一種用于預防或治療非酒精性脂肪肝的多甲氧基黃酮、組合物及其藥物制劑的制作方法

本發明屬于醫藥領域，涉及天然產物的新用途，具體涉及一種用于預防或治療非酒精性脂肪肝的多甲氧基黃酮、組合物及其藥物制劑。
背景技術：
：非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素外所導致的，以肝細胞內脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，隨著肥胖及其相關代謝綜合征全球化的流行趨勢，近年來NAFLD的發病率呈明顯的上升趨勢，已成為發達國家第一大慢性肝病及肝功能異常的首要病因，普通成年人NAFLD患病率為17％～33％。目前現代醫學尚無治療NAFLD的特效藥物，主要以祛除病因及誘因、治療原發基礎病為主，以阻止慢性肝病的發展，防治脂肪性肝炎，終末期則以肝移植治療，但治療的效果不能令人滿意，因此研發有效治療NAFLD的新型藥物具有重要的臨床意義。多甲氧基黃酮(PolymethoxylatedFlavones，PMFs)是一類含有多個甲氧基、低極性、具有平面結構的有強烈生物活性的黃酮類成分，是在苯基色原酮結構上的3,4,5,6,7,8,2',3',4',5',6'等位置處連有4個或4個以上甲氧基，主要來源于蕓香科柑橘屬，存在于陳皮、青皮、橘紅、佛手、枳實等藥材中。3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮(HMF)就是其中一種，其分子式為C22H24O9，相對分子質量為432.43，CAS號為1178-24-1，化學結構如下：技術實現要素：本發明的目的是提供一種用于預防或治療非酒精性脂肪肝的多甲氧基黃酮、組合物及其藥物制劑，所述多甲氧基黃酮為3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮(HMF)。上述目的是通過如下技術方案實現的：一種用于預防或治療非酒精性脂肪肝的藥物，活性成分包括多甲氧基黃酮。優選地，所述多甲氧基黃酮為3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮。優選地，所述活性成分還包括雞屎藤苷酸，為多甲氧基黃酮與雞屎藤苷酸的組合物。一種用于預防或治療非酒精性脂肪肝的藥物制劑，包括上述活性成分，還包括藥學上可以接受的載體或賦形劑，制成藥學上可以接受的劑型。優選地，所述藥學上可以接受的載體或賦形劑包括一種或多種固體、半固體或液體輔料。優選地，所述藥學上可以接受的劑型包括片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、微丸劑、滴丸劑、糖漿劑、散劑、浸膏劑、煎膏劑、口服液體制劑。本發明的有益效果：給予HMF后，極大地改善了肝結構，減少了高脂飲食導致的肝臟脂肪堆積，且HMF高濃度肝臟脂滴接近正常水平，以上結果表明3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮能有效地改善肝臟脂質堆積，起到預防或治療非酒精性脂肪肝的作用，且具有量效差異性。。附圖說明圖1為各組肝臟切片結果。具體實施方式下面結合附圖和實施例具體介紹本發明的技術方案。實驗方法：1、動物模型的建立取C57BL/6雄性小鼠60只，體重18-20g，6周齡。小鼠適應一周后隨機分組為：正常飼料組(Normalchowdiet，NCD)，高脂飲食組(Highfatdiet，HFD)，洛伐他汀組(Lovastatin，LOV)，3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮低劑量組(HMF-L)和3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮高劑量組(HMF-H)，除正常飼料組外其他組均采用高脂飲食。HFD飼料配方為：1.25％膽固醇、20％豬油、5％蔗糖、0.5％膽酸、維生素調至正常水平。2、給藥劑量和給藥方式：HFD誘導實驗中，小鼠采用灌胃的給藥方式進行。造模開始給藥，NCD和HFD給予同體積的0.5％CMC-Na溶液，共給藥六周。LOV組給藥劑量為30mg/g/d，HMF-L組給藥劑量為25mg/g/d，HMF-L組給藥劑量為50mg/g/d。LOV和HMF分別用0.5CMC-Na溶液配置成混懸液。3、血漿制備：實驗結束前，小鼠禁食不禁水12h，眼眥靜脈取血，放入含有肝素鈉的離心管中，4000rpm，4℃，離心10min，上清-80℃保存。4、血液生化指標測定：血漿甘油三酯、膽固醇、血漿低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所，測定步驟按相應說明書進行。5、解剖取材：實驗結束前，小鼠禁食不禁水12h，處死小鼠，迅速分離出肝臟，取出一部分固定于福爾馬林中制作H&E切片。H&E染色病理分析：1)新鮮的肝臟置于福爾馬林中，浸泡24h；2)石蠟包埋，切4ìm厚片子；3)二甲苯脫蠟2次，5-10min/次；4)100％乙醇、95％乙醇、80％乙醇、75％乙醇、蒸餾水分別浸洗2次，1-2min/次；5)蘇木精染色5min，蒸餾水清洗殘余蘇木精染色液，濾紙吸干殘水；6)1％鹽酸乙醇分化1-3s；7)蒸餾水浸泡15min；8)伊紅液染色2min；9)用95％乙醇、100％乙醇浸泡2次，1min/次，二甲苯石碳酸溶液浸泡1min、二甲苯浸泡2次，1min/次。10)中性樹脂固封；11)拍照分析。實驗結果：由于非酒精性脂肪肝以脂肪過度沉積為主要特征，因此我們首先考察了HMF在體內對脂代謝的調控作用，我們采用HFD飲食誘導小鼠脂代謝紊亂模型評估HMF對體內脂代謝的影響。HFD誘導6周后，模型組與正常組相比較，TG、TC、LDL-c顯著增加(P＜0.001)，說明小鼠高脂血癥模型造模成功，HMF具有濃度依賴性降低HFD小鼠血漿TG、TC、LDL-c的含量，顯著升高血漿HDL-c的含量，與陽性藥物LOV(洛伐他汀)具有相似的趨勢(表1-4)。血脂的增加往往導致脂類在器官中堆積，其中脂肪和肝臟最為顯著。