抗?MIF抗體和化學治療劑的聯合治療的制作方法

技術領域：
本發明涉及一種抗-MIF抗體，特別是它們聯合癌癥治療劑即化學治療劑用于癌癥的治療。
背景技術：
：巨噬細胞移動抑制因子(MIF)是一種細胞因子，起初是基于它能夠抑制腹膜滲出液細胞從對結核菌素高度敏感的豚鼠(包含巨噬細胞)中體外隨機遷移的能力而被分離的(Bloometal.Science1966,153,80-2；Davidetal.PNAS1966,56,72-7)。今天，已經知道MIF作為先天性和獲得性免疫反應的一個關鍵的上游調控子，上述免疫反應具有廣譜活性。人類MIFcDNA在1989年得到克隆(Weiseretal.,PNAS1989,86,7522-6)，其基因定位于22號染色體。人類MIF基因產品為具有114個氨基酸的蛋白質(N端蛋氨酸裂解后)，其表觀分子量大約為12.5kDa。MIF沒有與其他蛋白存在顯著的序列同源性。該蛋白結晶成同一亞單位的三聚體。每個單體包含兩個反向平行的α螺旋，所述α螺旋包裹(packagainst)四鏈β片。該單體還有其他兩個β鏈，該β鏈和相鄰亞單位的β片相互作用以在單體之間形成界面。三個亞單位排布成一個包含親溶劑通道的管道，該管道可以沿著分子三重軸向穿過蛋白質中心(Sunetal.PNAS1996,93,5191-5196)。據報道，低濃度糖皮質激素可以誘導巨噬細胞分泌MIF(Calandraetal.Nature1995,377,68-71)。然而，MIF也會方向調節糖皮質激素的作用，并刺激其他細胞因子的分泌，例如腫瘤壞死因子TNF-α和白介素IL-1β(Baughetal.,CritCareMed2002,30,S27-35)。MIF同樣表現出例如展示促血管生成、促增殖和抗凋亡的性質，因此能促進腫瘤細胞的生長(Mitchell,R.A.,CellularSignalling,2004.16(1):p.13-19；Lue,H.etal.,Oncogene2007.26(35):p.5046-59)。此外，例如它和淋巴瘤、黑素瘤和結腸癌的生長也有直接聯系(Nishihiraetal.JInterferonCytokineRes.2000,20:751-62)。MIF是多種病理情況的中介物，因此，與各種疾病都有關聯，其包括但不限于炎癥性腸病(IBD)、風濕性關節炎(RA)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、哮喘、血管球性腎炎、IgA腎病、心肌梗死(MI)、敗血癥和癌癥。多克隆和單克隆抗-MIF抗體已經用于抵抗重組人類MIF(Shimizuetal.,FEBSLett.1996；381,199-202；Kawaguchietal,Leukoc.Biol.1986,39,223-232,和Weiseretal.,Cell.Immunol.1985,90,167-78)。已經表明抗-MIF抗體具有治療用途。Calandraetal.,(J.Inflamm.(1995)；47,39-51)報道了使用抗-MIF抗體保護動物免于實驗上誘發的革蘭氏陰性和革蘭氏陽性感染性休克。表明抗-MIF抗體可作為一種治療手段來調控感染性休克和其他炎癥疾病狀態中的細胞因子產生。US6,645,493公開了一種源自雜交瘤細胞的單克隆抗-MIF抗體，其能夠中和MIF的生物學活性。在動物模型中表明這些源自鼠的抗-MIF抗體在治療內毒素誘發的休克中具有有益效果。US200310235584公開了一種在動物中制備對MIF具有高親和性的抗體，所述動物中的MIF基因已經被純合(homozygously)敲除。糖基化抑制因子(GIF)是一種蛋白質，具體描述見Galatetal.(Eur.J.Biochem,1994,224,417-21)。MIF和GIF被認為是相同的。Wataraietal.(PNAS2000,97,13251-6)描述了一種能夠結合到不同的GIF表位的多克隆抗體以識別Ts細胞中的GIF翻譯后修飾的生物化學特性。Wataraietal,supra報道稱GIF在體外出現在不同的構象異構體中。該異構體的一個類型通過化學修飾單個半胱氨酸殘基而產生。該化學修飾導致GIF蛋白內部的構象改變。在過去幾十年，和MIF有關的那些疾病和紊亂中的一個即為上述所指出的癌癥。一般通過各種途徑治療癌癥，其中一種正在使用的即是所謂的化學治療劑(其是抗癌化療的基礎)。一般意義而言，化療的潛在概念是假定一種疾病或紊亂(其由細菌、病毒、寄生蟲和癌細胞引起)可以通過化合物有效地治療。化療的一個特定指征就是癌癥。化學治療劑可以起到如殺死比其他細胞分裂更快的細胞的作用，因而可以靶向通常比非-癌細胞分裂更快的癌細胞。大多數化學治療劑藥物通過破壞細胞分裂起作用，即它們在細胞周期的一個或若干個階段起作用，因此能夠靶向分裂更快的細胞。化學治療劑也可以抑制細胞生長，即它們可以減慢或廢除細胞生長或分裂；其他化學治療劑會導致細胞受損并殺死它們；在那種情況下，它們被稱作細胞毒性。大多數細胞毒性藥物造成的損害不足以殺死細胞，但是能夠產生引起程序性細胞死亡(凋亡)的刺激物。一般而言，化學治療藥物的主要種類為烷基化劑、抗代謝物、蒽環類化合物、植物生物堿、拓撲異構酶和其他抗腫瘤劑。最常見的，如上所述，這些藥物能影響細胞分裂；它們也能夠影響DNA合成或其功能。其他化學治療劑不直接干擾DNA。這些是化學治療劑的新種類，其被稱為信號攔截子，包括單克隆抗體和酪氨酸激酶抑制劑例如甲磺酸伊馬替尼。烷基化親核官能團的烷基化劑的例子，可為二氯甲基二乙胺、環磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法倫(苯丙氨酸氮芥)(melphalane)、三芥環磷酰胺、異環磷酰胺、卡莫司汀、環己亞硝脲、達卡巴嗪、替莫唑胺、絲裂霉素C和其他。順鉑、卡鉑、奧沙利鉑和其他含鉑化合物能與DNA形成穩定的復合物。細胞毒性抗代謝物為葉酸類似物(例如，氨甲蝶呤/氨喋呤、雷替曲塞、培美曲塞)、嘌呤(例如，6-巰基嘌呤、咪唑硫嘌呤、硫鳥嘌呤、氟達拉濱、克拉屈濱)或嘧啶(阿糖孢苷、吉西他濱、5-氟尿嘧啶和它的前體、去氮雜胞苷(deazacytidine))。抗代謝物通過干擾嘌呤和嘧啶核苷酸從頭合成中的關鍵步驟而抑制DNA合成，或它們在細胞周期S期中被整合到DNA，在這里它們干擾DNA折疊、DNA修復或甲基化。或者，一些化合物也被整合入RNA。源自植物和通過妨礙微管功能而阻止細胞分裂的生物堿和萜類的例子是長春花生物堿和紫杉烷。特別出名的長春花生物堿是長春新堿、長春花堿、長春瑞濱和長春地辛。足葉草毒素是植物來源化合物的另一個例子。