背景技術：
：：本公開涉及免疫學領域。更具體地講，本公開涉及用于誘發免疫應答以對抗呼吸道病原體的方法。由于呼吸道直接接觸環境并且暴露于大量空氣中的生物體，所以呼吸道是最頻發病原生物體感染的部位。此類感染可以導致癥狀和從普通感冒到支氣管炎、毛細支氣管炎和肺炎的疾病以及嚴重和慢性狀況。常見的呼吸道感染致病原既包括病毒（如鼻病毒、冠狀病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒及其它副粘病毒、腺病毒）也包括細菌（如鏈球菌、白喉棒桿菌、百日咳桿菌、流感嗜血桿菌和結核分枝桿菌）。已經生產了有效疫苗以保護兒童和成人免受許多這些呼吸道病原體侵害。然而，已經證明，開發能有效對抗其它呼吸道病原體的疫苗具有挑戰性。因此，能有效對抗呼吸道病原體的安全有效的疫苗的新策略對于尤其是保護幼兒、老人及其它脆弱個體而言是必要的。發明簡述本公開涉及免疫原性組合產品，其包含a)免疫原性組分，其含有呼吸道病原體的肽或多肽抗原；和b)免疫原性組分，其含有編碼該相同呼吸道病原體的抗原的核酸，其中所述這些免疫原性組分被配制成用于同時（例如，共定位的）施用。更具體地講，所述呼吸道病原體是呼吸道合胞病毒（RSV）。本公開還涉及此類免疫原性組合產品的用途，以及施用此類免疫原性組合產品以誘發特異于所述呼吸道病原體的免疫應答的方法。附圖簡述圖1是根據各種方案免疫后RSVA中和滴度的圖示。圖2是根據各種方案免疫后干擾素-γ(IFNγ)產量的圖示。圖3是根據各種方案免疫后RSVA中和滴度的圖示。圖4是根據各種方案免疫后RSVM2-1-特異性CD8+T細胞的圖示。圖5是根據各種方案免疫后中和滴度的圖示。圖6是根據各種方案免疫后肺部RSV滴度的圖示。圖7是根據各種方案免疫后Th1與Th2T細胞的比率的圖示。圖8是在對根據各種方案免疫的個體進行攻毒后肺部粘液分泌細胞的數量的圖示。圖9是在對根據各種方案免疫的個體進行攻毒后支氣管肺泡灌洗(BAL)液中嗜酸性粒細胞的數量的圖示。圖10是根據各種方案免疫后RSVA中和滴度的圖示。圖11是根據各種方案免疫后RSVM2-1-特異性CD8+T細胞的圖示。圖12是在對根據各種方案免疫的個體進行攻毒后肺部病毒滴度的圖示。圖13是根據各種方案免疫后Th1與Th2T細胞的比率的圖示。圖14是在對根據各種方案免疫的個體進行攻毒后RSVM2-1-特異性CD8+T細胞的圖示。圖15是在對根據各種方案免疫的個體進行攻毒后肺部粘液分泌細胞的數量的圖示。發明詳述引言開發針對某些呼吸道病原體的安全有效的疫苗已經被證明頗具挑戰性。本公開涉及具有提高的免疫原性功效的改善的組合物及方法。更具體地講，本公開提供了用于同時并且優選地共定位施用的免疫原性組合產品，其誘發強力的B和T細胞應答，從而提高針對呼吸道病原體的免疫原性、安全性，并最終提高保護。本公開的一個方面涉及免疫原性組合產品，其包含：a)至少第一免疫原性組分，其包含呼吸道病原體的肽或多肽抗原；和b)至少第二免疫原性組分，其包含編碼該相同呼吸道病原體的抗原的核酸；其中所述第一免疫原性組分和所述第二免疫原性組分被配制用于同時施用。在某些實施方案中，所述呼吸道病原體是病毒，如副粘病毒。在一個特定的實施方案中，所述呼吸道病原體是呼吸道合胞病毒（RSV）。在此類實施方案中，所述抗原可以選自RSV抗原，包括：融合蛋白（F）、附著蛋白（G）、基質蛋白（M2–其可包括M2-1（在本文中可寫作M2.1）和M2-2基因產物之一或兩者）和核蛋白（N）。在特定的實施方案中，所述多肽抗原組分含有F蛋白抗原，該F蛋白抗原在構象上被限制為融合前或融合后的構象。在所述免疫原性組合產品的某些實施方案中，所述第一組分的抗原和由所述第二組分的核酸編碼的抗原共享充分的序列同一性，如約70%的序列。在示例性實施方案中，所述免疫組合包含：第一組分，其包含具有下列氨基酸序列的多肽；和/或第二組分，其包含編碼具有下列氨基酸序列的多肽的核酸：a)包含SEQIDNO:2的多肽；b)與SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含對應于天然存在的RSV毒株的RSVF蛋白多肽的氨基酸序列；或c)與SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含不對應于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。在某些實施方案中，所述第一免疫原性組分含有而第二免疫原性組分編碼同源抗原。此類同源抗原可能在序列上相同或不相同。例如，所述抗原可以具有部分相同的氨基酸序列。優選地，此類抗原包含一個或多個相同或重疊的免疫原性表位。例如，用于誘發特異于RSV的免疫應答的一個示例性免疫原性組合產品包含：第一免疫原性組分，其含有具有RSVF蛋白的至少約500個氨基酸的多肽；第二免疫原性組分，其含有編碼相同或不相同多肽（例如，具有RSVF蛋白的至少約500個氨基酸）的核酸。當不相同時，RSVF蛋白多肽在F1和F2結構域內具有至少80%的序列同一性。優選地，所述第一免疫原性組分的多肽和/或由所述第二免疫原性組分編碼的多肽包含或是RSVF蛋白的胞外結構域(FTM-)。在某些實施方案中，所述第一免疫原性組分和/或所述第二免疫原性組分含有（例如，呼吸道病原體的，特別是RSV的）多種抗原。如上所述，所述第一免疫原性組分含有呼吸道病原體的肽或多肽（或其片段）抗原。此類肽或多肽可以任選地為顆粒形式，如VLP或病毒顆粒，或納米級生物顆粒。同樣，如上所述，所述第二免疫原性組分含有編碼呼吸道病原體的抗原的核酸。脫氧核糖核酸和核糖核酸都是合適的。優選地，所述核酸是除質粒DNA之外的核酸。所述核酸可以被包含在DNA或RNA載體，如可復制載體（例如，病毒復制子、自擴增核酸）中，或在病毒（例如，活的減毒病毒）或病毒載體（例如，復制型或復制缺陷型病毒載體）中。合適的病毒載體包括但不限于：腺病毒、改良安卡拉痘苗病毒（MVA）、副粘病毒、新城疫病毒、甲病毒、逆轉錄病毒、慢病毒、腺相關病毒（AAV）、水皰性口炎病毒和黃病毒。任選地，所述病毒載體為復制缺陷型。在一個實施方案中，所述第一組分含有RSVF蛋白抗原，而所述第二組分含有編碼RSVF抗原和RSVM及N抗原的核酸。更具體地講，所述第一組分含有在構象上被限制為融合前構象的RSVF蛋白抗原，而所述第二組分含有編碼RSVFΔTM抗原和RSVM2-1及N抗原的核酸，其中在所述RSVFΔTM抗原與所述RSVM2-1之間包含了自切割位點，而在所述RSVM2-1與N抗原之間包含了柔性接頭。所述免疫原性組合產品的第一和第二免疫原性組分可以被配制（例如，連同藥學上可接受的緩沖劑、載體、賦形劑和/或佐劑）在不同的組合物中。作為另外一種選擇，所述第一和第二免疫原性組分可以被共配制在單一組合物中用于施用（在制造時，例如，在適于保存、分配和施用的穩定共制劑中，或在施用前遞送時）。當所述第一和第二免疫原性組分被配制在不同組合物中時，優選地將它們共定位施用于相同部位或其附近。例如，所述第一和第二免疫原性組分可以通過注射而被胃腸外施用（例如，經由選自肌內、透皮、皮內、皮下的施用途徑）于相同側面或肢體（同側施用）。作為另外一種選擇，所述第一和第二免疫原性組分可以經由粘膜、鼻內、口腔、舌下或噴霧途徑施用，或以粉末（顆粒）或液體形式遞送至肺部。在含有佐劑的制劑中，所述佐劑可以包含：一種或多種金屬鹽（氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁鉀、硫酸羥基磷酸鋁、氫氧化鈣、氟化鈣、磷酸鈣、六水合硝酸鈰(III)、七水合硫酸鋅）、3-D-單磷酰脂A(MPL)、皂草苷、油和水乳液、和/或納米顆粒。本公開的另一方面涉及上述免疫原性組合產品在醫藥上的用途，例如，用于預防、減少或治療個體（如人類個體，例如，新生兒及嬰兒、兒童、青少年、成人例如孕婦或老年人）中由呼吸道病原體引起的感染或與之相關的疾病。因此，還包括了用于通過施用上述免疫原性組合產品以誘發特異于病原體的免疫應答的方法。所述施用可以是在疫苗接種方案中，其用于預防、減少或治療由呼吸道病原體（如引起上呼吸道和/或下呼吸道和/或肺部感染的病毒或細菌）引起的感染或與之相關的疾病。如上所述，在一個具體的實施方案中，所述用途、方法（或疫苗接種方案）是用于預防、減少或治療由副粘病毒（如呼吸道合胞病毒(RSV)）引起的感染或與之相關的疾病。在此類方法、用途或疫苗接種方案中，所述第一和第二免疫原性組分被同時施用（在相同時間或大約相同的時間），并且通常在相同部位或其附近（例如，當通過注射施用時，為同側）。