一種治療高血壓的野菊花提取物的制作方法

本發明涉及中藥提取物領域，具體涉及一種野菊花提取物及含有該提取物的藥物制劑，該提取物可以應用于治療高血壓。

背景技術：

野菊花為菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.北野菊C.boreale Mak.或巖香菊C.lavandulaefolium(Fisch.)Mak.的頭狀花序。《中國藥典》2010版一部及《中藥大辭典》第二版中野菊花的來源均僅為菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥頭狀花序。野菊花性涼，味苦、辛，歸肺肝經，具有疏風清熱、消腫解毒的功效，主治風熱感冒、高血壓、肺炎、口瘡、癰癤等。

野菊花含有多種化學成分。野菊花含萜類成分較多，主要有單萜、倍半萜、二聚倍半萜、三萜及其含氧衍生物等，其中大部分存在于揮發油中。黃酮類化合物是野菊花中重要的藥效成分。早在1942年人們就從野菊花中分離出黃酮類化合物木犀黃酮苷。

野菊花在我國歷史悠久，我國中醫藥書《神農本草經》等眾多書籍中都記載了野菊花的藥用功效。中醫認為野菊花味道清香略帶苦澀，藥性比較平實，具有清除濕熱解除毒素、消腫止痛的功效，對于夏季天氣濕熱帶來的熱感冒和肝火旺以及因其出現的口瘡疾病都有很好地治療作用，能夠去肝火、治頭痛流鼻涕、避暑消熱的作用。另外野菊花還對夏季蚊蟲叮咬后的紅腫膿包具有殺菌去腫的作用。夏季可以多多食用野菊花，可以平心靜氣，尤其是對每天面對電腦的上班族，可以緩解眼部的疲勞、滋養眼睛和保護視力的作用。野菊花不僅可以食用也可以外敷的作用，將野菊花碾碎具有消毒和消除膿包的作用。另外現代醫學也積極研究野菊花對現代病癥的治療作用，研究顯示野菊花對細菌具有很強的抵抗能力，能夠抵抗外界病毒進入體內，具有預防疾病的作用，對人體的心臟、大腦和血管都具有保護作用。另外經常飲用野菊花茶還具有降低和平穩血壓的作用，對于高血壓具有一定的治療作用。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種野菊花提取物，其制備方法和液相分析方法，含有該提取物的藥物制劑及利用該提取物制備治療高血壓的藥物的用途。

本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：

一種野菊花提取物，該提取物由以下方法制備：

(a)將干燥的野菊花用60％乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；(b)將步驟(a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性成分，先用8％乙醇沖洗12個柱體積除去大極性成分，再用70％乙醇洗脫10個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮即得。

進一步地，步驟(c)中所述大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。

為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差異，所述提取物的液相分析方法為：

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流動相：A為乙腈，B為0.4％磷酸溶液；

梯度洗脫程序：0.01～5min，A 10％→15％；5～15min，A 15％→48％；15～25min，A 48％→78％；25～40min，A 78％→10％；

流動相流速：1.0mL·min^-1；

檢測波長：260nm；

柱溫：30℃；

進樣量：10μL。

藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學上可接受的載體。

所述的提取物在制備治療高血壓的藥物中的應用。

所述的藥物制劑在制備治療高血壓的藥物中的應用。

本發明提取物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。

所述藥物制劑含有治療有效量的本發明野菊花提取物，其余為藥物學上可接受的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。

所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發明提取物可通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。

本發明的優點：本發明通過對干燥的野菊花進行提取、除雜、富集處理，能得到具有治療高血壓的提取物；本發明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的指紋圖譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。

附圖說明

圖1為野菊花提取物HPLC液相圖譜。

具體實施方式

下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。

實施例1：提取物制備

藥材來源：野菊花購自安徽亳州中藥材市場，產地江蘇。

主要試劑：食品級乙醇購自上海凌峰化學試劑有限公司；醫藥級AB-8大孔樹脂購自天津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級，購于TEDIA；85％磷酸為HPLC級，購于TEDIA；色譜用純凈水為哇哈哈純凈水。

制備方法：將8kg干燥的野菊花用60％乙醇溶液熱回流提取(25L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2L)；將所得乙醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物212g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，醫用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂(2kg，柱體積1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇沖洗12個柱體積(18L)除去大極性成分，再用70％乙醇洗脫10個柱體積(15L)，收集70％洗脫液，減壓濃縮，即得野菊花提取物95g。

實施例2：液相色譜分析

供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL 10％乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續加10％乙腈水溶液定容。

