技術領域：
本發明屬于藥物提取和制備
技術領域：
，具體的，涉及清濁益腎膠囊的制備及質量標準檢驗方法。
背景技術：
：腎病目前已經成為危害公共健康主要疾病之一。且由于不規范治療、濫用藥物以及不良的生活方式導致我國的腎病發病率也連年上升。腎病綜合征(nephroticsyndrome，NS)簡稱腎綜，是指由多種病因引起的，以腎小球基膜通透性增加伴腎小球濾過率降低等腎小球病變為主的一組綜合征。腎病綜合征不是一種獨立性疾病，而是腎小球疾病中的一組癥候群。其典型的癥狀表現為大量蛋白尿、低白蛋白血癥、高度水腫、高脂血癥。會由很多種腎臟病變導致引發，現在醫學界普遍認為屬于細胞免疫性疾病。目前，臨床常規的治療方案為進行激素治療、抗血小板積聚治療和應用免疫性抑制劑。清濁益腎膠囊是一種有效治療腎病綜合征的藥物，其原料成分相對簡單，而且效果好，毒副作用小，備受患者青睞。申請人在制藥過程中發現，該藥物原料提取方法相對單一，對多種原料采用相同提取工藝，存在有效成分流失的缺陷，而且腎病綜合征每次需要服用4粒，每天三次，服藥量過大，部分病人很難接受，容易出現排斥情緒。而且對已知藥物進行改進，可以節省企業前期的研發成本，是近年來企業研究的熱點。同時，清濁益腎膠囊的質量控制也是GMP工作車間需要重視的問題。如何通過改進工藝，來最大限度的利用原料，提高藥效，是我們需要研究的問題。技術實現要素：為了克服現有技術的缺陷，本發明提出清濁益腎膠囊的制備方法，該方法簡單可行、最大限度提取了原料的有效成分，提高了藥效，減少了藥物服用量。本發明還提供了清濁益腎膠囊的質量標準檢驗方法。本發明是通過如下技術方案來實現的：清濁益腎膠囊的制備方法，其包括如下步驟：步驟1）稱取原料，步驟2）制備冬春夏草細粉，步驟3）制備黃芪提取物，步驟4）制備丹參提取物，步驟5）制備紅花提取物，步驟6）制備酸棗仁菟絲子大黃提取物，步驟7）制粒。具體地，所述制備方法包括如下步驟：步驟1）稱取原料：稱取各原料備用：冬蟲夏草100g、黃芪1400g、丹參280g、紅花280g、酸棗仁280g、菟絲子500g、大黃100g；步驟2）制備冬春夏草細粉：取冬蟲夏草，粉碎成細粉；步驟3）制備黃芪提取物：將黃芪粉碎，過200目篩，置于容器中，添加兩倍重量的85%（v/v）的乙醇，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為500W，提取時間為60min；然后置于4℃放置12h，過濾，濾渣備用；濾液減壓蒸發回收乙醇，并濃縮濾液至密度為1.3g/ml的浸膏A；將上述濾渣加兩倍重量的水，攪拌均勻，然后加入0.5wt%的中性蛋白酶(20萬U/g)，在37℃酶解120min，然后煮沸5min，然后加入占濾渣兩倍重量的無水乙醇，300rpm攪拌5min，然后靜置12h，去除上清液，收集沉淀，加水溶解，-20℃放置12h，然后3000rpm離心3min，過濾去除沉淀，將濾液減壓濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏B；合并浸膏A和浸膏B得到黃芪提取物；步驟4）制備丹參提取物：將丹參粉碎，過200目篩，然后鋪成3mm厚度的平層，置于紫外線下照射15min，收集粉末置于容器中，添加兩倍重量的水，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為700W，提取時間為20min；過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得丹參提取物；步驟5）制備紅花提取物：將紅花投入超聲提取罐，加入三倍重量的75%的乙醇，控制提取溫度為50℃，以頻率50KHz超聲提取30min，過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得紅花提取物；步驟6）制備酸棗仁菟絲子大黃提取物：取酸棗仁和菟絲子混合得到酸棗仁菟絲子混合物，加水煎煮兩次，第一次加酸棗仁菟絲子混合物10倍重量的水，煎煮2小時，過濾后得到濾液和藥渣；往藥渣中添加大黃，然后再添加占酸棗仁菟絲子混合物5倍重量的水，煎煮1.5小時，過濾得濾液；合并上述兩次的濾液，濃縮成密度為1.1g/ml的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達70％，靜置24小時，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏，即得酸棗仁菟絲子大黃提取物；步驟7）制粒：將步驟3）所得黃芪提取物，步驟4）所得丹參提取物，步驟5）所得紅花提取物，步驟6）所得酸棗仁菟絲子大黃提取物以及步驟2）所得冬蟲夏草細粉混勻，干燥，粉碎，加入淀粉適量，混勻，裝入膠囊，即得。