一類具有高水合常數(shù)、良好穩(wěn)定性的核磁共振成像造影劑、制備方法及其應(yīng)用與流程

本發(fā)明屬于配位化學(xué)及醫(yī)用化學(xué)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種具有高水合常數(shù)、較好穩(wěn)定性、良好的生物相容性和高弛豫率的含有氮氧基團(tuán)的釓(ⅲ)配合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

核磁共振成像(mri，magneticresonanceimaging)是一種先進(jìn)的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)成像技術(shù)，其理論基礎(chǔ)是核磁共振現(xiàn)象(nuclearmagneticresonance)。

原子核由帶正電的質(zhì)子和不帶電的中子組成，具有方向性自旋的特性。具有奇數(shù)質(zhì)子或具有奇數(shù)中子結(jié)構(gòu)的原子核在其自旋過(guò)程中能夠產(chǎn)生自旋磁動(dòng)量，即原子核磁矩。人體中大量的核磁矩在無(wú)外加磁場(chǎng)時(shí)，其方向是隨機(jī)排列的。在外加磁場(chǎng)b0的作用下，磁矩沿著外加磁場(chǎng)方向排列——平行于外加磁場(chǎng)或者反向于外加磁場(chǎng)，隨之產(chǎn)生高低兩種能級(jí)。處于兩種能級(jí)的原子核自旋產(chǎn)生的磁化矢量加和，稱為宏觀磁化矢量mz。對(duì)置于外磁場(chǎng)中的自旋核系統(tǒng)，沿著垂直于外磁場(chǎng)的方向施加一定頻率的射頻電磁場(chǎng)b1，自旋系統(tǒng)吸收射頻能量，處于激發(fā)態(tài)，此時(shí)宏觀磁化矢量mz發(fā)生偏轉(zhuǎn)，即核磁共振現(xiàn)象。

當(dāng)射頻脈沖停止后，自旋系統(tǒng)將釋放出能量并逐漸恢復(fù)至平衡態(tài)，這一過(guò)程叫做弛豫(relaxation)。恢復(fù)過(guò)程有兩種方式，一種是通過(guò)質(zhì)子與其周圍環(huán)境進(jìn)行能量交換而恢復(fù)，所需的時(shí)間用t1表示，即自旋-晶格弛豫時(shí)間，也叫縱向弛豫時(shí)間，代表縱向磁化矢量從零恢復(fù)至宏觀磁化矢量(即最大值)的63％時(shí)所需的時(shí)間；另一種是通過(guò)電荷與電荷相互作用而恢復(fù)，所需時(shí)間用t2表示，也叫橫向弛豫時(shí)間，即自旋-自旋弛豫時(shí)間，代表橫向磁化矢量從最大值減少到最大值的37％處所需的時(shí)間。弛豫時(shí)間t1、t2兩個(gè)參數(shù)的差異，是mri用于臨床診斷最主要的物理基礎(chǔ)。

氫核具有最強(qiáng)的磁矩，加之人體中存在大量的水和碳?xì)浠衔?，因此成為人體成像的首選核種。mri利用人體中不同軟組織中水分子的氫質(zhì)子的弛豫運(yùn)動(dòng)的差別，在外界磁場(chǎng)下產(chǎn)生不同的共振信號(hào)來(lái)成像，通過(guò)圖像的明暗變化達(dá)到用肉眼區(qū)分辨別不同的組織器官的目的，具有空間分辨率高和對(duì)人體無(wú)損傷的特性。

由于不同組織或腫瘤組織的弛豫時(shí)間會(huì)有所重疊，mri的靈敏度不夠高，所以很有必要提高其成像對(duì)比度，造影劑(contrastagent)應(yīng)運(yùn)而生。造影劑本身不產(chǎn)生信號(hào)，它們通過(guò)縮短組織局部氫核的弛豫時(shí)間，與周圍組織形成對(duì)比，增強(qiáng)mri成像辨析度，從而有效檢測(cè)出正常組織與患病部位的成像差異。根據(jù)加速弛豫的原理不同可以將造影劑分為t1型、t2型兩類。t1(縱向)型造影劑可以使成像變亮，一般為過(guò)渡金屬fe、mn、gd等離子的螯合物，在當(dāng)前臨床使用的商業(yè)化造影劑中應(yīng)用最廣泛。gd³⁺由于具有7個(gè)未成對(duì)電子，具有高順磁性和較長(zhǎng)的電子弛豫時(shí)間，因而其配合物成為t1型造影劑的最佳選擇。t2(橫向)型造影劑可以使成像變暗，通常是具有獨(dú)特晶體結(jié)構(gòu)的fe3o4納米粒子一類的鐵磁性物質(zhì)。

