。大約1×10⁵細胞被接種到上層小室，下層小室加入含有10％胎牛血清的1640培養基。細胞放在37℃培養24h。培養后，上層小室內表面的細胞被遷移。將穿過小室的細胞固定和染色并在顯微鏡下統計。每個實驗組做三個平行取其平均值，結果如圖3所示。

由圖3可見，腫瘤細胞的一個重要特點是他們具有入侵和遷移到遠端器官的能力，這是幾乎所有癌癥死亡的主要原因，利用transwell實驗分析米糠多酚組合物對973細胞的遷移影響。如圖3所示，與對照組相比，稻殼多酚組合物處理組973細胞跨膜遷移的數量大幅下降，結果顯示稻殼多酚組合物可以顯著抑制973細胞遷移。

實施例2含有稻殼多酚的抗肺癌保健品

(一)-(六)同實施例1。

(七)含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚70％，地黃提取物10％，紫花地丁提取物5％，

水牛角提取物5％，女貞子提取物5％,中邊蓮提取物5％。

實施例3含有稻殼多酚的抗肺癌保健品

(一)-(六)同實施例1。

(七)含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚50％,地黃提取物10％，紫花地丁提取物10％，

水牛角提取物10％，女貞子提取物10％,中邊蓮提取物10％。