一種牡丹皮配方顆粒的制備方法及其質量檢測方法與流程

本發明涉及一種中藥配方顆粒及其制備方法，特別涉及一種牡丹皮配方顆粒的制備方法及其質量檢測方法，屬于中藥制藥領域。

背景技術：

配方顆粒是針對中藥有效成分的理化性質,利用現代生產技術，以中藥飲片為原料，經過合適的提取、濃縮、干燥、制粒等步驟，使有效成分更大限度地被提取出來，除去雜質，采用合適的包裝等方法，提高了中藥制劑的穩定性。

目前配方顆粒質量控制內容包括外觀鑒別、性狀檢查以及有效成分的含量測定，較難全面科學的評價中藥材及其制劑的質量。指紋圖譜能全面反映內在化學成分的品種與數量，進而反映重要的質量。采用中藥指紋圖譜的方式，將有效的表征中藥質量，可以用于中藥及中藥制劑真偽、一致性和穩定性的評價。

牡丹皮配方顆粒的制備工藝及其質量檢測方法相關文獻報道較少，專利號201410429349.7公開了一種牡丹皮配方顆粒的質量檢測方法，涉及丹皮酚的薄層鑒別和含量測定。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種牡丹皮配方顆粒的制備方法及其質量檢測方法。

牡丹皮配方顆粒的制備方法包括如下步驟：

(1)取牡丹皮飲片，加水煎煮兩次，第一次加入投料量8～12倍水，浸潤0.5～1小時，加熱至沸騰后煎煮0.5～2小時，藥液濾過，第二次加入投料量8～12倍水，加熱至沸騰后煎煮0.5～2小時，藥液濾過，合并兩次濾液。

(2)將濾液泵入藥液貯罐，靜置1～2小時,200～300目濾布過濾得到藥液，藥液置濃縮器中減壓濃縮，濃縮至60～80℃時相對密度為1.06～1.12的流浸膏。所述濃縮器的蒸汽壓力為0.06～0.1mpa，真空度為-0.10～-0.05mpa，濃縮溫度為50～85℃。

(3)將所述流浸膏與糊精或乳糖或麥芽糊精等輔料混合，攪拌均勻，進行噴霧干燥，工藝參數為：藥液預熱溫度40～50℃；進風溫度160～200℃；出風溫度80～100℃；霧化壓力0.2～0.5兆帕，噴霧速度為1～10ml/s，得牡丹皮浸膏粉。再加入輔料干法制粒，干法制粒參數為：主壓輪壓力0.5～3.5mpa；軋輪轉速6～18hz；送粉速度8～16r/min。輔料加入量為牡丹皮飲片質量的0～13％，得18～60目牡丹皮配方顆粒。

上述牡丹皮配方顆粒的指紋圖譜測定方法包括如下步驟：

(1)對照品溶液的制備：精密稱定芍藥苷對照品，加甲醇配制成每1ml含芍藥苷0.025～0.05mg的溶液，作為對照品溶液。

(2)取牡丹皮配方顆粒粉末約0.1～0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％～100％甲醇25～50ml，密塞，稱定重量，超聲處理15～60分鐘，放冷，再稱定重量，用70％～100％甲醇補足減失的，搖勻，濾過，即得。

(3)測定法：精密吸取供試品溶液5～20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

本發明牡丹皮配方顆粒的指紋圖譜測定方法色譜條件如下：

色譜柱kromasil100-5-c18(4.6mm×250mm，5μm)，流速0.8～1ml/min，檢測波長230～260nm，流動相a為乙腈，b為0.1％甲酸；梯度洗脫：0～20min,10％～20％；20～30min，20％～20％；30～50min，20％～30％；50～70min，30％～40％；柱溫25～35℃。

精密度試驗

取同一份供試品溶液連續進樣6次，以芍藥苷色譜峰為參照峰計算1～11號峰的相對保留時間和相對峰面積的rsd值，其中各共有峰的相對保留時間rsd小于3.0％，相對峰面積rsd值小于5.0％，表明儀器測試精度良好。