當通過注射施用時，所述第一和第二免疫原性組分可以被共配制，或單獨配制，在這種情況下，設想了使用多腔注射器或通過無針裝置（如透皮貼劑）施用所述第一和第二免疫原性組分。在一些實施方案中，所述方法、用途或疫苗接種方案同時和/或共局部施用所述第一和第二免疫原性組分誘發特異于病原體的免疫應答，其大于由分開施用或使用所述第一免疫原性組分和所述第二免疫原性組分時所誘發的免疫應答的加和效應。優選地，施用本文公開的免疫原性組合產品誘發體液免疫應答、細胞免疫應答或同時誘發體液免疫應答和細胞免疫應答。還公開了含有本文所述的免疫原性組合產品的試劑盒。此類試劑盒還優選地包括用于施用所述免疫原性組合產品的至少一種裝置，如一個或多個預填充注射器，例如，多腔注射器，或無針裝置，如透皮貼劑。術語除非另行說明，否則本文中所用的全部技術與科學術語具有與本公開所屬領域普通技術人員通常所理解的相同的含義。分子生物學常用術語的定義可見于：BenjaminLewin,GenesV,由OxfordUniversityPress出版,1994(ISBN0-19-854287-9);Kendrew等人(編撰),TheEncyclopediaofMolecularBiology,由BlackwellScienceLtd.出版,1994(ISBN0-632-02182-9);和RobertA.Meyers(編撰),MolecularBiologyandBiotechnology:aComprehensiveDeskReference,由VCHPublishers,Inc.出版,1995(ISBN1-56081-569-8)。除非上下文另行明確指出，否則單數術語“一（個、種……）”和“該”包括復數指代物。類似地，除非上下文另行明確指出，否則單詞“或”旨在包括“和”。術語“復數”指代兩個（種）或更多個（種）。還應當理解，就核酸或多肽所給出的所有堿基大小或氨基酸大小以及所有分子量或分子質量值均為近似值，并提供以用于說明。另外，相對于物質（如抗原）的濃度或水平而給出的數字界限旨在是近似值。因此，當指明濃度為至少（例如）200pg時，意味著該濃度應當理解為至少近似（或“約”或“~”）200pg。盡管與本文所述那些類似或等同的方法和材料可用于實踐或測試本公開，但仍然在下文中描述了合適的方法和材料。術語“包含（comprises）”意為“包含（includes）”。因此，除非上下文另有要求，否則單詞“包含（comprises）”及變型如“包含（comprise）”和“包含（comprising）”將理解為表明包括所述化合物或組合物（例如，核酸、多肽、抗原）或步驟，或化合物或步驟的群組，但并不排除任何其它化合物、組合物、步驟或其群組。縮寫“例如（e.g.）”源自拉丁文exempligratia，并且在本文中被用于指示非限制性實例。因此，縮寫“例如（e.g.）”與術語“例如（forexample）”同義。為了便于審查本公開的各個實施方案，提供了下列術語解釋。在本公開的上下文中可以提供額外的術語和解釋。術語“免疫原性”，當指代例如組合物時，意指該組合物能夠誘發特異性（例如，針對病原體如呼吸道病原體的）免疫應答。“免疫原性表位”是特異性免疫應答（例如，B細胞應答和/或T細胞應答）所指向的抗原的一部分，例如，經由T細胞受體和/或抗體的特異性結合。“免疫原性組合物”或“免疫原性組分”是適于向人類或動物個體施用（例如，在實驗設定中）的組合物，其能夠誘發特異性免疫應答。因此，免疫原性組合物包含一種或多種抗原（例如，多肽抗原或編碼多肽抗原的核酸）或抗原表位。免疫原性組合物還可以包含能夠誘發或增強免疫應答的一種或多種額外的組分，如賦形劑、載體和/或佐劑。在某些情況下，施用免疫原性組合物以誘發免疫應答，所述免疫應答保護個體免于病原體誘導的癥狀或狀況。在一些情況下，通過在個體暴露于病原體之后抑制所述病原體（例如，呼吸道病原體）的復制來防止（或減少或改善）該病原體引起的癥狀或疾病。在本公開的上下文中，術語免疫原性組合物將理解為涵蓋旨在出于誘發針對呼吸道病原體的保護性或姑息性免疫應答的目的而向個體或個體的群體施用的組合物（即，疫苗組合物或疫苗）。在本公開的上下文中，“免疫原性組分”指代優先與一種或多種額外的免疫原性組分或組合物聯合使用的免疫原性組合物。“免疫原性組合產品”是包含或包括不止一種（多種）替代“免疫原性組分”的免疫原性組合物。“免疫應答”是免疫系統的細胞（如但不限于：B細胞、T細胞、NK細胞、單核細胞、樹突狀細胞或多形核細胞）對刺激的應答。免疫應答可以是B細胞應答，其導致產生特異性抗體，如抗原特異性中和抗體。免疫應答也可以是T細胞應答，如CD4+應答或CD8+應答。在一些情況下，所述應答特異于特定的抗原（即，“抗原特異性應答”）。如果該抗原來源于病原體，則所述抗原特異性應答是“病原體特異性應答”。“保護性免疫應答”是這樣的免疫應答，其抑制病原體的有害功能或活性，減少病原體引起的感染，或減少由該病原體的感染導致的癥狀（包括死亡）。可以如下測量保護性免疫應答，例如，通過在噬斑減少測定法中抑制病毒復制或噬斑形成，或通過功能性抗體應答，通過減少病征或癥狀，或通過體內測量對病原體攻毒的抗性。“抗原”是可以刺激動物體內抗體產生和/或T細胞應答的化合物、組合物或物質，包括注射、吸收或以其它方式引入到動物（如人類）體內的組合物。術語“抗原”包括所有相關的抗原表位。術語“表位”或“抗原決定簇”指代B和/或T細胞所響應于的抗原上的位點。“優勢抗原表位”或“優勢表位”是這樣的表位，針對其產生了功能上顯著的宿主免疫應答，例如，抗體應答或T細胞應答。在一些情況下，對一種或多種優勢表位的宿主應答提供了對抗病原體的保護性免疫應答。術語“T細胞表位”指代當結合至合適的MHC分子時，T細胞（經由T細胞受體）所特異性結合的表位。“B細胞表位”是抗體（或B細胞受體分子）所特異性結合的表位。術語“多肽”指代這樣的聚合物，其中單體是氨基酸殘基，其通過酰胺鍵接合在一起。術語“多肽”或“蛋白質”，如本文所用，旨在涵蓋任何氨基酸序列并且包括經修飾的序列如糖蛋白。術語“多肽”特別旨在涵蓋天然存在的蛋白質，以及重組或合成生產的那些。術語“片段”，在涉及多肽時，指代多肽的一部分（即，子序列）。術語“免疫原性片段”指代所有這樣的多肽片段，其保留了全長參考蛋白或多肽的至少一個主要免疫原性表位。術語“肽”指代氨基酸聚合物（通過酰胺鍵接合），其長度通常小于100個氨基酸（例如，長度小于50、或小于40、或小于30、或小于25、或小于20、或小于15、或小于10個氨基酸）。肽或多肽內的取向通常列舉為N-末端至C-末端的方向，由單個氨基酸的氨基和羧基部分的取向定義。多肽是從N或氨基-末端向C或羧基-末端進行翻譯的。術語“核酸”和“多核苷酸”指代長度為至少10個堿基的核苷酸的聚合形式。核苷酸可以是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、或任一核苷酸的經修飾的形式。該術語包括DNA或RNA的單鏈和雙鏈或正和負的形式。所謂“分離的”核酸（或多核苷酸）意指這樣的核酸（或多核苷酸），其沒有與在其所來源的生物體的天然存在的基因組中緊鄰的兩個編碼序列（一個在5′端而一個在3′端）緊鄰。在一個實施方案中，多核苷酸編碼多肽。核酸的5′和3′方向是根據單個核苷酸單元的連接性來定義的，并且根據脫氧核糖（或核糖）環的碳的位置來命名的。核酸序列的信息（編碼）內容以5′至3′的方向讀取。在核酸的語境中，術語“載體”指代這樣的核酸，其能夠并入或攜帶得自不同來源的核酸（“插入序列”），并在被引入到細胞（例如，宿主細胞）中時，復制和/或表達該插入的多核苷酸序列。核酸載體可以是DNA或RNA。術語載體將理解為包括，例如，質粒、粘粒、噬菌體、病毒載體、自主復制的病毒核酸、復制子、人工染色體，等。“佐劑”是以非特異性的方式提高免疫應答產生的試劑。常用佐劑包括：礦物質懸浮劑(明礬、氫氧化鋁、磷酸鋁)，抗原被吸附其上；乳液，包括油包水和水包油(及其變型，包括復乳液和可逆乳液)、脂糖、脂多糖、免疫刺激核酸(如CpG寡核苷酸)、脂質體、Toll樣受體激動劑(特別是，TLR2、TLR4、TLR7/8和TLR9激動劑)以及此類組分的各種組合。“疫苗接種方案”指代確定的施用免疫原性組合物或免疫原性組合物的組合的方案（例如，順序）以誘發所需的特異于抗原（或多種抗原）的免疫應答。術語“同時”或“同時地”意指在相同時間或大約相同的時間。同時施用免疫原性組合產品意指在相同時間或大約相同的時間施用兩種或更多種免疫原性組分。