弛豫率(relaxivity)是弛豫時(shí)間的倒數(shù)，是衡量造影劑加速弛豫效果的重要參數(shù)，即單位濃度的造影劑引起弛豫速率改變的程度。由solomon-bloembergen-morgan(sbm)方程可知，若要提高弛豫率，可以采取三種方法：提高水合常數(shù)q，縮短結(jié)合水分子停留時(shí)間τm，延長(zhǎng)配合物旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間τr。其中只有先達(dá)到較長(zhǎng)的旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間τr，縮短τm才有意義。延長(zhǎng)τr最常用的辦法是增大造影劑的流體力學(xué)半徑，將其和超分子或者大分子連接起來(lái)。而對(duì)于小分子造影劑來(lái)說(shuō)，提高水合常數(shù)q是普遍的做法。

目前常用的基于dtpa和dota的商用造影劑q值均為1。通過(guò)形成六配位或七配位的配體可以提高水合常數(shù)。然而隨著配位數(shù)的減少，配合物的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性也會(huì)大幅度降低，存在著釓離子游離出造影劑分子置換生物體中多種多肽及酶中ca離子而引起人體中毒的風(fēng)險(xiǎn)。所以對(duì)于釓(iii)配合物小分子造影劑的研究中，不僅要關(guān)注弛豫率的提高，還要關(guān)注其穩(wěn)定性和安全性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于制備一類具有高水合常數(shù)(q)且穩(wěn)定性良好的小分子核磁共振成像造影劑。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明制備的造影劑配體含有三個(gè)氧化叔胺基團(tuán)、三個(gè)羧基基團(tuán)和兩個(gè)酰胺基團(tuán)。其結(jié)構(gòu)式如下：

所述r1、r2基團(tuán)為多種取代官能基團(tuán)，包括氫、c1-c24烷基鏈、芳香基團(tuán)、雜環(huán)基團(tuán)。

進(jìn)一步的，所述芳香基團(tuán)包括苯基、萘基、芘基或蒽基以及烷基、鹵素、羥基或羧基取代的基團(tuán)。

進(jìn)一步的，所述雜環(huán)基團(tuán)包括哌啶，嗎啡啉、吡咯、噻吩、吡啶、哌嗪、吡喃、呋喃、咪唑或吡唑。

本發(fā)明還提出一類具有高水合常數(shù)且穩(wěn)定性良好的核磁共振成像造影劑的制備方法，包含以下步驟：

(1)、二乙三胺五乙酸二酸酐的制備：將二乙三胺五乙酸溶于吡啶中攪拌分散，加入乙酸酐，65℃條件下回流反應(yīng)24小時(shí)，將混合液過(guò)濾，用乙酸酐和乙醚分別洗滌濾渣，得到白色固體二乙三胺五乙酸二酸酐。結(jié)構(gòu)如下：

(2)、將(1)所得酸酐溶于dmf中，加入胺類物質(zhì)，在氮?dú)鈿夥障?0℃攪拌反應(yīng)24小時(shí)，除去溶劑后所得粗產(chǎn)物用乙醇/乙醚體系重結(jié)晶，得到含有二酰胺三羧酸結(jié)構(gòu)的化合物，結(jié)構(gòu)如下：

(3)、將(2)所述化合物溶于甲醇中，加入過(guò)氧化氫溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)三天，得到粗產(chǎn)物，除去溶劑，除水干燥后，用水/乙醇體系進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有氧化叔胺基團(tuán)的化合物，結(jié)構(gòu)如下：

(4)、將(3)得到的產(chǎn)物溶解在甲醇中，加入當(dāng)量比是1:1.03～1:1.04的六水合氯化釓,加入少量吡啶，65℃攪拌反應(yīng)1天，除去溶劑干燥后，將粗產(chǎn)物溶于水，調(diào)節(jié)ph至10左右，使多余的釓離子沉淀，過(guò)濾除掉沉淀，除去溶劑得到含有羧酸、酰胺及氧化叔胺基團(tuán)配體的釓配合物。結(jié)構(gòu)如下：