脂肪在肝臟的沉積，進而產生損傷作用，即為“非酒精性脂肪肝”，H&E染色結果表明HFD造模后脂肪在肝臟中堆積明顯，肝細胞變形明顯，說明脂代謝紊亂導致了肝損傷，給予洛伐他汀或HMF均能顯著逆轉肝細胞脂變。為了進一步評估HMF對脂肪肝的影響，我們測定了肝功能的特征性指標ALT和AST。造模后ALT、AST顯著升高，說明肝臟出現損傷，而給予HMF后，ALT、AST顯著降低，HMF高濃度(50mg/kg)甚至可以使血漿中ALT和AST含量恢復正常(表5-6)。非酒精性脂肪肝是脂代謝紊亂的主要特征之一，表現為肝臟細胞內脂肪過度堆積，并影響肝功能。如圖1所示，HFD造模后，HFD組顯示脹大的肝細胞，不規則的肝索排列以及大量脂滴。給予HMF后，極大地改善了肝結構，減少了高脂飲食導致的肝臟脂肪堆積，且HMF高濃度肝臟脂滴接近正常水平，以上結果表明3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黃酮能有效地改善肝臟脂質堆積，起到預防或治療非酒精性脂肪肝的作用，且具有量效差異性。表1HMF對血漿甘油三酯(TG)的影響(n＝12)組別TG(mmol/L)P值NCD1.46±0.1844HFD2.30±0.17948.68E-7###LOV1.73±0.34509.67E-3**HMF-L1.78±0.16446.62E-4*HMF-H1.77±0.28996.13E-3*注：與NCD比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與HFD比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表2HMF對血漿總膽固醇(TC)的影響(n＝12)組別TC(mmol/L)P值NCD2.11±0.1000HFD4.80±0.27019.75E-14###LOV3.81±0.27471.33E-4***HMF-L4.37±0.23953.73E-2n.s.HMF-H3.90±0.21021.08E-4*注：與NCD比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與HFD比較，n.s.無顯著性差異，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表3HMF對血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)的影響(n＝12)組別LDL-c(mmol/L)P值NCD0.21±0.0168HFD0.54±0.04162.06E-11###LOV0.38±0.04221.03E-4***HMF-L0.46±0.05043.75E-2*HMF-H0.40±0.03873.12E-4***注：與NCD比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與HFD比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表4HMF對血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)的影響(n＝12)組別HDL-c(mmol/L)P值NCD1.40±0.0889HFD2.18±0.15121.10E-7###LOV2.68±0.16057.19E-4***HMF-L2.78±0.19403.80E-4***HMF-H2.86±0.15932.34E-5***注：與NCD比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與HFD比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表5HMF對谷丙轉氨酶(ALT)的影響(n＝12)組別ALT(IU/L)P值NCD22.50±2.67HFD28.15±2.983.71E-3###LOV23.91±1.403.30E-2n.s.HMF-L22.31±2.027.18E-3**HMF-H18.99±1.474.85E-5***注：與NCD比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與HFD比較，n.s.無顯著性差異，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表6HMF對谷草轉氨酶(AST)的影響(n＝12)組別AST(IU/L)P值NCD104.00±8.87HFD114.36±7.361.03E-2#LOV101.66±7.813.61E-2n.s.HMF-L108.45±7.913.09E-1n.s.HMF-H98.95±7.151.01E-2*注：與NCD比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與HFD比較，n.s.無顯著性差異，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。實驗中還發現，雞屎藤苷酸可以增強HMF的抑制非酒精性脂肪肝作用，按照上述實驗方法使用HMF低劑量組中一半劑量的HMF與雞屎藤苷酸(給藥劑量為HMF給藥劑量的0.1倍)組合使用就可以將小鼠血漿中TG、TC、LDL-c水平降低至NCD組的水平(為1.46±0.1312、2.11±0.1231、0.22±0.0144)，與NCD組無顯著性差異(P＞0.05)，同時可以進一步升高HDL-c水平，增強HMF對肝功能的改善作用(ALT、AST水平優于HMF-H組)。但是，單獨給與上述劑量的雞屎藤苷酸時，對小鼠血漿中TG、TC、LDL-c水平無明顯降低作用，與模型組無顯著差異(分別為2.31±0.1416、4.81±0.2514、0.53±0.0423)(P＞0.05)，ALT、AST水平也與HFD組無顯著差異(P＞0.05)。上述實施例的作用僅在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。當前第1頁1 2 3