在疫苗接種方案的上下文中，該術語應當理解為意指施用兩種或更多種免疫原性組分以誘發動力學相關的免疫應答（例如，初次應答，或再刺激或加強再次或記憶應答的應答）。通常，同時施用（例如，免疫原性組合產品的）兩種或更多種免疫原性組分發生在0至10天之間。通常，同時施用發生在相隔不超過約7天，如約5天，優選不遲于約3天，如在24小時內，如在約8小時或更短時間內。一般，同時施用兩種或更多種免疫原性組分發生在約2小時或更短時間內，這樣在2小時、1小時內或約30分鐘或約10分鐘內施用第一種和至少第二種免疫原性組合物或組分。在一些情況下，同時施用是在相同時間以例如一次或多次注射進行。有關向個體施用不止一種免疫原性組合物的術語“共施用”是指同時施用所述不止一種免疫原性組合物。術語“共定為地”是指將兩種組合物（例如，免疫原性組合物或免疫原性組合產品的免疫原性組分）施用到接受個體身上相同（或大約相同）的位置。所述相同位置在本文中將理解為意指相同或大致相同的部位或孔洞。例如，在粘膜施用的情況下，可以將免疫原性組合產品施用到相同孔洞（例如，口或鼻）。在胃腸外施用的情況下，共定位是指靠近身體上相同（或大致相同）的部位，如相同部位（例如，通過相同裝置），或約10cm以內，或更常見地約5cm以內，如約2cm以內或1cm以內。在一些情況下，所述兩種或更多種組分被合并（共配制）在單一組合物中用于施用到相同部位。術語“同側”或“同側地”，在胃腸外施用的情況下，是指總體上兩側對稱的生物體（如哺乳動物，例如，人或動物個體）身體的同一側。與術語同側相對的是術語“對側”，其指代總體上兩側對稱的生物體的相對側。“個體”是活的多細胞脊椎生物。在本公開的上下文中，所述個體可以是實驗個體，如非人動物，例如，小鼠、棉花大鼠，或非人靈長類。或者，所述個體可以是人類個體。免疫原性組合產品本公開涉及能夠例如在未經試驗的個體中誘發強力T細胞和B細胞應答的免疫原性組合產品。本文公開的免疫原性組合產品含有：a)至少第一免疫原性組分，其包含肽或多肽抗原；和b)至少第二免疫原性組分，其包含編碼抗原的核酸。含有所述肽或多肽抗原和所述編碼抗原的核酸的免疫原性組分被配制成用于向接受者同時施用。當同時施用時，所述第一和第二免疫原性組分誘發，相比各組分單獨施用時的加和應答，更強或更廣（例如，更多樣化和/或在性質上更加均衡）的免疫應答。盡管保護性免疫應答可被表征為主要是B細胞應答（抗體，例如，中和抗體）或T細胞應答（例如，CD8+T細胞應答），但在一些情況下，生成特異于病原體抗原（相同的或不同的）強力的B細胞和強力的T細胞應答是期望且有利的。遺憾的是，許多疫苗接種方案不成比例地誘發B細胞或T細胞應答而在互補應答上并沒有保護性增加。無法同時誘發B和T細胞應答在保護幼嬰上可以是尤其重要的，這既是由于嬰兒免疫系統的相對不成熟，并且還由于母源抗體的存在。典型的疫苗方案涉及反復施用相同的免疫原性組合物（例如，疫苗）。第一次施用（方便起見，定名為引發施用或“引發”）誘導特異于抗原上存在的一個或多個免疫原性表位的B和/或T細胞前體的增殖和成熟（誘導階段）。第二次（以及在一些情況下后續的）施用（方便起見，定名為加強施用或“加強”）進一步刺激并潛在地選擇由先前施用誘發的細胞回憶應答。因此，對B細胞或T細胞免疫應答的偏向通過后續施用相同的免疫原性組合物而被放大。在某些情況下，所述第一次施用是給未經試驗的個體。本發明是基于這樣的證明，同時施用蛋白質（或肽）抗原與編碼該相同病原體的抗原的核酸，正如病原體特異性中和抗體所證實的那樣，能夠誘發特異于該抗原的B和T細胞應答并且其超過（同時在量和質上）通過單獨和/或相繼施用所述兩種組合物所誘發的累積應答。此外，可以實現該組合而沒有免疫干預，所述免疫干預在多種（例如，相關的）抗原的組合中被頻繁地觀察到。在一些情況下，免疫干預顯著減弱所誘發的免疫應答以致使得聯合疫苗接種達不到預期目的。之前已經不僅在針對呼吸道病原體的疫苗（例如，聯合疫苗）的背景中，還在母源抗體與疫苗接種處于生命早期的嬰兒（例如，從新生兒期到大約6個月大期間）之間的干預的背景中，報道了免疫干預。如上所用，“同時（concurrent）”或“同時（simultaneous）”施用指代相同的持續的免疫應答。優選地，在相同時間施用兩種組合物（同時施用DNA+蛋白質），然而，一種化合物可以在另一種（初始）施用的數分鐘內（例如，在同一次醫療預約或就診時）、數小時內，或數周時間內（優選0-10天）被施用并仍然被視為“同時”，因為它們均在相同的持續的免疫應答期間起作用。通常，當施用多肽時，一旦抗原暴露于免疫系統，免疫應答就將啟動，因此該免疫應答被視為即刻的。相比之下，當施用核酸時，在施用后3-7天觀察到抗原的峰值表達（體內），并且因此，當與蛋白質疫苗接種的動力學相比時，抗原暴露于免疫系統可被視為“延遲的”。無論動力學上的差異如何，通過了解到它們均功能性地存在于持續的免疫應答的過程中，所以核酸與多肽的共施用可以被視為“同時的”。為了將兩種免疫原性組分（即多肽以及由所施用的核酸表達的多肽二者）幾乎同時提供給免疫系統，可以設想這樣的制劑，其中以如下方式控制所述多肽：在施用后，其從制劑中被延遲釋放。這允許首先從多核苷酸表達多肽，其隨后由從制劑中延遲釋放的多肽進行補充。在本文公開的免疫原性組合產品的一個具體實施方案中，涉及同時施用核酸和蛋白質兩者，其中所述蛋白質（多肽）以延遲釋放顆粒的形式提供或施用，旨在使抗原在短時期內避開免疫系統。優選地，此時期為0-10天。通常，同時施用以相隔不超過約7天，如約5天的間隔進行，并且更通常間隔不超過約3天，如在24小時內，如在約8小時或更短時間內。一般，同時施用兩種或更多種免疫原性組分發生在約2小時或更短時間內，這樣在2小時、1小時內，或約30分鐘內，或約20分鐘或約10分鐘內，或約5分鐘內，或約2分鐘內施用第一種和至少第二種免疫原性組合物或組分。在一些情況下，同時施用是在相同時間以例如一次或多次注射進行。設想了同時施用可以在單次醫療預約或就診時方便地進行。無論同時（concurrent或simultaneous）施用的不同模式或可能性如何，如上所述，重要的是，在持續免疫應答的誘導階段中提供這兩種免疫原性組分。與此相比，引發加強概念指代2種單獨的免疫應答：(i)用多核苷酸初次引發免疫系統，然后是(ii)在初次免疫應答已經建立后許多周或月用多肽再次或加強免疫系統。核酸和蛋白質組分可以因此作為兩個單獨的事件或聯合（混合的）施用以允許一次施用。優選地，所述核酸和蛋白質組分是混合的。混合可以在使用之前才進行，或在制造（和配制）這兩種組分時進行，或在其間任何時間進行。已經證實，所公開的免疫原性組合產品規避免疫干預，并且相比單獨施用基于蛋白質或基于核酸的疫苗中的任一者，具有更優越的或更廣的（例如，更多樣化和/或更均衡）免疫原性。所公開的免疫原性組合產品特別適用于誘發針對呼吸道病原體，尤其是針對RSV的免疫應答。呼吸道病原體應當理解為意指感染上呼吸道（鼻腔、咽和喉）和/或下呼吸道（氣管、支氣管、肺）細胞的病原體，在嚴重的情況下，引起支氣管炎、毛細支氣管炎和/或肺炎。呼吸道病原體既包括細菌也包括病毒。感染呼吸道的細菌病原體包括，例如，肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌以及流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌，其涉及社區獲得性肺炎(CAP)和慢性支氣管炎的急性加重(AECB)。白喉棒桿菌是上呼吸道感染，白喉，的致病劑，而百日咳桿菌引起百日咳（whoopingcough或Pertussis）。引起呼吸道感染的其它細菌包括：肺炎衣原體、肺炎支原體和嗜肺軍團菌。在細菌呼吸道病原體中還包括：結核分枝桿菌，其引起（除其它表現外）肺結核；炭疽芽孢桿菌，其在被吸入后引起致命的呼吸道感染；以及鼠疫桿菌，其能夠引起肺鼠疫。廣泛的病毒也感染并引起呼吸道疾病。最主要地，病毒呼吸道病原體包括：正粘病毒科的成員（例如，流感病毒）和副粘病毒科的成員（包括呼吸道合胞病毒(RSV)）、偏肺病毒(例如，人類偏肺病毒，hMPV)、副流感病毒(PIV)，以及引起麻疹(麻疹病毒)、腮腺炎(腮腺炎病毒)和新城疫的病毒。腺病毒也是常見的呼吸道病原體。盡管不太頻繁，但某些冠狀病毒(例如，SARS病毒)可以引起嚴重的呼吸道疾病。另外，風疹病毒，一種引起風疹的披膜病毒，可以導致呼吸道感染。因此，在本公開的上下文中，廣義地講，細菌呼吸道病原體和病毒呼吸道病原體均是本文所述的免疫原性組合產品與方法的合適的靶標。