紫杉烷的一個例子是多烯紫杉醇或紫杉醇。雌莫司汀是靶向微管蛋白的合成化合物的一個例子。拓撲異構酶抑制劑是酶的抑制劑，其可以維持DNA的拓撲結構，舉例包括喜樹堿例如伊立替康和拓撲替康(類型1拓撲異構酶抑制劑)或安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷和替尼泊苷(拓撲異構酶類型2抑制劑)。最后，抗腫瘤藥螯合劑的例子包括更生霉素、阿霉素、表阿霉素、博來霉素和其他。綜述見如下所示的Goodman和Gilman的治療藥理學基礎第12版：“癌癥化療的一般原則，簡介部分”。幾種腫瘤容易受到激素療法的影響：糖皮質激素(例如氫化波尼松、地塞米松和其他)能夠促進淋巴瘤細胞的凋亡。因此，它們屬于典型的化療方法。類似地，幾種類型的癌癥易受激素干擾。這包括，例如乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌。激素消融可以通過促性腺激素釋放激素受體激動劑(例如乙基酰胺、戈舍瑞林、亮丙瑞林、hisrelin等)抑制垂體釋放促性腺激素實現，其引起受體脫敏，因此抑制激素產生，或通過促性腺激素釋放激素受體拮抗劑(例如地加瑞克)來實現。或者，雌性激素和雄性激素的作用可能被激素受體拮抗劑阻斷：作為雌激素受體的部分激動劑作用的化合物(也被稱為選擇性雌激素受體調控子，SERM’s)包括它莫西芬、雷洛昔芬和托瑞米芬。氟維司群是純粹的雌激素受體拮抗劑的一個例子。雄激素受體能被拮抗劑例如氟他米特、bicalitamide和環丙孕酮阻斷。最后，激素消融可以通過阻斷負責它們合成的相關酶來實現。以雌激素為例，芳香酶(CYP19)可以被下述化合物阻斷：例如氨魯米特、福美司坦、依西美坦、阿那曲唑和來曲唑。雄性激素的產生可以通過阿比特龍抑制酶17α-羥化酶/C17,20裂解酶(CYP17A1)而被抑制。不論采用何種阻斷激素輸入的方法，都可以抑制易受影響的癌細胞的生長并且促進它們的凋亡。雖然已經表明化學治療劑在治療幾種不同癌癥類型方面是有用和成功的，但取決于所用藥物的類型，化學治療法有著一系列的副作用。最常見的副作用包括免疫系統的退化并可導致潛在的致命的感染、疲勞、貧血、容易出血的傾向、腸胃病例如惡心和嘔吐、腹瀉或便秘和脫發。進一步地，也可能發生對特定器官的損害而導致例如心臟損傷、肝損傷、腎損傷、內耳損傷、外周神經系統的損傷和腦功能障礙。如果給予的化學治療藥物的劑量增加，所有這些副作用也會更加嚴重。通過降低給藥劑量通常可以使得副作用發生幾率降低和/或減輕。在其他例子中，如果需要高劑量治療，化學治療劑的作用如果可以強化或增加，則將會是有利的。因此，本領域依然迫切需求提供一種癌癥治療方法，其允許給定化學治療劑的劑量降低和/或加強給定化學治療劑的作用。技術實現要素：通過本發明能解決上述目標。特別地，這可以通過抗-MIF抗體和給定化學治療劑的聯合治療表明，其中可以檢測到協同效應，與單獨使用化學治療劑治療這種癌癥相比，其使得可以采用較低劑量的化學治療劑治療癌癥和/或采用類似的劑量卻能達到更高的效果。特別地，如上所述以及本發明實施例，使用抗-oxMIF抗體和給定化學治療劑的聯合治療表明和協同效應有關。升高的MIF水平，即MIF水平，通常在各種疾病開始之后，尤其是癌癥開始之后，其可被檢測到。然而，MIF同樣在健康個體內循環，這使得難以清楚地區分。相反地，oxMIF不存在于健康個體中。在徹底研究MIF和其抗體之后，已經發現抗體RAB9、RAB4和RAB0以及RAM9、RAM4和RAM0特異性結合oxMIF(不能結合redMIF)。本發明人進行的早期試驗中，表明氧化過程例如胱氨酸介導的氧化、GSSG(ox.谷胱甘肽)-介導的氧化或MIF和Proclin300或蛋白質交聯劑(例如BMOE)的共同孵育引起MIF可以結合到上述抗體。本申請發明人得到的以下令人驚異地的結論：·重組MIF(人、小鼠、大鼠、CHO、猴子)的氧化還原調節(Cys/Glu介導的輕度氧化)或用Proclin300或蛋白質交聯劑對重組MIF的處理都會導致巴克斯特的抗-MIF抗體RAB9、RAB4和RAB0的結合；·oxMIF的降低導致Ab結合的減少；·oxMIF-異構體的特異性與生物學Ab功效相關(尤其是體內)；·oxMIF水平與疾病狀態有關。關于(ox)MIF的這些額外知識作為本申請發明人進一步研究的基礎。因此，本申請優選的體現如下：1.抗-MIF抗體聯合化學治療劑用于癌癥的治療，其中，所述化學治療劑優選為吉西他濱、順鉑、和/或阿霉素。2.根據1所述的抗-MIF抗體聯合化學治療劑用于癌癥的治療，其中，所述癌癥選自下組：胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌和結腸癌，更優選胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌。3.根據1或2所述的聯合，其中，所述抗-MIF抗體選自下組：抗-MIF抗體RAM9、RAM0和/或RAM4。4.根據1-3任一項所述的聯合治療，其中，所述化學治療劑是吉西他濱。5.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM9，所述化學治療劑是阿霉素并可選地聯合順鉑，所述癌癥為卵巢癌。6.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM9，所述化學治療劑是吉西他濱，所述癌癥是胰腺癌。7.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM0，所述化學治療劑是阿霉素并可選地聯合順鉑，所述癌癥為卵巢癌。8.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM0，所述化學治療劑是吉西他濱，所述癌癥是胰腺癌。9.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM4，所述化學治療劑是阿霉素并可選地聯合順鉑，所述癌癥為卵巢癌。10.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM4，所述化學治療劑是吉西他濱，所述癌癥是胰腺癌。11.根據1-4任一項所述的聯合治療，其中，所述抗-MIF抗體是RAM0，所述化學治療劑是米托蒽醌，所述癌癥是前列腺癌。12.一種試劑盒，包含1-11任一項定義的聯合，以及使用說明。13.根據1-11任一項定義的聯合或如12所述的試劑盒應用于癌癥治療。