重復性試驗

取同一批樣品(批號：160801)6份，分別按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，以芍藥苷色譜峰為參照峰計算1～11號峰的相對保留時間和相對峰面積的rsd值，其中各共有峰的相對保留時間rsd小于3.0％，相對峰面積rsd值小于5.0％，表明方法重復性良好。

穩定性試驗

取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、18、24h進樣，以芍藥苷色譜峰為參照峰計算1～11號峰的相對保留時間和相對峰面積的rsd值，其中各共有峰的相對保留時間rsd小于3.0％，相對峰面積rsd值小于5.0％，表明供試品溶液在24h內穩定性。

指紋圖譜的建立

取10批牡丹皮配方顆粒，進行指紋圖譜測定，得到相應的指紋圖譜，見圖1。采用國家藥典委員會開發的“中藥指紋圖譜相似度評價系統(2004a)”軟件對10批樣品的指紋圖譜進行分析，采用中位數法，對各指紋圖譜色譜峰進行多點校正和自動匹配，生成標準指紋圖譜，見圖2，其中共有峰11個，采用對照品溶液指認其中2個共有峰，分別為4號峰芍藥苷，11號峰丹皮酚，以峰面積較大、出峰穩定的4號峰芍藥苷為參照峰。

本發明的有益效果是：

本發明配方顆粒制備方法采用噴霧干燥、干法制粒工藝，自動化程度高、成本低，得到的牡丹皮配方顆粒每克相當于生藥材4～10克。生產的配方顆粒質量均一、穩定、可控，具有免煎速溶、攜帶方便等優點，既符合傳統中醫藥理論又與現代技術相結合，適應現代人的生活需求療效更顯著。克服了傳統飲片受儲存、運輸過程藥材成分含量波動大，影響藥物療效，是傳統飲片有效的補充。牡丹皮配方顆粒預防性給藥可明顯降低實驗性高脂血癥小鼠血清總膽固醇含量，優于牡丹皮水提液，牡丹皮配方顆粒在抑制大鼠足腫脹度即抑制炎癥起效時間短，并且作用時間長。

本發明建立的指紋圖譜檢測方法，標定了11個共有峰。本方法方便、快捷、具有良好的精密度高、重復性，以及穩定性，為提高該牡丹皮配方顆粒的質量控制提供一種新方法。

附圖說明

圖110批牡丹皮配方顆粒高效液相指紋圖譜及其共有模式

圖2牡丹皮配方顆粒標準指紋圖譜

具體實施方式

下面通過實施例對本發明做進一步詳細說明，這些實施例僅用來說明本發明，并不限制本發明的范圍。

實施例1

(1)取牡丹皮飲片50kg，加水煎煮兩次，第一次加入40kg水，浸潤0.5小時，加熱至沸騰后煎煮2小時，藥液濾過，第二次加入40kg水，加熱至沸騰后煎煮1小時，藥液濾過，合并兩次濾液。

(2)將濾液泵入藥液貯罐，靜置1小時,300目濾布過濾得到藥液，藥液置濃縮器中減壓濃縮，濃縮至60℃時相對密度為1.08的流浸膏。所述濃縮器的蒸汽壓力為0.08mpa，真空度為-0.07mpa，濃縮溫度為70℃。

(3)將所述流浸膏與糊精混合，攪拌均勻，進行噴霧干燥，工藝參數為：藥液預熱溫度50℃；進風溫度180℃；出風溫度85℃；霧化壓力0.3兆帕，噴霧速度為5ml/s，得牡丹皮浸膏粉，再加入糊精,干法制粒，干法制粒參數為：主壓輪壓力2mpa；軋輪轉速16hz；送粉速度10r/min，輔料加入量為牡丹皮飲片質量的5％，得18～60目牡丹皮配方顆粒10kg。