在某些實施方案中，所述呼吸道病原體被選為細菌。在用于預防或減少（或治療）由細菌呼吸道病原體引起的感染或疾病的免疫原性組合產品（如本文所述）中，所述免疫原性組合產品包含選自細菌的抗原，如選自以下細菌的抗原：肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、白喉棒桿菌、百日咳桿菌、肺炎衣原體、肺炎支原體、嗜肺軍團菌、結核分枝桿菌、炭疽芽孢桿菌和鼠疫桿菌。在用于預防或減少（或治療）由病毒呼吸道病原體引起的感染或疾病的免疫原性組合產品的實施方案中，所述免疫原性組合產品包含選自病毒的抗原，如選自以下病毒的抗原：正粘病毒（如流感病毒）、副粘病毒（如呼吸道合胞病毒(RSV)）、偏肺病毒、副流感病毒(PIV)、麻疹病毒(Morbillivirus)、腮腺炎病毒(Rubulavirus)、新城疫病毒、腺病毒、冠狀病毒(如SARS病毒)、風疹病毒和披膜病毒。因此，在某些實施方案中，所述呼吸道病原體可以是流感病毒，而所述蛋白質（或肽）抗原和所述由核酸編碼的抗原是流感病毒的抗原。合適的流感病毒抗原包括：血凝素(HA)、神經氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)和基質(M)蛋白。在特定的實施方案中，所述抗原被選為包括同源抗原。即，所述多肽抗原和所述由核酸編碼的抗原均被選為HA抗原、NA抗原、NP抗原和/或M抗原。在這種情況下，HA、NA、NP和/或M抗原可以是相同的或不相同的。如果不相同，則所述兩種抗原還是可以包含一個或不止一個在序列上相同的同源表位。或者，如果不相同，則所述兩種抗原可以包含一個或不止一個選自不同的流感血清型的同源表位。在實施例中所示的某些優選的實施方案中，所述呼吸道病原體是除流感之外的病毒，如副粘病毒（例如，RSV、hMPV或PIV）。因此，此類免疫原性組合產品包含副粘病毒的抗原。在一個具體的實施方案中，所述組合被選為包含RSV的抗原。如上所述，呼吸道合胞病毒（RSV）是副粘病毒科的病原性病毒。在本文公開的免疫原性組合產品的背景中，合適的RSV抗原可以選自：融合蛋白(F)、附著蛋白(G)、基質蛋白(M2)和核蛋白(N)。術語“F蛋白”或“融合蛋白”或“F蛋白多肽”或“融合蛋白多肽”指代具有RSV融合蛋白多肽的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白質。類似地，術語“G蛋白”或“G蛋白多肽”指代具有RSV附著蛋白多肽的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白質。術語“M蛋白”或“基質蛋白”或“M蛋白多肽”指代具有RSV基質蛋白的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白質。類似地，術語“N蛋白”或“核衣殼蛋白”或“N蛋白多肽”指代具有RSV核蛋白的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白質。已經描述了兩組人類RSV毒株，A和B組，其主要基于G糖蛋白抗原性的差異。迄今為止，已經分離出了大量的RSV毒株，其中任一者均適于本文公開的免疫原性組合產品的抗原的背景。由GenBank和/或EMBL登錄號指示的示例性毒株可見于美國專利申請公布號2010/0203071(WO2008114149)，出于公開適用于本文公開的免疫原性組合產品的RSVF和G蛋白的核酸和多肽序列的目的，其通過引用并入本文中。示例性M和N蛋白的核酸和蛋白質序列可見于，例如，美國專利申請公布號2014/0141042(WO2012/089833)，出于公開適用于本文公開的免疫原性組合產品的RSVM和N蛋白的核酸和多肽序列的目的，將其并入本文中。另外的RSV毒株（及其F、G、M和N蛋白抗原）很可能被分離，并涵蓋在RSV抗原的屬內。類似地，RSV屬涵蓋了由天然存在的（例如，此前或后續鑒定出的毒株）通過基因漂移或人工合成和/或重組而產生的變體。有記錄的RSV毒株基因組及其替代核酸和由其編碼的蛋白質（特別是F、G、M和N蛋白）的序列可以由本領域普通技術人員通過搜索GenBank(在萬維網(http://www)上于ncbi.nlm.nih.gov/genbank)而容易地確定。在某些優選的實施方案中，所述多肽抗原是F蛋白多肽抗原。特別適合作為本文公開的免疫原性組合產品的背景中的多肽抗原組分是在構象上受限的F多肽抗原。之前已經描述了構象上受限的F蛋白的融合前(PreF)和融合后(PostF)構象。此類構象上受限的F蛋白通常包含經工程改造的RSVF蛋白胞外結構域。F蛋白胞外結構域多肽是RSVF蛋白的一部分,其包含RSVF蛋白的細胞外結構域的全部或部分并且缺少(例如，通過缺失或置換)功能性跨膜結構域，其可以例如在細胞培養中以可溶形式（未附接至膜）表達。本領域已經描述了構象上受限于融合前構象的示例性F蛋白抗原并在例如美國專利No.8,563002(WO2009079796)；美國專利申請公布No.US2012/0093847(WO2010/149745)；US2011/0305727(WO2011/008974)；US2014/0141037和WO2012158613中詳細公開，出于說明融合前F多肽(和核酸)及其生產方法的目的，其各自通過引用并入本文中。通常，所述抗原是多肽三聚體的形式。提供了融合前構象的F蛋白的實例另外出版物包括：McLellan等人，Science,Vol.340:1113-1117;McLellan等人，Science,Vol342:592-598和Rigter等人，PLOSOne,Vol.8:e71072，其各自也可以被用在本文公開的免疫原性組合產品的背景中。同樣，構象上受限于融合后構象的F蛋白抗原也是本領域熟知的并且可以被用在本文公開的免疫原性組合產品的背景中。通常，所述抗原是多肽三聚體的形式。融合后構象上受限的F蛋白多肽的實例在例如US2011/0305727(WO2011/008974)和Swanson等人，PNAS,Vol.108:9619-9624中詳細公開，出于說明融合后F多肽和核酸及其生產方法的目的，其各自通過引用并入本文中。例如，穩定在融合前構象中的F蛋白多肽通常包含F蛋白的胞外結構域（例如，可溶性F蛋白多肽），其包含至少一種修飾以穩定所述F蛋白的融合前構象。例如，所述修飾可以選自：添加三聚化結構域(通常在C末端)、缺失一個或多個弗林蛋白酶裂解位點(在氨基酸~105-109和~133-136處)、缺失pep27結構域、在疏水性結構域(例如，HRA和/或HRB)中置換或添加親水性氨基酸。在實施方案中，構象上受限的PreF抗原包含RSVF蛋白多肽的F2結構域(例如，氨基酸1-105)和F1結構域(例如，氨基酸137-516)而不含干預性弗林蛋白酶裂解位點，其中所述多肽還包含位于所述F1結構域C末端的異源三聚化結構域。任選地，所述PreF抗原還包含改變糖基化(例如，增加糖基化)的修飾，如置換一個或多個位于對應于RSVF蛋白的氨基酸~500-502處的氨基酸。另外或可替換地，所述構象上受限于融合前構象的F多肽可以包含至少兩個引入的半胱氨酸殘基，其彼此緊鄰并形成二硫鍵以穩定所述融合前RSVF多肽。例如，這兩個半胱氨酸可以彼此在約10?內。例如，半胱氨酸可以被引入到位置165和296。示例性PreF抗原由SEQIDNO:2表示。在其它實施方案中，構象上受限的F抗原可以包含選自以下的一種或多種修飾：1)對一個或兩個弗林蛋白酶裂解位點的一種或多種修飾(例如，突變)，2)對融合肽的一種或多種修飾，3)對p27接頭的一種或多種修飾，4)添加的寡聚序列；和/或提供蛋白酶裂解位點的添加序列。在實施方案中，所述F抗原包含三個RSVF胞外結構域多肽（其各自包含內源HRA區和任選地內源HRB區）和至少一個寡聚多肽，其中所述三個胞外結構域多肽和所述至少一個寡聚多肽形成六螺旋束，前提條件是所述RSVF多肽的內源HRA區不是所述六螺旋束的一部分。所述三聚體可以被表征為：所形成的六螺旋束包含所述HRB區。在一個特定的優選實施方案中（詳述于實施例中），所述F蛋白多肽是具有選自以下的氨基酸序列的蛋白質：a)包含SEQIDNO:2的多肽；b)與SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含對應于天然存在的RSV毒株的RSVF蛋白多肽的氨基酸序列；和c)與SEQIDNO:2具有至少95%序列同一性的多肽，所述多肽包含不對應于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。