分析方法：

高效液相色譜儀：Agilent 1260，二元泵；

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流動相：A為乙腈，B為0.4％磷酸溶液；

梯度洗脫程序：0.01～5min，A 10％→15％；5～15min，A 15％→48％；15～25min，A 48％→78％；25～40min，A 78％→10％；

流動相流速：1.0mL·min^-1；

檢測波長：260nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

用制備的10批次的野菊花提取物進行分析，進行色譜峰匹配，結果1～11號峰在10批樣品色譜圖中均出現。因此標定11個峰為共有色譜峰，據此建立該提取物的HPLC質量控制圖譜，結果見圖1。該10批次的野菊花提取物藥理活性相似。

實施例3：提取物藥理試驗

一、實驗材料

1、受試物：野菊花提取物，自制，制備方法見實施例1。

2、其他試劑及主要儀器：陽性藥采用厄貝沙坦(厄貝沙坦片，法國生產，杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司分裝。分裝批號：1306193，產品批號：1797，生產日期：2013年2月)。美國Kent公司的無創血壓儀(CODATM2)。

3、實驗動物：采用自發高血壓大鼠(SHR)，購自北京維通實驗動物有限公司，合格證號：SCXK(京)2013-0009。飼養條件：在有空調的動物室飼養，溫度20～25℃，相對濕度40％～60％，每籠5只，定時定量添加飼料，食用大鼠專用飼料，自由飲水，每日更換墊料。

二、實驗方法

1、分組：實驗動物按基礎血壓隨機分為6組：模型組、陽性藥組(厄貝沙坦，15.5mg/kg)，野菊花提取物0.25、0.5、1.0、2.0g/kg組。各組均為SHR大鼠，每組10只。

2、實驗方案：動物到達實驗室后，預飼養1周，測定基礎血壓(基礎血壓需要測定1～2周，確保動物已經適應儀器，測到的血壓為真值)。按照基礎血壓隨機分組。分組后，次日開始實驗，各給藥組按10mL/kg灌胃，連續給予4周。期間每周測定血壓1次，保證動物基本在同一個時間測定，避免日間自身血壓波動的影響。

3、觀察指標：動物血壓(包括收縮壓、舒張壓、平均動脈壓)、體重、心率。

三、實驗結果

1、野菊花提取物對動物平均動脈壓的影響

根據實驗結果(表1，注：與同時刻的模型組比較：*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001；下同)，在連續給藥的4周內，給藥1周后，陽性藥組和提取物2.0g/kg組大鼠的平均動脈壓顯著降低，較模型組均有顯著降低(P<0.05)，其降低的顯著性差異持續4周。提取物1.0g/kg組的平均動脈壓有降低的趨勢，但僅在給藥1周和給藥4周兩次檢測結果和模型組比較具有顯著性降低(P<0.05)。野菊花提取物0.25、0.5g/kg組的檢測值和模型組相比，均未見顯著性差異。

表1野菊花提取物給藥4周對各組動物平均動脈壓的影響(mmHg)

2、野菊花提取物對動物收縮壓的影響

根據實驗結果(表2)，在連續灌胃4周內，陽性藥組和提取物1.0、2.0g/kg組大鼠的收縮壓均有降低，且較模型組有顯著性差異(P<0.05)，其中陽性藥和提取物2.0g/kg組與模型組間的顯著性差異持續4周。野菊花提取物0.25、0.5g/kg組的檢測值和模型組相比，均未見顯著性差異。

表2野菊花提取物給藥4周對各組動物收縮壓的影響(mmHg)

3、野菊花提取物對動物舒張壓的影響

根據實驗結果(表3)，連續灌胃4周，陽性藥組和提取物1.0、2.0g/kg組大鼠的舒張壓均有降低，和模型組比較均具有顯著性差異(P<0.05)，其中陽性藥和提取物2.0g/kg組與模型組間的顯著性差異持續4周。野菊花提取物0.25、0.5g/kg組的檢測值和模型組接近。

表3野菊花提取物給藥4周對各組動物舒張壓的影響(mmHg)

實施例4：片劑的制備

按實施例1方法制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:10的比例加入賦形劑，制粒壓片。

實施例5：口服液的制備

按實施例1方法先制得提取物，按常規口服液制法制成口服液。

實施例6：膠囊劑或顆粒劑的制備

按實施例1方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑。

實施例7：注射液的制備

按實施例1方法制得提取物，加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。

實施例8：無菌粉針的制備

按實施例1方法先制得提取物，溶于無菌注射用水中，攪拌使溶，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于安瓿，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。