上述抗體已經用它們的序列以及保存在大腸桿菌(E.coli)中的質粒進行表征和支持，所述質粒分別包含上述抗體RAB0、RAB4和RAB9，以及RAM0、RAM4和RAM9的輕鏈或重鏈中的一種。上述質粒用它們的DSM編號表征，DSM是根據布達佩斯條約在德國的微生物收藏和細胞培養(DSMZ)(位于德國，布倫瑞克，MascheroderWeg1b)保存時得到的官方號碼。這些質粒分別保存在大腸桿菌(E.coli)菌株中。編號為DSM25110的質粒包含抗-MIF抗體RAB4的輕鏈序列。編號為DSM25112的質粒包含抗-MIF抗體RAB4的重鏈(IgG4)序列。質粒DSM25110和DSM25112在適宜宿主細胞中的共同表達可引起優選的抗-MIF抗體RAB4的生成。編號為DSM25111的質粒包含抗-MIF抗體RAB9的輕鏈序列。編號為DSM25113的質粒包含抗-MIF抗體RAB9的重鏈(IgG4)序列。質粒DSM25111和DSM25113在適宜宿主細胞中的共同表達可引起優選的抗-MIF抗體RAB9的生成。編號為DSM25114的質粒包含抗-MIF抗體RAB0的輕鏈序列。編號為DSM25115的質粒包含抗-MIF抗體RAB0的重鏈(IgG4)序列。質粒DSM25114和DSM25115在適宜宿主細胞中的共同表達可引起優選的抗-MIF抗體RAB0的生成。RAB0、RAB9和RAB4的輕鏈和重鏈已經根據布達佩斯條約于2011年8月31日保存在DSMZ(德國，布倫瑞克)：保藏編號分類命名備注DSM25110GA.643-22.pRAB4lcRAB4–輕鏈DSM25111GA.661-01.pRAB9lcRAB9–輕鏈DSM25112GA.736-12.pRAB4G4hcRAB4–重鏈DSM25113GA.757-03.pRAB9G4hcRAB9–重鏈DSM25114GA.782-06.pRAB0lcRAB0–輕鏈DSM25115GA.783-34.pRAB0G4hcRAB0–重鏈同樣地，RAM0、RAM9和RAM4的輕鏈和重鏈已經根據布達佩斯條約于2012年4月12日保存在DSMZ(德國，布倫瑞克)：保藏編號分類命名備注DSM25859GA.661-01.pRAM9lcRAM9–輕鏈DSM25860GA.662-01.pRAM9hcRAM9–重鏈DSM25861GA.906-04.pRAM4lcRAM4–輕鏈DSM25862GA.657-02.pRAM4hcRAM4–重鏈DSM25863GA.906-01.pRAM0lcRAM0–輕鏈DSM25864GA.784-01.pRAM0hcRAM0–重鏈術語“預防性”或“治療性”治療在本領域是熟知的，其是指進行個體給藥。如果是在有不需要的狀態的臨床表現(例如疾病或其他個體不希望的狀態)之前給藥，那么該治療就是預防性的，即它保護個體免于形成不希望的狀態，而如果是在不希望的情況表現之后給藥，那么該治療就是治療性的(即其是為了從中減小、減輕或維持現存的不希望的狀態或副作用)。此處，抗-(ox)MIF化合物是指能夠減弱、抑制、對抗、抵消或降低(ox)MIF生物學活性的任意試劑。抗-(ox)MIF的化合物可為能夠抑制或中和(ox)MIF活性的試劑，例如抗體、特別優選此處所述的抗體，更優選抗體RAB9、RAB4和/或RAB0。特別優選的抗體是RAM9、RAM4和/或RAM0。根據本發明，優選的MIF拮抗劑是抗-MIF抗體。更優選的抗-MIF抗體是針對oxMIF的抗體。在其他實施例中，所述抗-oxMIF抗體，例如上述抗體或結合oxMIF的抗原結合部分，其KD小于100nM，優選KD小于50nM，更優選KD小于10nM。特別優選，結合oxMIF的抗體的KD小于5nM。本發明進一步涉及一種試劑盒，包含抗-MIF抗體或其抗原結合部分以及本發明所述的化學治療劑。除了抗體和化學治療劑，該試劑盒還進一步包含治療劑及其用途。該試劑盒也可包含在治療方法中的使用說明。早期結果表明，在動物模型中，抗-MIF抗體只能結合oxMIF而不能結合redMIF，并能夠抑制GCO和/或細胞增殖，帶來有益效果。發明詳述本
發明內容通過所附附圖進行進一步描述。附圖說明圖1：當A2780adr卵巢癌細胞用阿霉素聯合RAM0(A)和RAM9(B)一起治療時，半胱天冬酶3的水平升高。相比于未處理的細胞，半胱天冬酶3活性升高的百分比如圖所示。使用人類同型對照IgG(對照IgG)、單獨使用抗-MIF抗體RAM0或RAM9、聯合使用對照IgG和阿霉素(對照IgG+Dox)、單獨使用阿霉素(Dox)或聯合使用抗-MIF抗體和阿霉素(RAMO+Dox或RAM9+Dox)處理細胞。圖2：在人類卵巢癌細胞系A2780中進行體外RAM0和順鉑聯合的順鉑依賴性細胞殺死實驗。在沒有抗體(w/o抗體)或人類同型對照IgG或抗-MIF抗體RAM0存在時，記錄順鉑的EC50。數據為9個獨立實驗的平均值±標準偏差。圖3：在小鼠異種移植模型中使用人類卵巢癌細胞系A2780進行體內RAM0和順鉑聯合。對接種了人類對照IgG或RAM0的小鼠進行處理后的腫瘤重量如圖所示。單獨施用抗體或聯合順鉑共同施用。定義和基本技術除非此處另有定義，本發明所使用科學和技術術語的含義為本領域普通技術人員通常所理解的。一般而言，與此處所述細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、基因和蛋白質以及核苷酸化學相關的所用術語和技術是本領域所眾所周知的且通用的。除非特別指出，本發明的方法和技術一般按照本領域已知的傳統方法以及本說明書中所引用和討論的各種綜述和更多特定文獻所描述的進行。見例如，Sambrook等，分子克隆：實驗手冊第2版，冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約(1989)和Ausubel等；分子生物學當代操作手冊，格林出版聯合社(1992)以及Harlow和Lane抗體:實驗手冊，冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約(1990)，通過引用其被包括在此處。“MIF”或“巨噬細胞移動抑制因子”是指一種蛋白質，已知其在免疫和炎癥反應中是一種關鍵的調節子，并且其是糖皮質激素的抗調控子。MIF包括哺乳動物MIF，特別是人MIF(Swiss-Prat原始登記號：P14174)，其中單體形式是由115個氨基酸所編碼的蛋白質，但因為在起始蛋氨酸處裂解，最終形成114個氨基酸的蛋白質。“MIF”也包括“GIF”(糖基化抑制因子)和其他形式的MIF，例如MIF的融合蛋白。