確定序列同一性的方法是本領域熟知的，并且適用于上述抗原多肽以及編碼它們的核酸（例如，如下所述）。各種程序和比對算法描述于：Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981;Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970;Higgins和Sharp,Gene73:237,1988;Higgins和Sharp,CABIOS5:151,1989;Corpet等人，NucleicAcidsResearch16:10881,1988;以及Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444,1988中。Altschul等人，NatureGenet.6:119,1994提供了序列比對方法和同源性計算的詳細考量。NCBI基本局部比對搜索工具(BLAST)(Altschul等人，J.Mol.Biol.215:403,1990)可得自若干來源，包括國家生物技術信息中心(NCBI,Bethesda,MD)和互聯網，用于與序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx結合使用。可在互聯網上的NCBI網站上得到如何使用此程序確定序列同一性的說明。在一些情況下，所選抗原相對于其衍生自的天然存在的毒株的氨基酸序列具有一個或多個氨基酸修飾。此類差異可以是添加、缺失或置換一個或多個氨基酸。變體的差異通常不超過約1%或2%或5%或10%或15%或20%的氨基酸殘基。例如，相比參考多肽，如SEQIDNO:2的參考F抗原多肽序列，變體抗原多肽序列可以包含1或2，或最多5，或最多約10，或最多約15，或最多約50，或最多約100個氨基酸差異。因此，RSVF蛋白抗原的背景中的變體通常與參考蛋白（例如，SEQIDNO:2中所示的參考序列）共享至少80%或85%，更常見地，至少約90%或以上，如95%，或甚至98%或99%的序列同一性，并且包括本文公開的任何示例性PreF和/或PostF抗原(例如，參見美國專利No.8,563002(WO2009079796)；美國專利申請公布No.US2012/0093847(WO2010/149745);US2011/0305727(WO2011/008974);US2014/0141037;WO2012158613;McLellan等人，Science,Vol.340:1113-1117;McLellan等人，Science,Vol342:592-598;Rigter等人，PLOSOne,Vol.8:e71072;US2011/0305727(WO2011/008974)以及Swanson等人，PNAS,Vol.108:9619-9624。作為本公開的特征而包括的另外的變體是F抗原（包括PreF和PostF抗原），其包含選自在美國專利申請公布號2010/0203071(WO2008114149)中公開的天然存在的變體的核苷酸或氨基酸序列的全部或部分。另外的變體可以通過基因漂移產生，或可以使用定點或隨機誘變或通過重組兩個或更多個預先存在的變體而人工產生。此類另外的變體也適于本文公開的F抗原的背景中。例如，所述修飾可以是置換一個或多個氨基酸(如兩個氨基酸、三個氨基酸、四個氨基酸、五個氨基酸、最多至約十個氨基酸或更多)，其不改變所得F(例如，PreF或PostF)抗原的構象或免疫原性表位。作為另外一種選擇或除此之外，所述修飾可以包括缺失一個或多個氨基酸和/或添加一個或多個氨基酸。事實上，如果需要，所述多肽結構域中的一個或多個可以是合成多肽，其不對應于任何單個毒株，但包含來自多個毒株或甚至來自通過比對多個RSV病毒多肽毒株而推斷出的共有序列的組分子序列。有關共有RSVF(以及M和N)蛋白抗原的實例，參見，US2014/0141042(WO2012/089833)，其通過引用并入本文中，用于教導示例性F、M和N共有序列多肽抗原的設計。在某些實施方案中，所述多肽結構域中的一個或多個通過添加構成標簽的氨基酸序列進行修飾，其有助于后續加工或純化。此類標簽可以是抗原或表位標簽、酶標簽或多組氨酸標簽。通常，所述標簽位于所述蛋白的一端或另一端，如在所述抗原或融合蛋白的C-末端或N-末端。除了多肽或肽抗原之外，本文公開的免疫原性組合產品還包含第二免疫原性組分，其含有編碼該相同呼吸道病原體的抗原（如所述第一免疫原性組分中所含肽或多肽抗原）的核酸。設想了所述核酸是除質粒DNA之外的核酸。所述核酸可以是復制型或復制缺陷型載體的形式，如病毒載體。許多適用于將免疫原性核酸引入到個體中的病毒載體是本領域已知的，并且既包括DNA病毒也包括RNA病毒。適用于編碼本文公開的免疫原性組合產品的背景中的抗原的實例包括，例如：腺病毒載體(復制型或復制缺陷型)、痘病毒載體（包括牛痘病毒載體，如改良安卡拉痘苗病毒（MVA）、NYVAC、禽痘載體、金絲雀痘（ALVAC）和雞痘病毒（FPV））、甲病毒載體（如辛德畢斯病毒、SemlikeForest病毒（SFV）、羅斯河病毒和委內瑞拉馬腦炎（VEE）病毒）及其嵌合體和復制子、皰疹病毒載體（例如，巨細胞病毒（CMV）衍生的載體）、沙粒病毒載體（如淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV）載體）、麻疹病毒載體、水皰性口炎病毒載體、偽狂犬病毒、腺相關病毒、逆轉錄病毒、慢病毒、病毒樣顆粒以及許多其它病毒載體。在一個具體的實施方案中，所述載體是腺病毒。對于本領域普通技術人員而言，腺病毒載體的生產和使用是熟知的。在本文公開的免疫原性組合產品的上下文中，設計、生產和使用含有呼吸道病原體的抗體的腺病毒載體的公開內容的實例可見于，例如，美國專利申請公布號US2014/0141042(WO2012/089833)。有關腺病毒載體的另外的細節可見于，例如，美國專利No.8,216,834(WO2005/071093)；和美國專利申請公布號US2012/0027788(WO2010/086189)；美國專利申請公布號US20050214323中。用于本發明中的腺病毒載體可來源于一系列哺乳動物宿主。已經分離出了超過100種不同的感染各種哺乳動物物種的腺病毒血清型，其中51種來源于人類。因此，所述腺病毒載體中的一種或多種可衍生自人腺病毒。此類人源性腺病毒的實例是Ad1、Ad2、Ad4、Ad5、Ad6、Ad11、Ad24、Ad34、Ad35，特別是Ad5、Ad11和Ad35。已經基于多項生物學、化學、免疫學和結構標準而將人和非人腺病毒血清型分為六個亞屬（A-F）。盡管基于Ad5的載體已經被廣泛用于多個基因療法臨床試驗，但是由于自然感染在一般人群中造成的預先存在的免疫，Ad5和其它人類C組腺病毒載體的使用可能受到限制。Ad5和其它人類C組成員往往是最血清陽性的血清型之一。對現有載體的免疫可能由于在治療期間暴露于所述載體而發展。這些類型的對血清陽性載體的預先存在或發展的免疫可能限制基因療法的有效性或疫苗接種的效果。因此在追求能夠規避宿主免疫應答的基因遞送系統中，替代的腺病毒血清型構成非常重要的靶標。此類替代血清型的范圍之一是來源于非人靈長類的那些，尤其是分離自黑猩猩、倭黑猩猩和大猩猩的腺病毒。參見美國專利6,083,716，其描述了兩種黑猩猩腺病毒的基因組。已經證明，非人猿猴腺病毒載體能以與人類腺病毒載體同樣的效率誘導針對轉基因產物的強力免疫應答(Fitzgerald等人J.Immunol.170:1416;(Colloca等人(2012)ScienceTranslationalMedicine4:1-9;Roy等人(2004)Virology324:361-372;Roy等人(2010)JournalofGeneMedicine13:17-25)。非人靈長類腺病毒可以分離自該動物的腸系膜淋巴結或糞便，并且可以在HEK293細胞中體外復制。盡管存在這些相似性，非人猿猴腺病毒依然在系統發生和免疫上不同于更常見的人類血清型(Ad2和Ad5)。因此，所述腺病毒載體中的一種或多種可來源于非人靈長類腺病毒，例如，黑猩猩腺病毒,如選自以下血清型中的一種：ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、Pan5、Pan6、Pan7和Pan9。