上述制備方法牡丹皮配方顆粒指紋圖譜測定方法：

色譜柱kromasil100-5-c18(4.6mm×250mm，5μm)，流速0.8ml/min，檢測波長230nm，流動相a為乙腈，b為0.1％甲酸；梯度洗脫：0～20min,10％～20％；20～30min，20％～20％；30～50min，20％～30％；50～70min，30％～40％；柱溫35℃。

(1)對照品溶液的制備：精密稱定芍藥苷對照品，加甲醇配制成每1ml含芍藥苷0.025mg的溶液，作為對照品溶液。

(2)取牡丹皮配方顆粒粉末約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用80％甲醇補足減失的，搖勻，濾過，即得。

測定法：精密吸取供試品溶液20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

實施例2：

(1)取牡丹皮飲片40kg，加水煎煮兩次，第一次加入480kg水，浸潤1小時，加熱至沸騰后煎煮1.5小時，藥液濾過，第二次加入480kg水，加熱至沸騰后煎煮1.5小時，藥液濾過，合并兩次濾液。

(2)將濾液泵入藥液貯罐，靜置1.5小時,300目濾布過濾得到藥液，藥液置濃縮器中減壓濃縮，濃縮至60℃時相對密度為1.10的流浸膏。所述濃縮器的蒸汽壓力為0.08mpa，真空度為-0.08mpa，濃縮溫度為65℃。

(3)將所述流浸膏與糊精等輔料混合，輔料加入量為牡丹皮飲片質量的12％，攪拌均勻，進行噴霧干燥，工藝參數為：藥液預熱溫度50℃；進風溫度175℃；出風溫度80℃；霧化壓力0.5兆帕，噴霧速度為7ml/s，得牡丹皮浸膏粉，再加入輔料干法制粒，干法制粒參數為：主壓輪壓力2.5mpa；軋輪轉速17hz；送粉速度15r/min，輔料加入量為牡丹皮飲片質量的12％，得18～60目牡丹皮配方顆粒10kg。

上述制備方法牡丹皮配方顆粒指紋圖譜測定方法：

色譜柱kromasil100-5-c18(4.6mm×250mm，5μm)，流速1ml/min，檢測波長245nm，流動相a為乙腈，b為0.1％甲酸；梯度洗脫：0～20min,10％～20％；20～30min，20％～20％；30～50min，20％～30％；50～70min，30％～40％；柱溫35℃。

(1)對照品溶液的制備：精密稱定芍藥苷對照品，加甲醇配制成每1ml含芍藥苷0.05mg的溶液，作為對照品溶液。

(2)取牡丹皮配方顆粒粉末約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70％甲醇補足減失的，搖勻，濾過，即得。

測定法：精密吸取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

實施例3：

(1)取牡丹皮飲片90kg，加水煎煮兩次，第一次加入900kg水，浸潤1小時，加熱至沸騰后煎煮0.5小時，藥液濾過，第二次加入900kg水，加熱至沸騰后煎煮0.5小時，藥液濾過，合并兩次濾液。

(2)將濾液泵入藥液貯罐，靜置2小時,300目濾布過濾得到藥液，藥液置濃縮器中減壓濃縮，濃縮至60℃時相對密度為1.12的流浸膏。所述濃縮器的蒸汽壓力為0.09mpa，真空度為-0.09mpa，濃縮溫度為60℃。

(3)將所述流浸膏與糊精等輔料混合，輔料加入量為牡丹皮飲片質量的1％，攪拌均勻，進行噴霧干燥，工藝參數為：藥液預熱溫度50℃；進風溫度185℃；出風溫度85℃；霧化壓力0.4兆帕，噴霧速度為8ml/s，得牡丹皮浸膏粉，再加入輔料干法制粒，干法制粒參數為：主壓輪壓2.5mpa；軋輪轉速18hz；送粉速度16r/min，輔料加入量為牡丹皮飲片質量的1％，得18～60目牡丹皮配方顆粒10kg。