MIF的氨基酸編號起始于N端的蛋氨酸(氨基酸1號)，結束于C端的丙氨酸(氨基酸115號)。根據本發明的目的，“氧化的MIF”或oxMIF定義為MIF的異構體，其通過采用輕度氧化劑例如胱氨酸處理MIF得到。如之前本申請發明人所示，用該方式處理的重組oxMIF包括MIF的異構體，該異構體和oxMIF分享結構的重排，oxMIF(例如)在動物感染細菌之后在體內產生。根據本發明的目的，redMIF被定義為還原的MIF，其為不和RAB0、RAB9和/或RAB4結合的MIF。本發明所述的抗-oxMIF抗體能夠區分oxMIF和redMIF，所述oxMIF和redMIF分別通過輕度氧化或還原得到。抗-oxMIF抗體對于特異性地檢測oxMIF是有用的。這些構象異構體之間的區別通過ELISA或表面等離子體共振進行評估。這兩種技術的操作對于本領域技術人員是已知的，并可以采用下述方法進行操作。用Biacore評估抗體的差異結合使用Biacore3000系統，并通過表面等離子體共振分析檢測oxMIF和redMIF與RAB9和RAB0的結合動力學。所述抗體涂覆于CM5(＝甲基葡聚糖)芯片，并且注射預先和0.2％的Proclin300孵育的重組MIF蛋白。(Proclin300由穩定oxMIF結構的氧化異噻唑構成)。在不添加Proclin300的天然HBS-EP緩沖液中，將重組MIF蛋白未結合到RAB9、RAB0或相關抗體(不相關的同型對照抗體)的用作陰性(背景)結合對照。在一個優選的實施例，oxMIF是和抗體RAB9、RAB4和/或RAB0結合力不同的MIF，或者是其抗原-結合片段，意味著這些抗體結合oxMIF，而redMIF不結合這些抗體中的任何一個。在其他實施例中，所述抗-oxMIF抗體，例如，上述抗體或其結合oxMIF的抗原結合部分，其KD值低于100nM，優選KD值低于50nM，更優選KD值低于10nM。特別優選的是，本發明所述的結合oxMIF的抗體的KD值低于5nM。本發明中的如上定義和如下定義的抗體有同樣的特異性。因此在本申請發明人進行的實驗中，它們也顯示類似的結果。抗體例如RAB9、RAB4或RAB0或RAB9、RAM4或RAM0能否結合(例如oxMIF或redMIF)可以根據本領域技術人員已知的方法確定，舉例而言可以是下述方法中的任何一個：使用還原態或氧化態的重組MIF的ELISA，或使用還原態或氧化態的重組MIF的表面等離子體共振，例如上述已知的Biacore實驗。用于確定結合的一個優選的方法是抗體結合例如rec.(ox)MIF的表面等離子體共振，其中“結合”意味著以KD值表示低于100nM，優選低于50nM，甚至更優選低于10nM，其中未結合到redMIF的抗體用KD值高于400nM表征。“結合”和“特異性結合”在本文可交換使用，定義如上所述。“差異結合”在本申請上下文中是指一種化合物，特別是本文所述的能夠結合oxMIF的抗體(例如，KD值如上所述的抗體)，而且不和redMIF(如上所述非結合)結合的抗體。“抗體”是指完整的抗體或能夠和用于(特異性)結合的完整的抗體相競爭的抗原結合部分。一般參見免疫基礎，第7章(Paul,W.,ed.,第2章.RavenPress,紐約(1989))(通過引用包含在本文)。術語抗體包括但不限于人類抗體、哺乳動物抗體、分離的抗體和基因工程形式例如嵌合體、駱駝/駱駝化或人源化抗體。術語抗體的“抗原結合部分”是指抗體的一個或一個以上保留特異性結合抗原(例如(ox)MIF)能力的片段。抗原結合部分可以通過重組DNA技術制備，也可以通過酶或化學裂解完整抗體而制備。抗原結合部分包括但不限于下述：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和互補性決定區域(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、抗體和包含至少抗體的一部分的多肽，其中，所述抗體足以使得特異性抗原結合到多肽，即ox或redMIF。從N端到C端，成熟輕鏈和重鏈可變區包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4區。每個區域中氨基酸的排布與下述文獻的定義保持一致：Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(國家衛生研究院，貝塞斯達，Md.(1987和1991))；Chothiaetal.J.Mol.Biol.196:901-917(1987)，或Chothiaetal.,Nature342:878-883(1989)。抗體或其抗原結合部分可以衍生或連接到另一個功能分子(例如另一個肽或蛋白質)。例如，抗體或其抗原結合部分能夠連接到一個或一個以上其他分子實體，例如另一個抗體(例如雙特異性抗體或雙鏈抗體(diabody))、可檢測試劑、細胞毒性試劑、藥物試劑、和/或連接分子。根據本領域技術人員的通常知識，術語“KD”此處是指特定抗體相對于各自抗原的平衡解離常數。該平衡解離常數可以測量親和力。親和力決定著在平衡態(結合和解離保持平衡的穩定狀態)形成了多少復合物(此處：ox或redMIF和抗體)。ka＝結合速度常數[M-1s-1]kd＝解離速度常數[s-1]KD＝平衡解離常數＝kd/ka[M]術語“人類抗體”是指可變區和恒定區是人類序列的任何抗體。該術語包括帶有源自人類基因但卻被改變過的序列的抗體，所述改變例如為降低可能的免疫原性、增加親和性、去除可能引起不良折疊的半胱氨酸等。該術語包含了在非人類細胞重組制備的抗體，其能夠如給予人類細胞無特有的糖基化。術語“人源化抗體”是指包含人類序列并包含非人類序列的抗體；特別地，“人源化抗體”是指非人類抗體，其中添加了人類序列和/或人類序列替換非人類序列。術語“駱駝化抗體”是指一種抗體，其中所述抗體結構或序列已經發生改變，其和源自駱駝的抗體更加相似，也被命名為駱駝抗體。設計和制造駱駝化抗體的方法是本領域技術人員所熟知的一般知識的一部分。術語“嵌合抗體”是指包含來自兩種或兩種以上不同物種的區域的抗體。術語“分離的抗體”或“其分離的抗原結合部分”是指從抗體源例如噬菌體展示庫或B細胞譜中挑選和鑒定的一種抗體或其抗原結合部分。根據本發明所述的抗-(ox)MIF抗體的制備包含采用基因工程生成重組DNA的任何方法，例如通過反向轉錄RNA和/或擴增DNA和將其克隆到表達載體。在一些實施例中，所述載體是病毒載體，其中額外的DNA部分可連接到病毒基因組。在一些實施例中，所述載體能夠在被引入的宿主細胞中自我復制(例如帶有細菌復制起點的細菌載體和附加體型哺乳動物載體)。