(5)、造影劑分子水合常數(shù)q的測(cè)定:與eu配合的配體分子的熒光衰減曲線由bioteksynergy^tmht多功能酶標(biāo)儀測(cè)得，將配體分子與金屬銪配位后，定量溶解在氘水與水比例不同的混合溶劑中，得到分子熒光衰減曲線后經(jīng)擬合計(jì)算得到不同溶劑條件下分子的熒光壽命(τ)，由分子熒光壽命的倒數(shù)對(duì)氘水在溶劑中含量作圖，直線擬合利用外推法得到分子在純氘水中的熒光壽命的倒數(shù)(τd2o)，通過(guò)公式：

計(jì)算得出分子水合常數(shù)q。通過(guò)水合常數(shù)q的測(cè)定測(cè)得的氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與eu的配合物的水合常數(shù)為3.37，氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體與eu的配合物的水合常數(shù)為3.28，說(shuō)明了所合成造影劑分子具有較高的水合常數(shù)。

(6)、核磁共振成像及弛豫率測(cè)定：成像效果及弛豫率用西門子trio1.5t磁共振成像設(shè)備進(jìn)行測(cè)定，先將釓配合物按濃度梯度稀釋，盛放在1.5ml的離心管中，在1.5t場(chǎng)強(qiáng)下采用反轉(zhuǎn)恢復(fù)法進(jìn)行核磁共振成像，通過(guò)圖像的亮度可以計(jì)算出每個(gè)濃度溶液的縱向弛豫時(shí)間(t1)，再通過(guò)公式：

c·r1+1/tw＝1/t1

計(jì)算出每個(gè)濃度下t1(其中c為釓含量，tw為水分子的縱向弛豫時(shí)間)，最后通過(guò)計(jì)算機(jī)擬合得到造影劑的弛豫率r1。其中釓含量利用全譜直讀等離子體發(fā)射光譜(icp-aes)進(jìn)行測(cè)定。

通過(guò)核磁共振成像實(shí)驗(yàn)分別測(cè)得的r1＝14.0mm^-1s^-1，r1＝16.4mm^-1s^-1等，為商用gd-dtpa(馬根維顯r1＝4.9mm^-1s^-1)的2.86,3.35倍等。這種氮氧化二酰胺三羧酸的釓配合物具有較高的弛豫率，且合成和提純方法簡(jiǎn)潔，為以后的實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

(7)、穩(wěn)定性的測(cè)定：配合物的穩(wěn)定性由梅特勒-托利多fiveeasyplus臺(tái)式ph計(jì)經(jīng)過(guò)hypersquad軟件模擬測(cè)得。先將配體溶于水，ph調(diào)至3左右，不斷滴加naoh堿液，記錄滴加堿液的體積和ph的變化情況直至ph變化至11，用hypersquad軟件模擬測(cè)得配體的解離常數(shù)。同樣將配合物溶于水進(jìn)行ph滴定，ph變化范圍控制在3-11，在hypersquad軟件中將配體的解離常數(shù)設(shè)置為恒定值，通過(guò)擬合得到配合物的穩(wěn)定性常數(shù)。

通過(guò)ph滴定和hypersquad軟件進(jìn)行模擬測(cè)得將氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與將氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體穩(wěn)定性常數(shù)分別為：loggdl1＝17.36，loggdl2＝18.14，均大于商用的gd-omniscan(16.85)，取得了良好的穩(wěn)定性效果。

(8)、生物相容性的測(cè)定：采用mtt法以hela細(xì)胞為測(cè)試細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性測(cè)試。具體過(guò)程如下：將hela細(xì)胞以4000個(gè)孔的密度接種到九十六孔板中，貼壁培養(yǎng)24小時(shí)；培養(yǎng)結(jié)束后，除去培養(yǎng)液并用磷酸緩沖鹽溶液將細(xì)胞洗滌多次；將氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與釓(iii)的配合物樣品、氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體與釓(iii)的配合物樣品配制成一定濃度的溶液并過(guò)濾，然后稀釋至不同的濃度：20μm,40μm,60μm,80μm,100μm,150μm,200μm；將稀釋后的不同濃度的樣品加入上述細(xì)胞中，再分別培養(yǎng)12、24和48小時(shí)；經(jīng)過(guò)后續(xù)步驟處理后，測(cè)定細(xì)胞在492nm波長(zhǎng)處的吸光度值。細(xì)胞存活率用實(shí)驗(yàn)組吸光度值與空白組吸光度值的百分比表示。

通過(guò)細(xì)胞毒性測(cè)試可以發(fā)現(xiàn)，對(duì)于氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與釓(iii)的配合物和氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體與釓(iii)的配合物溶液樣品，在與hela細(xì)胞分別培養(yǎng)12小時(shí)，24小時(shí)以及48小時(shí)候，這些細(xì)胞仍然保持較高的存活率，甚至當(dāng)釓(iii)的濃度達(dá)到200μm時(shí)，細(xì)胞存活率仍然大于87％。