上述制備方法牡丹皮配方顆粒指紋圖譜測定方法：

色譜柱kromasil100-5-c18(4.6mm×250mm，5μm)，流速1ml/min，檢測波長245nm，流動相a為乙腈，b為0.1％甲酸；梯度洗脫：0～20min,10％～20％；20～30min，20％～20％；30～50min，20％～30％；50～70min，30％～40％；柱溫30℃。

(1)對照品溶液的制備：精密稱定芍藥苷對照品，加甲醇配制成每1ml含芍藥苷0.03mg的溶液，作為對照品溶液。

(2)取牡丹皮配方顆粒粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入100％甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理45分鐘，放冷，再稱定重量，用100％甲醇補足減失的，搖勻，濾過，即得。

測定法：精密吸取供試品溶液5μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

對比例1

取牡丹皮飲片50kg，加水煎煮兩次，第一次加入40kg水，浸潤0.5小時，加熱至沸騰后煎煮2小時，藥液濾過，第二次加入40kg水，加熱至沸騰后煎煮1小時，藥液濾過，合并兩次濾液，濾液濃縮至1000ml即得。

藥效實驗

下面對實施例1配方顆粒與對比例1牡丹皮水提液兩者藥效進行對比研究。

1.牡丹皮配方顆粒預防性給藥對實驗性高脂血癥小鼠血脂含量的影響

1.1實驗目的

觀察牡丹皮配方顆粒對預防實驗性高脂血癥發生的治療作用。

1.2實驗動物

昆明小鼠，120只，雄性，體重20～22g。購自吉林大學基礎醫學院動物實驗中心。

1.3藥品及試劑

受試藥：牡丹皮配方顆粒，棕黃色粉末狀顆粒(實施例1制得配方顆粒，芍藥苷含量15mg/g)；牡丹皮水提液(對比例1制得水提液，芍藥苷含量15mg/g)，實驗時以0.5％羧甲基纖維素鈉(cmc)配制成所需濃度的混懸液。

陽性對照藥：西藥選用煙酸片，天津力生制藥股份有限公司生產；膽固醇，上海新興化工試劑研究所產品；膽酸鈉，上海化學試劑站分裝廠進口分裝；豬油，由本研究組提供；血清總膽固醇(tc)；甘油三脂(tg)；高密度脂蛋白膽固醇(hdl–cho)和低密度脂蛋白膽固醇(ldl–cho)含量測定試劑盒。北京中生生物工程高技術公司產品。

1.4方法

動物購入后適應環境3天，隨機分為：空白對照組、高脂模型組、西藥陽性藥煙酸片組(給藥劑量每5天遞增1次，從0.3g/kg逐漸增至1.2g/kg)、牡丹皮水提液組(1.5g/kg)、牡丹皮配方顆粒高、中、低劑量組(3.0、1.5、0.75g/kg)。每組15只。空白對照組動物飼以常規飼料；其他組動物均飼以高脂飼料。實驗動物每天上午灌胃給藥1次，正常對照組及高脂模型組動物灌胃等容量蒸餾水，連續給藥16周。最后1次給藥當晚，動物禁食16小時，次日早摘眼球取血0.5ml，離心分離血清，測總膽固醇(tc)、甘油三脂(tg)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-cho)和低密度脂蛋白膽固醇(ldl-cho)含量。所測指標數據以均數加減標準差(x±s)表示，統計學處理方法采用組間t-檢驗。