在其他實施例中，所述載體(例如非-附加體型哺乳動物載體)在引入宿主細胞時可以整合到宿主細胞的基因組中，因此和宿主基因組一起復制。然而，特定的載體能夠指導它們有效連接的基因的表達。這種載體此處是指“重組表達載體”(或簡單的稱為“表達載體”)。抗-(ox)MIF抗體尤其可以通過傳統表達載體制造，例如細菌載體(例如pBR322和它的衍生物)、或真核載體。編碼抗體的那些序列能與調控復制、表達和/或從宿主細胞分泌的調控序列一起提供。這些調控序列包括例如啟動子(例如CMV或SV40)和單個序列。表達載體也包含選擇和擴增標志物，例如二氫葉酸還原酶基因(DHFR)、潮霉素-B-磷酸轉移酶和胸苷激酶。所用載體的成分例如選擇標記物、復制子、增強子可以通過商業化獲得或通過傳統方法制備。該載體可以被構建以用于在各種細胞培養物中表達，例如在哺乳動物細胞例如CHO、COS、HEK293、NSO、纖維組織母細胞、昆蟲細胞、酵母或細菌例如大腸桿菌。在一些例子中，所用的細胞可以獲得表達蛋白的最佳糖基化。所述抗-(ox)MIF抗體的輕鏈基因和抗-(ox)MIF抗體的重鏈基因可以插入到不同的載體或插入到同一個表達載體中。所述抗體基因通過標準方法插入到表達載體中，例如通過抗體基因片段和載體上的互補限制性位點的連接、或如果沒有限制性位點則通過平末端連接。抗-(ox)MIF或其抗原結合片段的制備包括本領域已知的將重組DNA轉染到真核細胞的任何方法，例如通過電穿孔或微注射。例如，抗-(ox)MIF的重組表達可以通過下述方法完成：將包含抗-(ox)MIF抗體編碼DNA序列的表達質粒通過適當的轉染方法轉入適當的宿主細胞株，所述序列受一種或多種調控序列例如強啟動子的控制，從而得到所轉入的序列已經穩定整合到基因組的細胞。該脂質轉染方法只是本發明可能使用的方法舉例。抗-(ox)MIF抗體的制備也可包含本領域已知的用于培養所述轉化細胞的任何方法，例如在連續或分批培養中，以及抗-(ox)MIF抗體的表達，例如組成型或誘導型表達。特別是在WO2009/086920中提及的抗-(ox)MIF抗體的制備作為進一步參考。在一個優選的實施例中，根據本發明制備的抗-(ox)MIF抗體可以結合oxMIF或其表位。根據本發明，特別優選的抗體是抗體RAB9、RAB4和/或RAB0，以及RAM9、RAM4和/或RAM0。這些抗體的序列群體也已在WO2009/086820中公開，本申請的其他序列如下所示：RAB9輕鏈的氨基酸序列SEQIDNO:1：RAB4輕鏈的氨基酸序列SEQIDNO:2：RAB0輕鏈的氨基酸序列SEQIDNO:3：RAB2輕鏈的氨基酸序列SEQIDNO:4：RAB9重鏈的氨基酸序列SEQIDNO:5：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK；RAB4重鏈的氨基酸序列SEQIDNO:6：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYAMDWVRQAPGKGLEWVSGIVPSGGFTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVNVIAVAGTGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK；RAB0重鏈的氨基酸序列SEQIDNO:7：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYAMDWVRQAPGKGLEWVSGIYPSGGRTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVNVIAVAGTGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK；RAB2重鏈的氨基酸序列SEQIDNO:8：RAM0hc的氨基酸序列SEQIDNO:9：RAM0lc的氨基酸序列SEQIDNO:10：RAM9hc的氨基酸序列SEQIDNO:11：RAM9lc的氨基酸序列SEQIDNO:12：RAM4hc的氨基酸序列SEQIDNO:13：RAM4lc的氨基酸序列SEQIDNO:14：本發明的抗-MIF抗體優選是分離的單克隆抗體。該抗-MIF抗體可以使IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子。在其他實施例中，該抗-MIF抗體是IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亞類。在其他實施例中，該抗體是IgG1或IgG4亞類。在其他實施例中，該抗體是IgG4亞類。在一些實施例中，該IgG4抗體帶有一個單獨突變，而將絲氨酸(絲氨酸228，根據Kabat編號方案)改變成脯氨酸。相應地，IgG4的Fc區域中的子序列CPSC變為CPPC，CPPC是IgG1的子序列(Angaletal.MolImmunol.1993,30,105-108)。此外，抗-(ox)MIF抗體的制備可包含本領域用于純化抗體的任何方法，例如通過陰離子交換色譜或親和色譜。在一個實施例中，抗-(ox)MIF抗體可以通過體積排阻色譜從細胞培養基上清液中純化得到。術語MIF的“中心區域”和“C端區域”分別是指包含人類MIF氨基酸35-68和氨基酸86-115的區域，優選分別包含人類MIF氨基酸50-68和氨基酸86-102的區域。本發明的抗體特別優選能夠結合人類MIF的氨基酸50-68或86-102的區域。這同樣反應在本發明優選的抗體上，例如RAB0、RAB4、RAB2和RAB9，以及RAM4、RAM9和RAM0，它們的結合如下所示：RAB4和RAM4：aa86-102RAB9和RAM9：aa50-68RAB0和RAM0：aa86-102RAB2：aa86-102術語“表位”包括能夠特異性結合免疫球蛋白或抗體片段的任何蛋白決定簇。抗原決定簇一般由化學性質活性的表面基團分子例如暴露的氨基酸、氨基糖或其他碳水化合物側鏈構成，一般具有特異的三維結構特點以及特異的電荷特征。術語“載體”是指一個核苷酸分子，其能夠將其他的核苷酸運輸至與其被連接處。在一些實施例中，所述載體是質粒，即連接有額外DNA片段的圓形雙鏈DNA環。術語“宿主細胞”是指細胞系，其在引入表達載體后可以制備重組蛋白。術語“重組細胞系”是指已經引入重組表達載體的細胞系。應該理解的是，“重組細胞系”不僅指特定個體細胞系，也指該細胞系的后代。由于突變或者環境影響，特定修飾可能發生在后代中，其后代雖然事實上可能和母細胞不一致，但是仍然屬于此處所述的術語“重組細胞系”的范圍之內。