具體地講，所述病毒可能是非人腺病毒,如猿猴腺病毒,并且特別是黑猩猩腺病毒如ChAd155、Pan5、6、7或9。此類毒株的實例在WO03/000283中有述，并且可得自美國典型培養物保藏中心，10801UniversityBoulevard,Manassas,Virginia20110-2209，以及其它來源。所需的黑猩猩腺病毒毒株包括：Pan5[ATCCVR-591]、Pan6[ATCCVR-592]和Pan7[ATCCVR-593]。作為另外一種選擇，腺病毒載體可衍生自來源于倭黑猩猩的非人猿猴腺病毒，如PanAd1、PanAd2或PanAd3。本文所述的此類載體的實例可見于例如WO2005/071093、WO2010/086189和GB1510357.5。使用非人猿猴腺病毒被認為優于使用人類腺病毒血清型，這是因為其缺乏預先存在的免疫，特別是缺乏針對靶標群體中的腺病毒的交叉中和抗體。相比在某些候選人類腺病毒載體情況下的35%，所述黑猩猩腺病毒與預先存在的中和抗體應答的交叉反應僅存在于2%的靶標群體中。所述黑猩猩腺病毒不同于更常見的人類亞型Ad2和Ad5，但更接近于亞組E的人Ad4（其并非常見亞型）。Pan6與Pan5、7和9不太密切相關。本發明的腺病毒可能是復制缺陷型。這意味著，相比野生型病毒，其在非互補細胞中的復制能力下降。這可能通過突變所述病毒而實現，例如通過缺失涉及復制的基因，例如缺失E1a、E1b、E3或E4基因。根據本發明的腺病毒載體可能來源于包含功能性E1缺失的復制缺陷型腺病毒。因此，根據本發明的腺病毒載體可能是由于缺乏表達腺病毒E1a和E1b的能力（即，功能性缺失E1a和E1b）而導致的復制缺陷型。所述重組腺病毒還可能在其它基因中具有功能性缺失[參見WO03/000283]例如，缺失E3或E4基因。所述腺病毒延遲早期基因E3可從腺病毒序列（其構成所述重組病毒的一部分）中被消除。E3的功能對于生產所述重組腺病毒顆粒不是必要的。因此，沒有必要替換此基因產物的功能從而包裝可用于本發明的重組腺病毒。在一個具體的實施方案中，所述重組腺病毒具有功能上缺失的E1和E3基因。此類載體的構建在Roy等人，HumanGeneTherapy15:519-530,2004中有述。重組腺病毒還可被構建成具有E4基因的功能性缺失，但是保留E4ORF6功能可能是有利的。根據本發明的腺病毒載體還可含有延遲早期基因E2a的缺失。缺失還可發生在所述腺病毒基因組的晚期基因L1至L5中的任一者上。類似地，中期基因IX和IVa的缺失可能是有用的。其它缺失可發生在其它結構或非結構腺病毒基因上。以上缺失可單獨使用，即，用于本發明中的腺病毒序列可僅含有E1缺失。或者，整個基因或其部分的缺失（能有效破壞其生物活性）可以任意組合使用。例如，在一個示例性載體中，腺病毒序列可具有：E1基因和E4基因缺失，或E1、E2a和E3基因缺失，或E1和E3基因缺失(如E1a和E1b的功能性缺失以及至少部分E3缺失)，或E1、E2a和E4基因缺失，有或沒有E3缺失，等等。此類缺失可能是這些基因的部分或完全缺失，并且可能與其它突變（如溫度敏感突變）組合使用以實現所需結果。用于本發明中的腺病毒載體包括PanAd3(WO2010/086189)和ChAd155(GB1510357.5)。腺病毒載體可以在其中所述病毒能夠復制的任何合適的細胞系中生產。具體地講，可以使用互補細胞系，其提供了所述病毒載體缺失的因素，這些缺失的因素導致其受損的復制特性（如E1和/或E4）。沒有限制地，此類細胞系可以是HeLa[ATCC登錄號CCL2]、A549[ATCC登錄號CCL185]、HEK293、KB[CCL17]、Detroit[例如，Detroit510,CCL72]和WI-38[CCL75]細胞，等等。這些細胞系均可得自美國典型培養物保藏中心，10801UniversityBoulevard,Manassas,Virginia20110-2209。其它合適的親代細胞系可得自其它來源，如PER.C6?細胞，如以ECACC號96022940保藏在應用微生物學與研究中心(CAMR,UK)的歐洲動物細胞培養物保藏中心(ECACC)的細胞所示，或Her96細胞(Crucell)。在另一個實施方案中，所述病毒載體是痘病毒載體。在優選的實施方案中，所述痘病毒選自：美國專利號6,761893(WO02/42480);美國專利號7,964,395;美國專利號7,964,396;美國專利申請公布號US2013/0183335(WO2012/048817);和PCT專利申請公布號WO2014/019718，其提供了示例性載體及用于生產適于如本文公開的免疫原性組分的背景中的MVA載體的方法。前述每一者均通過引用并入本文中，用于教導合適的MVA載體及方法。在另一個實施方案中，所述病毒載體是甲病毒載體，如甲病毒復制子或其它自我復制RNA載體。示例性甲病毒載體及用于生產并遞送適用于本文公開的免疫原性組合產品的背景中的載體的方法在例如US20090104226(WO2006078294);US20110300205(WO2011005799);US20130195968(WO2012/006376);US20130177639(WO2012006377);WO2013006838;和WO2013006842中有述，并將其有關適于所公開的免疫原性組合產品的背景中的示例性自我復制RNA載體的公開內容各自并入本文中。在本文公開的免疫原性組合產品的上下文中，所述呼吸道病原體的多肽抗原和由核酸編碼的該相同病原體的抗原可以是相同或不同的。優選地，在本文公開的免疫原性組合產品的上下文中，所述兩種免疫原性組分是同源的（由于來自共同的進化前體而相關聯），并因此共享至少部分序列同一性（如上所確定的）。在一些實施方案中，所述免疫原性組合產品的所述第一免疫原性組分和由所述第二免疫原性組分編碼的抗原包含至少一種相同或同源的抗原。在某些實施方案中，所述抗原是不相同的，在這種情況下，所述抗原可以包含部分相同的氨基酸序列，例如，使得其包含至少一個相同或部分相同的免疫原性表位。部分相同的表位可以例如選自該病原體的另一菌株（毒株）或血清型的同源抗原的對應部分。在所述免疫原性組合產品的某些實施方案中，所述第一組分的抗原和由所述第二組分的核酸編碼的抗原共享充分的序列同一性，如在其整個或部分長度上約70%的序列同一性，例如，約75%的同一性、約80%的同一性、約85%的同一性、約90%的同一性或約或大于95%的同一性。在其中一種組分包含（或編碼）一種抗原而另一種組分包含（或編碼）多種抗原的實施方案中，序列同一性是在對應的抗原之間進行比較的。作為說明，在其中所述第一組分含有RSVF蛋白抗原而所述第二組分含有編碼RSVF抗原以及RSVM和N抗原的核酸的實施方案中，序列同一性是在F蛋白之間進行比較（而不考慮M和N蛋白組分）。當各組分包含多種抗原時，預期至少一種達到70%序列同一性的閾值。例如，在一個誘發特異于RSV的免疫應答的優選的實施方案中，所述免疫原性組合產品包含含有RSVF蛋白抗原的第一免疫原性組分。所述第二免疫原性組分含有編碼RSVF蛋白的核酸。在實施方案中，所述免疫原性組分之一或兩者可以是RSVF蛋白(FΔTM)的胞外結構域。在實施方案中，所述抗原是相同的。在另一個實施方案中，所述F蛋白抗原在序列上不相同。例如，在以下更詳細描述的一個示例性實施方案中，所述第一免疫原性組分包含多肽抗原（其為構象上受限的F蛋白抗原），而所述第二免疫原性組分包含編碼具有不同序列的F蛋白多肽（其在構象上不受限，例如，如US2012/0027788中所述設計的共有序列F蛋白多肽）的核酸（例如，腺病毒載體）。在一個實施方案中，所述第一組分含有RSVF蛋白抗原，而所述第二組分含有編碼RSVF抗原和RSVM及N抗原的核酸。更具體地講，所述第一組分含有在構象上被限制為融合前構象的RSVF蛋白抗原，而所述第二組分含有編碼RSVFΔTM抗原和RSVM2-1及N抗原的核酸，其中在所述RSVFΔTM抗原與所述RSVM2-1之間包含了自切割位點，而在所述RSVM2-1與N抗原之間包含了柔性接頭。更具體地講，所述第一組分可含有SEQIDNO:2所示的RSV蛋白抗原，而所述第二組分可含有攜帶SEQIDNO:3所示的核酸插入序列的腺病毒載體。任選地，所述免疫原性組分之一或兩者包含多種抗原。通常，這些選自相同的靶標病原體。然而，設想了這樣的實施方案，其中所述免疫原性組合產品包含多種病原體的抗原。