芳香酯類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法

本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物領(lǐng)域，具體涉及新型結(jié)構(gòu)的酯類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，人類因惡性腫瘤而引起的死亡率居所有疾病死亡率的第二位，成為僅次于心血管疾病的第二號“殺手”。2013年初，全國腫瘤登記中心發(fā)布的一版《2012中國腫瘤登記年報(bào)》表明，中國每年新發(fā)癌癥病例約312萬，因癌癥死亡人數(shù)超過200萬，這意味著每1分鐘有6個(gè)人被確診為癌癥。目前全國癌癥發(fā)病趨勢嚴(yán)峻，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢。癌癥已成為嚴(yán)重威脅人類生命安全和影響人類生活質(zhì)量的重大問題之一，由此而引發(fā)的問題也越來越成為社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的負(fù)擔(dān)。

目前，腫瘤的治療方法主要有手術(shù)治療、放射治療和藥物治療(化學(xué)治療)，但很大程度上仍是以藥物治療為主。多數(shù)常見實(shí)體瘤如肺癌、肝癌、結(jié)腸癌及胰腺癌等仍缺乏有效藥物，不少抗腫瘤藥物在臨床應(yīng)用過程中產(chǎn)生耐藥性。隨著社會(huì)的科技進(jìn)步，人類對癌癥的認(rèn)知已逐漸清晰，對某些癌癥的預(yù)防和早期診斷的方法、技術(shù)和理論也日趨成熟，但尚不能完全治愈癌癥，只能非常有限地延長癌癥病人的存活時(shí)間。因此，新型抗腫瘤藥物的研發(fā)勢在必行，不斷開發(fā)高效低毒的新型抗腫瘤藥物，成為當(dāng)前一項(xiàng)具有重要意義的研究工作。

酯類化合物是一類重要的精細(xì)化工產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于藥物、材料、食品、增塑劑、溶劑等化工行業(yè)，芳香酯可廣泛用于香料、防腐劑、溶劑、藥物、染料、涂料和材料合成等方面。本申請人所在項(xiàng)目組自主合成了三種具有新型結(jié)構(gòu)的芳香酯化合物，并于2015年在期刊Tetrahedron Letters公開了這幾種芳香酯化合物的制備方法。未對其生物學(xué)活性進(jìn)行評價(jià)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)狀，提供一種芳香酯類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述芳香酯類化合物為下式之一：

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的芳香酯類化合物藥學(xué)上可接受的鹽是常規(guī)無機(jī)酸鹽，如鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽及有機(jī)酸鹽，如甲磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、醋酸鹽、三氟乙酸鹽、苯甲酸鹽。

進(jìn)一步地，所述的藥物為治療肝癌、肺癌、乳腺癌、耐阿霉素的乳腺癌、胃癌、宮頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物。

進(jìn)一步地，所述的芳香酯類化合物優(yōu)選為式WY90。

進(jìn)一步地，所述的藥物為治療耐阿霉素的乳腺癌的藥物。

進(jìn)一步地，所述的藥物為引起腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物。

本發(fā)明的芳香酯類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分與常規(guī)藥用載體制成藥物組合物。

本發(fā)明的芳香酯類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可通過常規(guī)方法制備成各種實(shí)用型藥劑，如顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑或乳劑的藥物。

本發(fā)明通過對所述的芳香酯類化合物體外抗腫瘤活性評價(jià)、引起的腫瘤細(xì)胞病變效應(yīng)及引起的腫瘤細(xì)胞凋亡活性評價(jià)，證實(shí)所述的芳香酯類化合物具有明顯的抑制不同種腫瘤細(xì)胞增殖的作用，其中具有最佳抑制效果的化合物WY90的抗腫瘤活性明顯優(yōu)于對照藥物，對于陽性對照藥物5-Fu和DOX呈現(xiàn)耐藥性的MCF-7/ADR腫瘤細(xì)胞同樣呈現(xiàn)了強(qiáng)的抑制效果。

本發(fā)明所涉及的芳香酯類化合物的制備，參照文獻(xiàn)Tetrahedron Letters 2015，56，6136–6141的方法，具體以過渡金屬鈀為催化劑，在吡啶的鄰位誘導(dǎo)作用下，在芳環(huán)的鄰位用高價(jià)碘苯作用，進(jìn)行芳酰氧基化，得到最終酯化產(chǎn)物。