根據本發明的宿主細胞類型是例如COS細胞、CHO細胞或例如HEK293細胞或其他任何本領域技術人員已知的宿主細胞，也包括例如細菌細胞例如大腸桿菌細胞。在一個實施例中，該抗-MIF抗體在DHFR-缺乏CHO細胞系即DXB11中表達，其中添加G418作為選擇標志物。當編碼抗體基因的重組表達載體引入到CHO宿主細胞時，通過培養宿主細胞至足夠的時間使得抗體在宿主細胞表達或者抗體分泌到宿主細胞生長的培養基中，從而制備抗體。抗-(ox)MIF抗體可以使用標準蛋白純化方法從培養基中回收。本發明提供的聯合治療的第二個活性成分是化學治療劑。一般意義而言，化學治療劑是化合物，其可以用于治療因細菌、病毒或寄生蟲感染或正常細胞的轉變(癌)而導致的疾病或紊亂。化學治療的一個特別指示是癌癥。化學治療劑可以起到例如殺死比其他細胞分裂快的細胞的作用，因此可以靶向通常比非癌細胞分裂更快的癌細胞。大多數化學治療劑通過損害細胞周期幾個階段中的一個階段的細胞分裂而起作用。因此，它們能夠靶向分裂更快的那些細胞。化學治療劑可以是細胞抑制劑，即它們減慢或廢除細胞的生長或分裂；其他化學治療劑能夠引起細胞損害并殺死它們；在那種情況下，它們被稱為細胞毒性。大多學細胞毒性藥物造成的損害不足以殺死細胞卻能夠產生啟動程序性細胞死亡(凋亡)的刺激物。一般而言，化學治療藥物的主要種類是烷基化劑、抗代謝物、蒽環類化合物、植物生物堿、拓撲異構酶抑制劑和其他抗腫瘤劑。最常見地，如上所述，這些藥物影響細胞周期的一個或若干個階段；它們也影響DNA合成或DNA的完整性。其他化學治療劑不直接干擾DNA。這些是化學治療劑的新種類，其包括單克隆抗體和酪氨酸激酶抑制劑例如甲磺酸伊馬替尼。其他例子是化學治療類激素和激素拮抗劑，例如糖皮質激素。烷基化親核官能團的烷基化劑的例子，可以為二氯甲基二乙胺、環磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法倫(苯丙氨酸氮芥)(melphalane)、三芥環磷酰胺、異環磷酰胺、卡莫司汀、環己亞硝脲、達卡巴嗪、替莫唑胺、絲裂霉素C和其他。順鉑、卡鉑、奧沙利鉑和其他含鉑化合物與DNA形成穩定的復合物。細胞毒性抗代謝物為葉酸類似物(例如氨甲蝶呤/氨喋呤、雷替曲塞、培美曲塞)、嘌呤(例如6-巰基嘌呤、咪唑硫嘌呤、硫鳥嘌呤、氟達拉濱、克拉屈濱)或嘧啶(阿糖孢苷、吉西他濱、5-氟尿嘧啶和它的前體、去氮雜胞苷(deazacytidine))。抗代謝物通過干擾嘌呤和嘧啶核苷酸從頭合成中的關鍵步驟而抑制DNA合成，或它們在細胞周期S期被整合到DNA，在這里它們干擾DNA折疊、DNA修復或甲基化。或者，一些化合物被整合入RNA。源自植物的并通過妨礙微管功能而阻止細胞分裂的生物堿和萜類的例子是長春花生物堿和紫杉烷。特別出名的長春花生物堿是長春新堿、長春花堿、長春瑞濱和長春地辛。足葉草毒素是植物來源的另一個例子。紫杉烷的一個例子是多烯紫杉醇或紫杉醇。雌莫司汀是靶向微管蛋白的合成化合物的一個例子。拓撲異構酶抑制劑是酶的抑制劑，其可以維持DNA的拓撲結構，舉例包括喜樹堿例如伊立替康和拓撲替康(類型1拓撲異構酶抑制劑)或安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷和替尼泊苷(拓撲異構酶類型2抑制劑)。最后，抗腫瘤藥螯合劑的例子包括更生霉素、阿霉素、表阿霉素、博來霉素和其他。綜述見如下所示的Goodman和Gilman，治療藥理學基礎，第12版：“癌癥化療的一般原則”。以下是烷基化劑的舉例：二氯甲基二乙胺環磷酰胺異環磷酰胺美法侖苯丁酸氮芥甲基芐肼(N-甲基肼，MIH)二甲磺酸丁酯卡莫司汀(BCNU)鏈脲菌素(等于streptozotocin)苯達莫司汀達卡巴嗪(DTIC；dimethyltriazenolmidazolecarboxamide)替莫唑胺順鉑、卡鉑、奧沙利鉑以下是抗代謝物舉例：氨甲蝶呤(Amethopterin)培美曲塞氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)，卡培他濱阿糖孢苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷)吉西他濱5-氮雜胞苷脫氧-5-氮雜胞苷巰嘌呤(6-巰基嘌呤；6-MP)噴司他丁(2’-脫氧助間型霉素)氟達拉濱氯法拉濱奈拉濱也可以選擇下述天然產品：長春花堿長春瑞濱長春新堿紫杉醇、多烯紫杉醇依托泊苷替尼泊苷拓撲替康伊立替康更生霉素(放線菌素D)道諾霉素(道諾霉素、紅比霉素)阿霉素曲貝替定米托蒽醌博來霉素絲裂霉素CL-天冬酰胺酶激素和拮抗劑舉例如下：米托坦(o.p'DDD)強的松己酸羥孕酮醋酸甲羥孕酮、甲地孕酮己烯雌酚、炔雌醇三苯氧胺、托瑞米芬阿那曲唑、來曲唑、依西美坦丙酸睪酮、氟羥甲睪酮氟他米特、康士得亮丙瑞林進一步試劑的例子如下：羥基脲維甲酸、三氧化二砷組蛋白脫乙酰酶抑制劑(伏立諾他)伊馬替尼達沙替尼、尼羅替尼吉非替尼、埃羅替尼索拉非尼舒尼替尼拉帕替尼硼替佐米干擾素-α白介素-2薩力多胺來那度胺西羅莫司脂化物依維莫司。已經表明，化學治療劑在減輕和治療癌癥中是成功的。然而，大多數化學治療劑都和一系列副作用相關，在一些極端例子中，需要停止該治療。在任何例子中，都應該盡可能避免對患者身心健康產生的進一步負擔的副作用。根據本發明，通過將化學治療劑和抗-MIF抗體結合，與化學治療劑作為單獨活性成分相比，其可以降低治療必須的化學治療劑的用量，其中，該用量對于給定治療是必需的。與單獨使用化學治療劑相比，本發明的另一個可能是維持化學治療劑的用量，但卻對病人具有更高治療效應。病人治療效應的增加也表明可以聯合抗-MIF抗體和低劑量的化學治療劑，來達到單獨使用化學治療取得的治療效應的可能性，例如在化學治療的副作用導致不能夠繼續用更高劑量治療的情況下使用。本申請的發明人已經表明聯合使用化學治療和抗-MIF抗體的作用相比于單獨使用抗-MIF抗體或化學治療劑更高的治療效應。本領域的技術人員可以容易地確定治療效應，其涉及縮小或改進或減輕給定癥狀。確定如治療效應的方法是已知的，例如可以通過測定患者在用MIF拮抗劑和化學治療劑治療后的存活可能性或存活時間，或者對帶有相同疾病的其他個體單獨用上述試劑中的一種治療后的存活可能性或存活時間，或測定同一個病人隨著時間癥狀的改變。本領域技術人員熟知的一個例子是Kaplan-Meier-Plot。其他方法/實驗是已知的，并且能從一般教科書中得到，例如治療學的藥理學基礎，第12版，“癌癥化療的一般原則，前言”。該文獻以全文引用的方式包含在此處；其他方法/實驗為本申請實施例所記載的方法/實驗。