附圖說(shuō)明

圖1為按照實(shí)施例1得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖2為按照實(shí)施例2得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖3為按照實(shí)施例3得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖4為按照實(shí)施例4得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖5為按照實(shí)施例5得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖6為按照實(shí)施例6得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖7為按照實(shí)施例7得到的核磁共振成像造影劑縱向弛豫時(shí)間(t1)的倒數(shù)隨釓濃度的變化圖。

圖8為按照實(shí)施例1得到的氘水與水比例不同的混合溶劑中的分子熒光衰減曲線。

圖9為按照實(shí)施例1得到的分子熒光壽命的倒數(shù)對(duì)氘水在溶劑中含量的圖，直線擬合圖形。

圖10為按照實(shí)例1得到的氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與釓的ph滴定擬合曲線。

圖11為按照實(shí)例2得到的氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體與釓的ph滴定擬合曲線。

圖12為按照實(shí)例1得到的氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與釓的配合物在小鼠體內(nèi)的活體成像圖。

圖13為按照實(shí)例2得到的氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體與釓的配合物在小鼠體內(nèi)的活體成像圖。

圖14為按照實(shí)例1得到的氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺配體與釓的配合物的細(xì)胞毒性測(cè)試圖。

圖15為按照實(shí)例2得到的氮氧化二乙三胺五乙酸雙異丙胺酰胺配體與釓的配合物的細(xì)胞毒性測(cè)試圖。

有益效果

本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)，以氮氧化二乙烯三胺五乙酸(dtpa)雙酰胺類化合物為骨架，含有三個(gè)氧化叔胺基團(tuán)的氮氧化二酰胺三羧酸配體與釓(ⅲ)離子的配位，可以形成一類具有高水合常數(shù)、良好的生物相容性和較好穩(wěn)定性的釓(ⅲ)配合物,在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。主要優(yōu)點(diǎn)在于:

(1)設(shè)計(jì)合成了水合常數(shù)為3的配合物，從而大大提高了該類配合物作為造影劑分子的弛豫率。

(2)設(shè)計(jì)合成了具有三個(gè)氮氧基團(tuán)、兩個(gè)酰胺基團(tuán)和三個(gè)羧基團(tuán)的小分子氮氧化物，通過(guò)配體分子中三個(gè)氮氧基團(tuán)上的氧原子及三個(gè)乙酸基上的氧原子與釓形成螯合物，利用釓離子與氧原子的鍵合比傳統(tǒng)的釓離子與氮原子的鍵合更強(qiáng)的特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了配體的較高的穩(wěn)定性。

(3)設(shè)計(jì)合成的釓類配合物細(xì)胞毒性較小，具有良好的生物相容性和較高的安全性。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。

以下實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)材料和試劑如無(wú)特別說(shuō)明均可從市售渠道獲得。

實(shí)施例1

(1)、二乙三胺五乙酸二酸酐的制備。將13.12g二乙三胺五乙酸溶于10ml吡啶中，攪拌分散后加入31.48ml乙酸酐，10ml乙腈，在65℃下攪拌回流反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后分別用乙酸酐、乙醚洗滌沉淀物，得到9.82g白色固體產(chǎn)物。

(2)、二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺的制備。將二乙三胺五乙酸二酸酐(2.052g，5.74mmol)置于schlenk瓶中，抽真空換氮?dú)夂螅茸⑷雂mf10ml，攪拌分散15分鐘，此時(shí)體系仍呈現(xiàn)白色渾濁。再注入單異丙胺1.033ml(12.054mmol)攪拌片刻體系即變?yōu)槌吻?。?5℃下攪拌反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將溶液轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，旋蒸除去溶劑，得到粗產(chǎn)物。將上述產(chǎn)物用乙醇/乙醚進(jìn)行重結(jié)晶，得到淡黃色固體2.56g。

(3)、氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺的制備。將二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺(2g,4.21mmol)置于圓底燒瓶中，加入甲醇(5ml),30％的雙氧水(7.5ml)，室溫下攪拌反應(yīng)3天。結(jié)束后，向體系中加入鈀碳除去多余的雙氧水，過(guò)濾除去鈀碳。旋蒸并抽真空除去溶劑，得到白色固體粉末1.9g。