鑒于該類化合物的制備過程簡單易行，原料價(jià)格低廉，易于獲?。幌盗谢衔锟梢酝ㄟ^構(gòu)效關(guān)系研究來尋求其抗腫瘤作用靶點(diǎn)，為進(jìn)一步藥物開發(fā)提供有價(jià)值的導(dǎo)向作用。因此，本發(fā)明所述的芳香酯類化合物為新藥篩選提供了基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1三種芳香酯類化合物WY90、WYH96、WY99對于不同腫瘤細(xì)胞的抑制活性。

圖2芳香酯類化合物WY90濃度依賴的抑制不同腫瘤細(xì)胞的活性。

圖3化合物WY90引起的腫瘤細(xì)胞病變效應(yīng)。

圖4 WY90引發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡的檢測圖。

具體實(shí)施方式

通過以下詳細(xì)說明結(jié)合附圖可以進(jìn)一步理解本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)。所提供的實(shí)施例僅是對本發(fā)明方法的說明，而不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余內(nèi)容。

在下文中，如果未特別說明，本發(fā)明所用材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的。

【實(shí)施例1】化合物的體外抗腫瘤活性評價(jià)

供試腫瘤細(xì)胞：人類肝癌細(xì)胞HepG2、人類肺癌細(xì)胞A549、人類乳腺癌細(xì)胞MCF-7、耐阿霉素的人類乳腺癌細(xì)胞(MCF-7/ADR)、人類胃癌細(xì)胞SGC-7901、人類宮頸癌細(xì)胞Hela、人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6。

細(xì)胞培養(yǎng)：GIBCO DMEM培養(yǎng)基，10％胎牛血清和0.01％L-谷氨酰胺配制成培養(yǎng)液。培養(yǎng)的細(xì)胞株置于37℃、5％CO₂飽和濕度下常規(guī)培養(yǎng)傳代，實(shí)驗(yàn)均用處于對數(shù)生長期的細(xì)胞。

體外抗腫瘤活性評價(jià)(MTT法)：

將以上腫瘤細(xì)胞分別鋪板96孔板，在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)長滿單層后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，分別加含不同濃度測試化合物的細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)，以未經(jīng)藥物作用的細(xì)胞作為空白對照，以抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶(5-Fu)及阿霉素(DOX)為陽性對照，每組設(shè)8個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h。顯微鏡目測并分別記錄細(xì)胞狀況，每孔加MTT(5mg/mL)20μl繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，每孔加150μLDMSO，37℃孵育10min，酶標(biāo)儀檢測492nm波長處的吸光值(A492)。按以下公式計(jì)算平均抑制率：

抑制率＝(細(xì)胞對照組平均OD492值-藥物組平均OD492值)/細(xì)胞對照組平均OD492值)×100％。

測試結(jié)果表明，制備的三種芳香酯類化合物對供試腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出不同程度的抑制活性。WY90、WY96、WY99、Dox、5-Fu對于Hela、C6、HepG2、SGC-7901、A549、MCF-7、MCF-7/ADR的半數(shù)抑制濃度(IC50)如下表1所示?；衔颳Y90的抑制效果最佳。WY90與對照藥劑5-Fu相比，對于每種腫瘤細(xì)胞都具有更好的抑制效果。除了對于A549細(xì)胞的IC50為23μg/mL以外，對于其他腫瘤細(xì)胞的IC50都在20μg/mL以內(nèi)。與對照藥物DOX相比，抑制效果相對較差，但是對于耐阿霉素的人類乳腺癌細(xì)胞(MCF-7/ADR)，DOX表現(xiàn)出強(qiáng)的耐藥作用(IC50＞100μg/mL)，陽性對照藥物5-Fu在MCF-7/ADR上同樣有很差的抑制效果(IC50＞100μg/mL)。而WY90未表現(xiàn)出任何耐藥性，仍具有強(qiáng)的抑制效應(yīng)，半數(shù)抑制濃度只需14.5μg/mL。

表1 新型酯類化合物對于不同腫瘤細(xì)胞的抑制活性(IC50)

表1中：a IC50<20μg/mL記為+++，IC50為20～50μg/mL記為++，IC50>50μg/mL記為+.