根據本發明，優選的化學治療劑是阿霉素和吉西他濱。在優選的實施例中，阿霉素可以和順鉑聯合使用。同樣優選的是例如紫杉醇(abraxane)。特別優選的聯合是：-阿霉素，特別優選和順鉑以及抗-MIF抗體聯合用于治療卵巢癌，或-吉西他濱和/或紫杉醇，特別優選和抗-MIF抗體聯合用于治療胰腺癌。在一個優選實施例中，上述聯合中抗-MIF抗體選自RAB9、RAB4和RAB0。在上下文中的“癌癥”包含細胞或一組細胞表現出不受控制的增長、入侵(侵入或破壞相鄰組織)和有時候的代謝的所有失調或疾病。進一步地，在優選的實施例中，所述癌癥是MIF相關的。MIF-相關的癌癥是例如淋巴瘤、肉瘤、前列腺癌和結腸癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肝細胞癌、卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌以及子宮內膜異位。本申請可能的劑型設想成片劑、膠囊、袋劑或丸劑。顆粒劑作為優選的劑型，可以裝入膠囊或袋劑或者可以壓縮成片劑或丸劑。本發明還包括的劑型是飲品或糖漿、酏劑(elixirs)、藥酒、懸浮液、溶液、水凝膠、膜劑、錠劑、口香糖、口腔速崩片、漱口水、牙膏、潤唇膏、含藥洗發水、納米球懸浮液和微球體片劑和氣霧劑、吸入劑、噴霧、煙或加熱用粉末形式和典型應用的劑型例如膏、凝膠、搽劑或軟膏、藥膏、滴耳液、滴眼液和皮膚貼布。進一步包含栓劑，其可被用于例如直腸給藥或陰道給藥。所有這些劑型對于本領域技術人員都是已知的。根據本發明優選的劑型是口服藥例如顆粒劑、包膜顆粒、片劑、腸溶片劑、藥丸、栓劑和乳劑。更優選的是顆粒劑和片劑。其他優選的劑型是腸胃或局部用藥劑型。抗MIF抗體特別優選的給藥途徑是皮下或靜脈給藥。化學治療劑優選的給藥方式是口服給藥(例如顆粒劑、液體、袋劑或片劑)。化學治療劑進一步優選的給藥方式是局部用藥，其中所述局部用藥包含涂覆到皮膚和/或噴霧，例如鼻腔噴霧或吸入劑。化學治療劑進一步優選的給藥方式是靜脈注射或通過皮下注射(包括緩釋配方)。然而大部分可以通過任何已知的方式給藥。術語“聯合”或“聯合治療”在此處交換使用。它們是指一種給藥方案，其中抗-MIF抗體和化學治療劑同時或先后給藥或順序相反。所述給藥方案一般為每日給藥化學治療劑，每兩周給藥抗-MIF抗體。優選的給藥方案為：如上所述，抗-MIF抗體可以和化學治療劑同時或先后給藥。“同時”在上下文中是指給藥抗-MIF抗體和給藥化學治療劑的時間間隔不超過10分鐘。“先后”是指給藥抗-MIF抗體和給藥化學治療劑的時間間隔在10分鐘以上。因此時間間隔可以是10分鐘以上、30分鐘以上、1小時以上、3小時以上、6小時以上或12小時以上。抗-MIF抗體和化學治療劑的劑型主要需要能夠確保兩種化合物在體內存在的時間相同(特定時間段)。抗-MIF抗體的半衰期一般為2-4周，化學治療劑的半衰期為2-48小時。因此，上述聯合治療也明確地包含了連續給藥方案，其中在該方案中本領域技術人員會考慮各自的化學治療劑和抗體的已知半衰期問題。鑒于此，抗體的半衰期一般為2-4周，考慮所用抗體的給藥時間可以是2周一次、3周一次或一個月一次。在一個典型實施例中，本發明所述的用于和抗體聯合給藥的化學治療劑的半衰期是2-48小時；因此，化學治療劑的給藥時間間隔是每隔5小時、每隔6小時、一天三次、一天兩次、一天一次、一周一次或在一個典型實施例中每三周一次。然而根據本發明，化學治療劑的劑量以及抗體的聯合劑量需要執業醫生基于需要治療的特定紊亂的個例以及患者的詳情來決定。本領域技術人員可以知曉對給定化學治療劑各自的指導方案。基于療效性化學治療的一般理解，人們會期望能夠施用最大耐受劑量以取得最期望的劑量密度。只有當存在毒性時(即嗜中性粒細胞<4000(但>2500)＝給藥一半的劑量，見順鉑或環磷酰胺)，才會降低劑量。大多數化學治療劑的給藥都是基于(m)g/m2身體表面積。在小鼠、大鼠和人類之間耐受性和功效的區別一般是基于身體表面積計算劑量的。在一個特別優選的實施例中，所述活性成分的遞送應當是可控的，例如延遲釋放。也就是說，本發明所述的包含這樣的活性成分的口服給藥劑型能通過包衣進行提供。因此，在本發明一個優選的實施例中，涉及含有包衣的顆粒劑，特別地，所述顆粒包含活性成分，且所述活性成分以可控的方式釋放，其中這些顆粒都有包衣。更優選的，這些包衣是藥學可接受的包衣，特別優選的是腸溶衣、延長釋放包衣或延遲釋放包衣；所有這些包衣對于本領域技術人員都是已知的。體內保護性抗-MIF的單克隆抗體(mAbs)(例如RAB9、RAB4、RAB0)的亞類，在還原態時不和未修飾過的MIF結合，所述保護性抗-MIF的單克隆抗體針對促炎性細胞因子MIF(巨噬細胞移動抑制因子)。相比之下，顯示這些mAbs對氧化還原依賴性MIF異構體具有高度選擇性。一種特別優選的抗體是抗體RAB9。另一種特別優選的抗體是抗體RAB4。再一種特別優選的抗體是抗體RAB0。非常優選的抗體是抗體RAB9。如本發明所示，此處提到的聯合治療是有利的，它使得兩種成分具有協同效應。通過實施例對本發明進行以下描述，但這些實施例不應該被認為是對本發明的限制。參考實施例A)用于抗體篩選的GCO實驗THP1懸浮培養基離心，細胞用新鮮的全培養基重懸至細胞密度為每毫升含106個細胞。該培養基轉移到96微孔板中(90μl/孔)，添加潛在的抗-MIF抗體，其終濃度為75μg/ml。一式三份測試每個抗體。在37℃o/n孵育之后，添加地塞米松并且濃度為2nM，在37℃孵育一小時之后，添加LPS(終濃度為3ng/ml)。在37℃孵育六小時之后，收獲上清液，使用商購的ELISA測定IL-6濃度。一式三份的所有結果取平均值，測定相比對照抗體的IL-6分泌的百分比。導致IL-6分泌率低于75％的抗體被認為是陽性。B)測定IC50值的實驗除了增加所用抗體的含量(一般為1-125nM)，其他依照篩選實驗中所述的方法進行本實驗。相比于陰性對照抗體，得到的劑量反應曲線表示為％抑制。該曲線用于計算抗體的最大抑制效應(％Inhmax)和具有50％最大抑制效應(IC50)的抗體濃度。C)細胞增殖抑制血清可以刺激靜止的NIH/3T3分泌MIF，并且MIF反過來可以刺激細胞增殖。因此，抑制內源性MIF的抗體會降低靜止的NIH/3T3細胞的增殖。增殖的降低可以通過添加3H-胸苷測定。包含10％血清的96孔板中，每孔含1000個NIH/3T3細胞在37℃培養整個周末。然后，細胞再含有0.5％血清的培養基中在37℃饑餓培養過夜。去除0.5％的培養基，用新鮮的包含10％血清、75μg/ml抗體和5μCi/ml的3H-胸苷培養基替換。