優選地，所述紫外線強度為3000uW/cm2。上述制備方法制備的膠囊制劑的質量標準檢驗方法。所述方法應檢出冬蟲夏草，應檢出原兒茶醛，應檢出大黃，每粒含黃芪甲苷應不少于0.30mg。本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果：本發明制備的清濁益腎膠囊制劑效果優于現有的制劑，而且服藥量也相應降低；本發明制備方法簡單可行，對不同的中藥成分采用不同技術進行處理，提高了各原料的有效成分，增加了藥效，減少了原料浪費；本發明制備方法采用較小的粒徑能夠提高黃芪有效組分的浸出率，配合微波醇提的方式可獲得苷類化合物以及多糖類，避免了成分的流失；丹參提取時，采用煎煮的方式，容易導致酚酸以及酮類物質的分解，本發明丹參提取工藝采用合適強度的紫外線，提高了有效成分的溶出度，同時采用微波輔助水提，時間短，提高了提取效率，降低了能耗；紅花中的綠原酸等酸類物質、酚類有效物質不易采用煎煮的方式，本發明采用醇提，保留了有效成分。具體實施方式為了使本
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的人員更好地理解本申請中的技術方案，下面將結合本申請具體實施例，對本發明進行更加清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本申請一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本申請中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都應當屬于本發明保護的范圍。實施例1清濁益腎膠囊的制備方法，其包括如下步驟：1）稱取各原料備用：冬蟲夏草100g、黃芪1400g、丹參280g、紅花280g、酸棗仁280g、菟絲子500g、大黃100g；2）取冬蟲夏草，粉碎成細粉；3）將黃芪粉碎，過200目篩，置于容器中，添加兩倍重量的85%（v/v）的乙醇，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為500W，提取時間為60min；然后置于4℃放置12h，過濾，濾渣備用；濾液減壓蒸發回收乙醇，并濃縮濾液至密度為1.3g/ml的浸膏A；采用高效液相色譜法測試浸膏A中黃芪甲苷含量大于1.2mg/ml；將上述濾渣加兩倍重量的水，攪拌均勻，然后加入0.5wt%的中性蛋白酶(20萬U/g)，在37℃酶解120min，然后煮沸5min，然后加入占濾渣兩倍重量的無水乙醇，300rpm攪拌5min，然后靜置12h，去除上清液，收集沉淀，加水溶解，-20℃放置12h，然后3000rpm離心3min，過濾去除沉淀，將濾液減壓濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏B；合并浸膏A和浸膏B得到黃芪提取物；采用凝膠色譜法測得浸膏B中黃芪多糖分子量多分布于20000-40000，占總糖的70％以上；4）將丹參粉碎，過200目篩，然后鋪成3mm厚度的平層，置于紫外線下照射15min，收集粉末置于容器中，添加兩倍重量的水，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為700W，提取時間為20min；過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得丹參提取物；所述紫外線強度為3000uW/cm2；5）將紅花投入超聲提取罐，加入三倍重量的