b Dox,阿霉素，陽性對照；c 5-Fu，5-氟尿嘧啶，陽性對照。

40μg/mL化合物WY90、WY96、WY99對于不同腫瘤細(xì)胞的抑制活性如圖1所示,WY90在40μg/mL時(shí)對于所有腫瘤細(xì)胞都表現(xiàn)出極強(qiáng)的抑制效果，除了對于A549細(xì)胞的抑制率為73.2％以外，對于腫瘤細(xì)胞C6、Hep-G2、SGC-7901、MCF-7、MCF-7/ADR和Hela的抑制率已分別達(dá)到87％、95％、98.9％、91.3％、88.2％、96.5％，明顯優(yōu)于對照藥物5-Fu(對于以上所有腫瘤細(xì)胞的抑制效應(yīng)最大值不超過66.6％)。陽性藥物DOX除了對于MCF-7/ADR無明顯的抑制活性，對于所有腫瘤細(xì)胞抑制效果顯著。WY96和WY99抑制效果較差，WY96只對于Hela、HepG2、SGC-7901有較好的抑制活性，抑制率均在50％左右。WY99對MCF-7/ADR、HepG2、SGC-7901和C6腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制效應(yīng)，抑制率分別為73.9％、48.0％、61.1％、54.5％。

化合物WY90濃度依賴的抑制不同腫瘤細(xì)胞的活性如圖2所示。WY90對所有腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)濃度依賴的抑制活性，在足夠濃度的情況下可以達(dá)到使腫瘤細(xì)胞完全凋亡致死的效果。整體對于HepG2抑制較強(qiáng)，對于A549抑制效果較差。對照藥物5-Fu呈現(xiàn)濃度依賴性不強(qiáng)，整體在5～40μg/mL時(shí)，對于腫瘤細(xì)胞抑制活性增加不明顯，呈現(xiàn)比較均一的抑制效果。

【實(shí)施例2】化合物WY90引起的腫瘤細(xì)胞病變效應(yīng)

我們進(jìn)一步用顯微鏡記錄了WY90引起的腫瘤細(xì)胞病變效應(yīng)。具體實(shí)施方法如下：

將對數(shù)生長期的HepG2、MCF-7、MCF-7/ADR、SGC-7901、Hela、C6腫瘤細(xì)胞分別鋪板24孔板，在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)長滿單層后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，分別加含20μg/mL WY90(Hela細(xì)胞加10μg/mL)細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)，48h時(shí)顯微鏡目測并拍照細(xì)胞病變情況。

化合物WY90引起的腫瘤細(xì)胞病變效應(yīng)如圖3所示。顯微鏡下未做處理的腫瘤細(xì)胞對照生長良好，貼壁牢固，形態(tài)飽滿，邊緣界限清晰。20μg/mL WY90處理48h即導(dǎo)致所有的腫瘤細(xì)胞凋亡，細(xì)胞以不同形式變圓，從培養(yǎng)板脫落?？梢奧Y90對于多種腫瘤細(xì)胞具有強(qiáng)的抑制生長效應(yīng)。

【實(shí)施例3】化合物WY90引起的腫瘤細(xì)胞凋亡活性評價(jià)

本申請人進(jìn)一步實(shí)施了化合物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡試驗(yàn)，試驗(yàn)情況如下：對數(shù)生長期的HepG2、Hela細(xì)胞鋪板24孔板，長滿單層后分別加入含20μg/mL WY90的細(xì)胞維持液孵育，設(shè)定不加藥物處理的細(xì)胞對照，大約48h后，收集細(xì)胞，運(yùn)用Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行細(xì)胞凋亡的檢測。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示表明，20μg/mL WY90可以強(qiáng)效誘發(fā)以上被檢測腫瘤細(xì)胞的凋亡。在Hela細(xì)胞中，未做處理的陽性對照細(xì)胞凋亡率為5％，而WY90處理促使95.6％的細(xì)胞發(fā)生凋亡。在HepG2細(xì)胞中，陽性對照細(xì)胞凋亡率為18％，WY90處理則使66％的細(xì)胞發(fā)生凋亡。

綜上所述，新型酯類化合物WY90具有很好的抑制不同種腫瘤細(xì)胞增殖作用，對于陽性對照藥物5-Fu和DOX呈現(xiàn)耐藥作用的MCF-7/ADR細(xì)胞，WY90仍然具有同樣強(qiáng)的抑制效果，顯示了大的應(yīng)用潛力。如果進(jìn)一步在臨床上進(jìn)行研究，有希望制備一種有效對抗腫瘤疾病的藥物。