在和CO2培養箱中37℃下培養16小時之后，每孔中的細胞用150μl的冷PBS沖洗。使用多通道吸管在每孔中添加150μl5％(w/v)TCA溶液，然后在4℃下孵育30分鐘。用150μlPBS沖洗平板。每孔添加75μl的0.5MNaOH溶液和0.5％SDS，混合后，儲存在室溫下。通過將5mlUltimaGold(Packard)和75μl的樣品溶液混合后，在β-計數器測量樣品。每個測量都是一式三份，其值通過t-檢驗和對照抗體相比較。能夠顯著降低增殖的抗體(P<0.05)被認為是陽性的。D)結合研究：抗-MIF抗體的表位決定簇用連接緩沖液(couplingbuffer)稀釋每種肽后，得到一般為1μg/ml濃度的肽，并添加到微板中(NUNCImmobilizerTMAminoPlateF96Clear)，然后在4℃下孵育過夜(100μl/孔)。使用重組的全長MIF和PBS作為對照。平板用200μlPBST沖洗三次，添加抗體(PBS中2-4μg/ml)(100μl/孔)，在室溫下孵育2小時并輕輕搖晃。平板用200μlPBST沖洗三次，并添加檢測抗體(例如標記的Fc特異性抗-人類IgG/HRP，Sigma)(100μl/孔)。在室溫下孵育并輕輕搖晃1小時，所述平板用200μlPBST沖洗三次。每孔用100μlTMB(3,3',5,5'-四甲基聯苯胺)溶液(T-0440,Sigma)在暗處孵育30分鐘。通過每孔添加100μl1.8MH2SO4終止染色反應。在450nm下測量樣品。E)通過Biacore測定抗-MIF抗體的Fab片段的親和性典型地，將40RU單位的人類重組MIF和CM5(＝甲基葡聚糖)基質(Biacore)固定在感應芯片上。稀釋于HBS-EP中的Fab片段注射的濃度范圍一般為6-100nM。每次循環之后，該芯片都用50mMNaOH+1MNaCl重新生成。根據1:1Langmuir模型計算親和性。具體實施方式簡介使用化學治療藥物治療癌癥和增生過多失調時，經常因嚴重的副作用或需要增加劑量而受阻。此外，已經證實很多腫瘤對化學治療劑的干擾有抵抗。在本發明中，我們介紹了化學治療化合物(例如吉西他濱、阿霉素或順鉑)的功效可以通過與MIF拮抗劑(例如抗-oxMIF抗體)的聯合而增加。與各自的單獨治療相比，該聯合具有改善癌癥和增生過多失調的治療的潛能，并能夠顯著延長病人的預期壽命。綜述抗-MIF聯合螯合劑(通過抗-MIF抗體和阿霉素的聯合示例)實施例1：通過聯合施用阿霉素和抗-MIF抗體誘導抗阿霉素人類卵巢癌細胞的凋亡在體外試驗中，抗阿霉素A2780adr卵巢癌細胞單獨用抗-MIF抗體RAM9或RAM0或和阿霉素聯合處理。在處理72小時后，通過檢測半胱天冬酶3的活性評估凋亡的引發。和同型對照抗體處理或未處理的細胞相比，未處理的細胞或用抗體單獨處理的細胞中的半胱天冬酶3的活性沒有增加。阿霉素引發了顯著的但較小的半胱天冬酶3活性的增加。抗-MIF抗體和阿霉素的聯合進一步加強了半胱天冬酶3的活性，因此誘導了凋亡。該結果表明，通過聯合MIF中和抗體給藥，原本抗阿霉素的細胞系開始對該化學治療藥物敏感。阿霉素和RAM0(圖1A)或RAM9(圖1B)的聯合產生了可比較的結果。這些結果證實了，當抗-MIF和抗代謝物聯合時，在體內觀察到了協同增強的半胱天冬酶活性。抗-MIF聯合烷基化劑(用抗-MIF抗體聯合順鉑示例)實施例2：抗-MIF抗體體外使A2780卵巢癌細胞對順鉑的作用敏感化已經在順鉑依賴性細胞殺死實驗中證實順鉑和抗-MIF抗體的協同效應。在沒有或添加50nMRAM0或人類同型對照抗體下，A2780細胞和濃度提高的順鉑共同孵育。孵育48小時后的細胞用AccutaseTM分離，并用鈣黃綠素-AM標記，用流式細胞儀測定鈣黃綠素熒光水平。不使用任何藥物或抗體時的平均熒光強度設定為1，以使實驗間變化標準化。標記相對于順鉑濃度的平均熒光強度和計算順鉑最大活性濃度的半數值(EC50-值)。當順鉑和RAM0聯合時，該EC-50值顯著降低(p<0.01)(圖2)。相比于同型對照抗體(數據沒有顯示)，抗-MIF抗體作為單藥治療(沒有順鉑)對于細胞殺死沒有作用。實施例3：抗-MIF抗體體內使A2780卵巢癌細胞對順鉑的作用敏感化總結上述數據表明，在細胞培養中，RAM0使得卵巢癌細胞更容易被順鉑殺死。該效應有高度相關性，特別是如果也能在體內觀察到。在雌性Mf1裸小鼠中進行研究，該裸小鼠接種A2780異種移植(圖3)。小鼠(n＝10/組)接種重懸于基質膠的1*106A2780細胞。在接種異種移植物一天后，開始每隔一天注射RAM0(15mg/kg)或人類同型對照抗體(15mg/kg)。在接種異種移植物第2天后，開始每隔一周給予順鉑。順鉑作為單藥治療對于腫瘤生長沒有任何作用。RAM0有微小但不顯著的影響。然而，RAM0使得腫瘤對順鉑治療敏感化，順鉑和RAM0的聯合治療也表明腫瘤生長顯著降低(p＝0.04)。抗-MIF聯合螯合劑/天然制劑(用抗-MIF抗體聯合米托蒽醌示例)實施例4：抗-MIF抗體RAM0使得LnCAP前列腺癌細胞對米托蒽醌的細胞毒性作用敏感化米托蒽醌和抗-MIF抗體的協同效應已經在米托蒽醌依賴性細胞殺死試驗中證實。在沒有或添加100nMRAM0或人類異型對照抗體下，LnCAP細胞和濃度提高的米托蒽醌共同孵育。孵育48小時后的細胞用AccutaseTM分離，并用鈣黃綠素-AM標記，用流式細胞儀測定鈣黃綠素熒光水平。不使用任何藥物或抗體時的平均熒光強度設定為1，以使實驗間變化標準化。標記相對于米托蒽醌濃度的平均熒光強度和計算米托蒽醌最大活性濃度的半數值(EC50-值)。測定米托蒽醌/抗體聯合(n＝10)的10組獨立的EC50值。米托蒽醌單獨的EC50值測定為1.6nM。米托蒽醌和對照抗體的聯合顯示了相同的平均EC50值。然而，當米托蒽醌和RAM0聯合時，平均EC50值顯著地降低到0.97nM。相比于同型對照抗體(數據沒有顯示)，抗-MIF抗體作為單藥治療(沒有米托蒽醌)對于細胞殺死沒有作用。結論上述不同實驗中，已經表明MIF抗體和標準的化學治療藥物的聯合引起功效顯著增強。在體外實驗中，抗阿霉素細胞系通過和抗-MIF抗體共同孵育，使得抗阿霉素細胞系對阿霉素敏感化，這通過半胱天冬酶活性的增加證明。此外，抗-MIF抗體在體內模型中使得抗順鉑癌細胞對順鉑敏感化。進一步地，在體外試驗中，米托蒽醌和抗-MIF抗體的聯合使得E50平均值的顯著降低。這是首次描述化學治療藥物和MIF-抑制子的協同效應。化學治療劑和MIF抗體的聯合治療可以克服當前化學治療劑干預的局限性，并改善患有增生過多失調的病人的治療效果。當前第1頁1 2 3