免疫原性組分及組合在本文公開的免疫原性組合產品的上下文中，所述包含（核酸和蛋白質）的免疫原性組分可以被配制成以單個免疫原性組合物或不同免疫原性組合物的形式施用。當被配制成以單個組合物的形式施用時，所述組分可以在施用前混合或在制造過程中穩定地共配制。本文公開的免疫原性組合物通常含有藥學上可接受的載體或賦形劑。藥學上可接受的載體和賦形劑是眾所周知的并且可以由本領域技術人員選擇。形容詞“藥學上可接受的”表明該指代物適合向個體（例如，人類或動物個體）施用。Remington’sPharmaceuticalSciences,byE.W.Martin,MackPublishingCo.,Easton,PA,第15版(1975)描述了適于治療和/或預防組合物（包括免疫原性組合物）的藥物遞送的組合物和制劑(包括稀釋劑)。例如，在本文公開的免疫原性組分及組合的上下文中，所述載體或賦形劑可以優選地包含緩沖劑。任選地，所述載體或賦形劑還含有穩定溶解度和/或穩定性的至少一種組分。增溶劑/穩定劑的實例包括洗滌劑，例如，月桂酰基肌氨酸和/或吐溫。可選的增溶劑/穩定劑包括精氨酸和形成玻璃的多元醇（如蔗糖、海藻糖等）。許多藥學上可接受的載體和/或藥學上可接受的賦形劑是本領域已知的，并且在例如Remington’sPharmaceuticalSciences,byE.W.Martin,MackPublishingCo.,Easton,PA,第15版(1975)中有述。因此，合適的賦形劑和載體可以由本領域技術人員選擇以生產適于通過選定施用途徑而向個體遞送的制劑。合適的賦形劑包括但不限于：甘油、聚乙二醇（PEG）、山梨醇、海藻糖、N-月桂酰肌氨酸鈉鹽、L-脯氨酸、非洗滌劑磺基甜菜堿、鹽酸胍、尿素、氧化三甲胺、KCl、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+及其它二價陽離子相關的鹽、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇（Dithioerytrol）和β-巰基乙醇。其它賦形劑可以是洗滌劑（包括：Tween80、Tween20、TritonX-00、NP-40、EmpigenBB、辛基葡糖苷、月桂酰基麥芽糖苷、Zwittergent3-08、Zwittergent3-0、Zwittergent3-2、Zwittergent3-4、Zwittergent3-6、CHAPS、脫氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨）。任選地，所公開的免疫原性組合產品還包含佐劑，所述佐劑還可與所公開的疫苗方案、方法、用途和試劑盒一起使用。在某些實施方案中，所述含有呼吸道病原體的多肽抗原的免疫原性組分與佐劑一起配制。在其它實施方案中，所述含有編碼呼吸道病原體抗原的核酸的免疫原性組分與佐劑一起配制。在實施方案中，兩種免疫原性組分均以含有佐劑的組合物的形式施用。通常，將所述佐劑與所述抗原組分混合（例如，在施用前或穩定地配制）。當所述組合免疫原性組合物將被施用給特定年齡組的個體時，選擇對于該個體或個體群體安全并有效的佐劑。因此，當配制用于施用給老年個體（如年齡超過65歲的個體）的組合免疫原性組合物時，選擇對于老年個體安全并有效的佐劑。類似地，當預期將所述組合免疫原性組合物施用給新生或嬰幼個體（如介于出生到兩歲之間的個體）時，選擇對于新生兒和嬰兒安全并有效的佐劑。在選擇對于新生兒和嬰兒安全并有效的佐劑的情況下，佐劑劑量可以被選擇為通常施用給成人個體的劑量的稀釋量（例如，分數劑量）。另外，當經由施用所述組合免疫原性組合物的施用途徑施用時，通常選擇佐劑以增強免疫應答的所需方面。例如，當配制用于鼻腔施用的組合免疫原性組合物時，蛋白體和protollin是優選的佐劑。相比之下，當所述組合免疫原性組合物被配制成用于肌內施用時，包含3D-MPL、角鯊烯(例如，QS21)、脂質體和/或油和水乳液中的一種或多種的佐劑是優選的。一種適合與本文公開的免疫原性組合產品一起使用的佐劑是無毒細菌脂多糖衍生物。合適的無毒脂質A衍生物的實例是單磷酰脂質A，或更具體地講，3-脫酰基單磷酰脂質A(3D–MPL)。3D-MPL以MPL的名稱由GlaxoSmithKlineBiologicalsN.A.銷售，并且在整個本文件中被稱為MPL或3D-MPL。參見，例如，美國專利No.4,436,727;4,877,611;4,866,034和4,912,094。3D-MPL主要促進具有IFN-γ(Th1)表型的CD4+T細胞應答。3D-MPL可以根據GB2220211A中所公開的方法生產。在化學上，其為具有3、4、5或6個酰化鏈的3-脫酰基單磷酰脂質A的混合物。在本公開的組合物中，可以使用小顆粒3D-MPL。小顆粒3D-MPL的粒徑使得其可以通過0.22μm過濾器無菌過濾。此類制備物在WO94/21292中有述。脂多糖，如3D-MPL，可以1至50μg/人類劑量的免疫原性組合物的量使用。此類3D-MPL可以如下水平使用：約25μg，例如20-30μg，適當地21-29μg或22至28μg或23至27μg或24至26μg，或25μg。在另一個實施方案中，所述人類劑量的免疫原性組合物包含如下水平的3D-MPL：約10μg，例如5至15μg，適當地6至14μg，例如7至13μg或8至12μg或9至11μg，或10μg。在另外的實施方案中，所述人類劑量的免疫原性組合物包含如下水平的3D-MPL：約5μg，例如1至9μg，或2至8μg或適當地3至7μg，或4μg，或5μg。在其它實施方案中，所述脂多糖可以是β(1-6)葡糖胺二糖，如美國專利No.6,005,099和歐洲專利No.0729473B1中所述。根據這些參考文獻的教導，本領域技術人員將容易地能夠生產各種脂多糖，如3D-MPL。盡管如此，這些參考文獻中的每一者均通過引用并入本文中。除了上述的免疫刺激劑（其在結構上類似于LPS或MPL或3D-MPL）之外，作為以上MPL結構的子部分的酰化單糖和二糖衍生物也是合適的佐劑。在其它實施方案中，所述佐劑是合成的脂質A衍生物，其中的一些被描述為TLR-4激動劑，并且包括但不限于：OM174(2-脫氧-6-o-[2-脫氧-2-[(R)-3-十二烷酰氧基四-癸酰基氨基]-4-o-膦酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]-2-[(R)-3-羥基十四烷酰基氨基]-α-D-吡喃葡萄糖基二氫磷酸酯)，(WO95/14026);OM294DP(3S,9R)–3--[(R)-十二烷酰氧基十四酰基氨基]-4-氧代-5-氮雜-9(R)-[(R)-3-羥基十四烷酰基氨基]癸-1,10-二醇,1,10-雙(磷酸二氫酯)(WO99/64301和WO00/0462);和OM197MP-AcDP(3S-,9R)-3-[(R)-十二烷酰氧基十四酰基氨基]-4-氧代-5-氮雜-9-[(R)-3-羥基十四烷酰基氨基]癸-1,10-二醇,1-磷酸二氫酯10-(6-氨基己酸)(WO01/46127)。可以使用的其它TLR4配體是烷基氨基葡糖苷磷酸酯（AGP），如在WO98/50399或美國專利No.6,303,347中公開的那些（還公開了AGP的制備方法），合適地RC527或RC529或AGP的藥學上可接受的鹽，如在美國專利No.6,764,840.中公開的。一些AGP是TLR4激動劑，而一些則是TLR4拮抗劑。這兩者均被認為可用作佐劑。能夠通過TLR-4引起信號應答的其它合適的TLR-4配體(Sabroe等人，JI2003第1630-5頁)是，例如，來自革蘭氏陰性菌的脂多糖及其衍生物或其片段，特別是LPS的無毒衍生物(如3D-MPL)。其它合適的TLR激動劑是：熱休克蛋白(HSP)10、60、65、70、75或90；表面活性蛋白A、透明質酸寡糖、硫酸乙酰肝素片段、纖粘蛋白片段、纖維蛋白原肽和b-防御素-2、以及胞壁酰二肽(MDP)。在一個實施方案中，所述TLR激動劑是HSP60、70或90。其它合適的TLR-4配體如WO2003/011223和WO2003/099195中所述，如在WO2003/011223的第4-5頁或WO2003/099195的第3-4頁上所公開的化合物I、化合物II和化合物III，并且特別是在WO2003/011223中公開的那些化合物，如ER803022、ER803058、ER803732、ER804053、ER804057、ER804058、ER804059、ER804442、ER804680和ER804764。