75%（體積份數）的乙醇，控制提取溫度為50℃，以頻率50KHz超聲提取30min，過濾，收集濾液，濃縮成1.3g/ml的浸膏，即得紅花提取物；6）取酸棗仁和菟絲子混合得到酸棗仁菟絲子混合物，加水煎煮兩次，第一次加酸棗仁菟絲子混合物10倍重量的水，煎煮2小時，過濾后得到濾液和藥渣；往藥渣中添加大黃，然后再添加占酸棗仁菟絲子混合物5倍重量的水，煎煮1.5小時，過濾得濾液；合并上述兩次的濾液，濃縮成密度為1.1g/ml的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達70％（體積分數），靜置24小時，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏，即得酸棗仁菟絲子大黃提取物；7）將步驟3）所得黃芪提取物，步驟4）所得丹參提取物，步驟5）所得紅花提取物，步驟6）所得酸棗仁菟絲子大黃提取物以及步驟2）所得冬蟲夏草細粉混勻，干燥，粉碎，加入淀粉適量，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。用法用量：口服，一次3粒，0.45g/粒，一日3次。對比例1一種用于治療腎病綜合征的清濁益腎膠囊，其由下述重量的原料制備而得：冬蟲夏草100g、黃芪1400g、丹參280g、紅花280g、酸棗仁280g、菟絲子500g、大黃100g。所述清濁益腎膠囊的制備方法為：按照重量稱取原料藥備用（1）取冬蟲夏草粉碎成細粉；（2）取黃芪、丹參、紅花、酸棗仁加水煎煮兩次，第一次加10倍量水，煎煮1.5小時，過濾后得到濾液和藥渣；（3）在步驟（2）中所得到的藥渣添加大黃并加水8倍量水，煎煮1小時，過濾得濾液（4）合并步驟（2）和步驟（3）的濾液，濃縮成相對密度為1.14-1.16（80-85℃）的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達70％（體積分數），靜置24小時，濾過，取上清液，回收乙醇。（5）菟絲子加水煎煮兩次，第一次加10倍量水，煎煮1.5小時，過濾獲得濾液和藥渣，取藥渣加8倍量水煎煮1小時，合并兩次濾液。（6）將步驟（5）獲得的濾液和步驟（4）獲得的上清液合并，濃縮至相對密度為1.30-1.35(80-85℃)的稠膏，加入步驟（1）制備的細粉混勻，干燥，粉碎，加入淀粉適量，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。用法用量：口服，一次4粒，0.45g/粒，一日3次。實施例2實施例1制備的成品的質量標準和檢查方法：實施例3動物安全性試驗健康昆明品系小鼠40只，雌雄各半，體重為18.9±2.3g，將40只小鼠隨機分為兩組，每組雌雄各半，其中20只為對照組，灌以常水；另外20只小鼠給予實施例1制備方法制備的藥物，劑量為2mg/只，每天三次，應用小鼠進行急性毒性實驗表明：與對照組比較，給藥后小鼠未見明顯差異，實驗連續觀察兩周，小鼠全身狀況、攝食、飲水、體重增長均正常。給藥后兩周內，未見動物死亡，提示該藥急性毒性低，臨床用藥安全。實施例4臨床資料選擇2015年3月-2016年9月市中醫院收治的108例患者，其中男性61例，女性47例，年齡32-73歲，平均年齡43.1歲；病程2個月至28個月，將患者隨機分成2組，實施例1組54人，對照例1組54人。納入標準和療效標準參考CN103638135A：治療方法：實施例1組：服用實施例1制備的藥物，一次3粒，一日3次，4周為一個療程，治療2個療程。對照例1組：服用對照例1組制備的藥物，一次4粒，一日3次，4周為一個療程，治療2個療程。治療效果如下表2：表2組別治愈好轉未愈治愈率實施例1組4111275.92%對照例1組3018655.56%結論：實施例1的治愈率明顯高于對照例1組，而且服藥量減少四分之一。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發明的若干個具體實施例。顯然，本發明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護范圍。當前第1頁1 2 3