1.5結果與討論

連續飼以高脂飼料16周后，模型組動物的血清總膽固醇含量，低密度脂蛋白膽固醇含量較空白對照組明顯升高(均為p<0.001)；但血清甘油三脂含量和高密度脂蛋白膽固醇含量變化不明顯(與空白對照組比較p>0.05)。牡丹皮配方顆粒高、中劑量組(3.0、1.5g/kg)動物的血清總膽固醇含量均明顯低于高脂模型組(p<0.001、p<0.01)。而且牡丹皮配方顆粒高劑量組(3.0g/kg)降低血清總膽固醇，以及降低血清總膽固醇與高密度脂蛋白膽固醇含量比值(tc/hdl-cho)的作用(與煙酸片組及牡丹皮水提液組比較均為p<0.05)，明顯優于陽性對照藥煙酸片和牡丹皮水提液。但不論是陽性對照藥還是所研究的新藥在用藥16周時間內，對升高的低密度脂蛋白膽固醇含量的降低作用不明顯(各組與高脂模型組比較均為p>0.05)。上述實驗結果表明，牡丹皮配方顆粒預防性給藥可明顯降低實驗性高脂血癥小鼠血清總膽固醇含量，優于牡丹皮水提液。使血清總膽固醇與高密度脂蛋白膽固醇含量的比值(tc/hdl-cho)也隨之降低，詳見表1。

2.牡丹皮配方顆粒對角叉菜膠所致大鼠足趾腫脹的影響

2.1實驗目的

觀察牡丹皮配方顆粒對角叉菜膠所致大鼠足趾腫脹的影響。

2.2實驗動物

wistar大鼠，80只，雄性，體重100～130g。購自吉林大學基礎醫學院動物實驗中心。

2.3藥品及試劑

受試藥：牡丹皮配方顆粒，棕黃色粉末狀顆粒(實施例1制得配方顆粒，芍藥苷含量15mg/g)；牡丹皮水提液(對比例1制得水提液，芍藥苷含量15mg/g)。

2.4方法

取雄性大鼠80只，體重100～130g，按體重隨機分空白對照組、模型對照組(灌胃等體積蒸餾水)、陽性對照拜阿司匹林組(0.54g/kg)、牡丹皮水提液組(1.0g/kg)、牡丹皮配方顆粒高、中、低劑量組(2.0、1.0、0.5g/kg)，每日灌胃給藥1次，灌胃體積10ml/kg，連續7日。末次給藥后，用電子數顯卡尺測量大鼠右后肢足趾基礎厚度，末次給藥后30分鐘，于大鼠左后肢足趾皮下注射5％角叉菜膠溶液0.1ml/只，隨后分別于給藥后1、2、3、4和6小時各測一次足趾厚度。用腫脹度表示結果。腫脹度＝腫脹后的足趾厚度-足趾基礎厚度。

2.5結果與討論

造模后各個時間點與空白對照組比較，模型組大鼠的腫脹度均明顯增大(p<0.001)。與模型組比較，拜阿司匹林組各時間點腫脹度有顯著差異(p<0.05、p<0.01、p<0.001)；牡丹皮水提液組(1.0g/kg)只有在造模3h后能抑制足腫脹度(p<0.05)；牡丹皮配方顆粒高劑量組(2.0g/kg)在各時間點明顯抑制足腫脹度(p<0.05、p<0.01、p<0.001)；牡丹皮配方顆粒中劑量組(1.0g生藥/kg)在造模2、3、4h后能抑制足腫脹度(p<0.05)；牡丹皮配方顆粒高劑量組(2.0g/kg)在造模2、3h后抑制足腫脹度作用優于牡丹皮水提液組(1.0g/kg)；牡丹皮配方顆粒中劑量組與牡丹皮水提液組劑量相同，但是造模后抑制大鼠足腫脹度作用起效時間短，并且作用時間長，詳見表2。

表1牡丹皮配方顆粒預防性給藥對實驗性高脂血癥小鼠血脂含量的影響

注:與模型組比較^*p<0.05，^**p<0.01，^***p<0.001；與牡丹皮水提液組比較^★p<0.05，^★★p<0.01。

表2牡丹皮配方顆粒對角叉菜膠所致大鼠足趾腫脹度的影響

注：與模型對照組比較，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；與牡丹皮水提液組比較^★p<0.05。

結論：牡丹皮配方顆粒與牡丹皮提取液都有明顯的活血化瘀和抗炎作用，牡丹皮配方顆粒在抑制炎癥反應過程中，具有起效快，作用時間長特點。