(4)、釓配合物的制備。將210mg(0.4mmol)的上步產(chǎn)物溶于10ml甲醇中，攪拌分散15分鐘。六水合氯化釓(0.1516g,0.408mmol)溶于2ml甲醇中加入上述體系，并加入0.35ml吡啶，60℃回流反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑得到白色粗產(chǎn)物，溶于水并調(diào)節(jié)ph至10左右，過(guò)濾除去少量不溶物，旋蒸并抽真空除去水得到白色固體粉末140mg。

(5)、核磁共振成像及弛豫率測(cè)試：成像效果及弛豫率用西門子trio1.5t磁共振成像設(shè)備進(jìn)行測(cè)定。先將氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺與釓的配合物配成1mm的溶液，之后分別按濃度梯度稀釋為0.1mm、0.2mm、0.3mm、0.4mm、0.5mm、0.6mm、0.7mm、0.8mm、0.9mm、1mm的溶液盛放在1.5ml的離心管中，在1.5t場(chǎng)強(qiáng)下采用反轉(zhuǎn)恢復(fù)法進(jìn)行核磁共振成像，通過(guò)圖像的亮度可以計(jì)算出每個(gè)濃度溶液的縱向弛豫時(shí)間(t1)，再通過(guò)公式：

c·r1+1/tw＝1/t1

計(jì)算出每個(gè)濃度下t1(其中c為釓含量，tw為水分子的縱向弛豫時(shí)間)，最后通過(guò)計(jì)算擬合得到造影劑的弛豫率r1＝14mm^-1s^-1。

(6)、造影劑分子水合常數(shù)q的測(cè)定：將氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺209mg與150mg的六水合氯化銪分別溶于10ml和2ml甲醇中，加入少量0.35ml吡啶，60℃下反應(yīng)24小時(shí)得到配合物。分別配置氘水和水比例為8：2，6：4，5：5，4：6，2：8，0：1配合物濃度為5mm的溶液，分別由bioteksynergytmht多功能酶標(biāo)儀測(cè)得其熒光衰減曲線，得到分子熒光衰減曲線后經(jīng)擬合計(jì)算得到不同溶劑條件下分子的熒光壽命(τ)，由分子熒光壽命的倒數(shù)對(duì)氘水在溶劑中含量作圖，直線擬合利用外推法得到分子在純氘水中的熒光壽命的倒數(shù)(τd2o)，通過(guò)公式：

計(jì)算得出分子水合常數(shù)q。

通過(guò)水合常數(shù)q的測(cè)定測(cè)得的氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺的銪配合物的水合常數(shù)為3.27。

(7)、穩(wěn)定性的測(cè)定：配合物的穩(wěn)定性由梅特勒-托利多fiveeasyplus臺(tái)式ph計(jì)經(jīng)過(guò)hypersquad軟件模擬測(cè)得。先將氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺溶于水，ph調(diào)至3左右，不斷滴加naoh堿液，記錄滴加堿液的體積和ph的變化情況直至ph變化至11，用hypersquad軟件模擬測(cè)得配體的解離常數(shù)。同樣將配合物溶于水進(jìn)行ph滴定，ph變化范圍控制在3-11，在hypersquad軟件中將配體的解離常數(shù)設(shè)置為恒定值，通過(guò)曲線擬合得到配合物的穩(wěn)定性常數(shù)。

通過(guò)ph滴定和hypersquad軟件進(jìn)行模擬測(cè)得氮氧化二乙三胺五乙酸單異丙胺酰胺與釓形成的配合物的穩(wěn)定性常數(shù)為：loggdl1＝17.36，大于商用的gd-omniscan(16.85)，取得了良好的穩(wěn)定性效果。

實(shí)施例2

用雙異丙胺代替單異丙胺，其余同實(shí)施例1，測(cè)得r1＝16.4mm^-1s^-1，與釓形成的配合物的穩(wěn)定性常數(shù)為：loggdl1＝18.14。

實(shí)施例3

用二乙胺代替單異丙胺，其余同實(shí)施例1，測(cè)得r1＝18.7mm^-1s^-1。

實(shí)施例4

用異丁胺代替單異丙胺，其余同實(shí)施例1，測(cè)得r1＝15.9mm^-1s^-1。

實(shí)施例5

用正丁胺代替單異丙胺，其余同實(shí)施例1，測(cè)得r1＝14.7mm^-1s^-1。

實(shí)施例6

用芐胺代替單異丙胺，其余同實(shí)施例1，測(cè)得r1＝12.5mm^-1s^-1。

實(shí)施例7

用哌啶代替單異丙胺，其余同實(shí)施例1，測(cè)得r1＝18.3mm^-1s^-1。