例如，一種合適的TLR-4配體是ER804057。另外的TLR激動劑也可用作佐劑。術語“TLR激動劑”指代這樣的試劑，其能夠作為直接配體或間接地通過生成內源或外源配體而通過TLR信號通路引起信號應答。此類天然或合成的TLR激動劑可以被用作可選的或額外的佐劑。在Kaisho&Akira,BiochimicaetBiophysicaActa1589:1-13,2002中提供了有關TLR作為佐劑受體的作用的簡要綜述。這些潛在的佐劑包括但不限于針對TLR2、TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的激動劑。因此，在一個實施方案中，所述佐劑和組合免疫原性組合物還包含選自以下的佐劑：TLR-1激動劑、TLR-2激動劑、TLR-3激動劑、TLR-4激動劑、TLR-5激動劑、TLR-6激動劑、TLR-7激動劑、TLR-8激動劑、TLR-9激動劑或其組合。在本公開的一個實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-1引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-1引起信號應答的TLR激動劑選自：三酰化脂肽(LP)；可溶于苯酚的調控蛋白；結核分枝桿菌LP；S-(2,3-雙(棕櫚酰氧基)-(2-RS)-丙基)-N-棕櫚酰-(R)-Cys-(S)-Ser-(S)-Lys(4)-OH，三鹽酸(Pam3Cys)LP，其模仿細菌脂蛋白的乙酰化氨基末端；以及來自博氏疏螺旋體的OspALP。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-2引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-2引起信號應答的TLR激動劑是以下中的一種或多種：來自結核分枝桿菌、博氏疏螺旋體或梅毒螺旋體的脂蛋白、肽聚糖、細菌脂肽；來自包括金黃色葡萄球菌在內的物種的肽聚糖；脂磷壁酸、甘露糖醛酸、奈瑟氏菌屬孔蛋白、細菌菌毛、耶爾森氏菌毒力因子、CMV病毒粒子、麻疹血凝素和來自酵母的酵母多糖。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-3引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-3引起信號應答的TLR激動劑是雙鏈RNA(dsRNA)，或聚肌胞(PolyIC)（一種與病毒感染相關的分子核酸模式）。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-5引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-5引起信號應答的TLR激動劑是細菌鞭毛蛋白。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-6引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-6引起信號應答的TLR激動劑是分枝桿菌脂蛋白、二酰化LP和可溶于苯酚的調控蛋白。另外的TLR6激動劑在WO2003/043572中有述。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-7引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-7引起信號應答的TLR激動劑是單鏈RNA(ssRNA)、洛索立賓、在位置N7和C8的鳥苷類似物、或咪唑并喹啉化合物或其衍生物。在一個實施方案中，所述TLR激動劑是咪喹莫特。另外的TLR7激動劑在WO2002/085905中有述。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-8引起信號應答。適當地，所述能夠通過TLR-8引起信號應答的TLR激動劑是單鏈RNA(ssRNA)、具有抗病毒活性的咪唑并喹啉分子，例如雷西莫特(R848)；雷西莫特還能夠被TLR-7識別。可以使用的其它TLR-8激動劑包括在WO2004/071459中描述的那些。在可供選擇的實施方案中，使用了TLR激動劑，其能夠通過TLR-9引起信號應答。在一個實施方案中，所述能夠通過TLR-9引起信號應答的TLR激動劑是HSP90。作為另外一種選擇，所述能夠通過TLR-9引起信號應答的TLR激動劑是細菌或病毒DNA、含有未甲基化CpG核苷酸（尤其是被稱為CpG基序的序列上下文）的DNA。含有CpG的寡核苷酸主要誘導Th1應答。此類寡核苷酸是眾所周知的并且在例如WO96/02555、WO99/33488以及美國專利No.6,008,200和5,856,462中有述。適當地，CpG核苷酸是CpG寡核苷酸。適用于所述組合免疫原性組合物中的寡核苷酸是含有CpG的寡核苷酸，任選地含有由至少三個、適當地至少六個或更多個核苷酸分隔開的兩個或更多個二核苷酸CpG基序。CpG基序是胞嘧啶核苷酸后接鳥嘌呤核苷酸。所述CpG寡核苷酸通常是脫氧核苷酸。在特定的實施方案中，所述寡核苷酸的核苷酸間是二硫代磷酸酯或適當地硫代磷酸酯鍵，但是磷酸二酯和其它核苷酸間鍵也是可能的。具有混合的核苷酸間鍵合的寡核苷酸也是可能的。用于生產硫代磷酸酯寡核苷酸或二硫代磷酸酯的方法在美國專利No.5,666,153、5,278,302以及WO95/26204中有述。可以用在所公開的免疫原性組合產品中并且與所公開的免疫方案、方法、用途和試劑盒一起使用（例如，其單獨或與3D-MPL或本文所述的另一種佐劑組合使用）的其它佐劑是皂草苷，如QS21。皂草苷在Lacaille-Dubois,M和WagnerH.(1996.Areviewofthebiologicalandpharmacologicalactivitiesofsaponins.Phytomedicinevol2第363-386頁)中有教導。皂草苷是類固醇或三萜烯糖苷，其在植物界和海洋動物界中廣泛分布。皂草苷以在水中形成膠體溶液（其在搖動時起泡）并且沉淀膽固醇而著稱。當皂草苷靠近細胞膜時，其在膜中生成孔狀結構而引起膜破裂。紅細胞溶血是此現象的實例，其是某些但非所有皂草苷的特性。已知皂草苷在全身施用的疫苗中用作佐劑。本領域已經充分研究了單獨的皂草苷的佐劑和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner，同上)。例如，QuilA（來源于南美洲樹木皂樹(QuillajaSaponariaMolina)樹皮）及其級分在US5,057,540和“Saponinsasvaccineadjuvants”,Kensil,C.R.,CritRevTherDrugCarrierSyst,1996,12(1-2):1-55;以及EP0362279B1中有述。包含QuilA的級分的名為免疫刺激復合物(ISCOMS)的粒狀結構是溶血性的，并且已經用于疫苗生產中(Morein,B.,EP0109942B1;WO96/11711;WO96/33739)。溶血性皂草苷QS21和QS17(HPLC純化的QuilA級分)已經被描述為強力的全身性佐劑，并且其生產方法在美國專利No.5,057,540以及EP0362279B1中被公開，所述文獻通過引用并入本文中。已經被用于全身疫苗接種研究的其它皂草苷包括來源于其它植物物種如滿天星和肥皂草的那些(Bomford等人，Vaccine,10(9):572-577,1992)。QS21是Hplc純化的來源于皂樹樹皮的無毒級分。用于生產QS21的方法在美國專利No.5,057,540中被公開。含有QS21的非反應原性佐劑制劑在WO96/33739中有述。上述參考文獻以引用方式并入本文中。所述免疫活性皂草苷，如QS21，可以1至50μg/人類劑量的組合免疫原性組合物的量使用。有利地，QS21以如下水平使用：約25μg，例如20-30μg，適當地21-29μg或22-28μg或23-27μg或24-26μg，或25μg。在另一個實施方案中，所述人類劑量的組合免疫原性組合物包含如下水平的QS21：約10μg，例如5至15μg，適當地6-14μg，例如7-13μg或8-12μg或9-11μg，或10μg。在另外的實施方案中，所述人類劑量的組合免疫原性組合物包含如下水平的QS21：約5μg，例如1-9μg，或2-8μg或適當地3-7μg或4-6μg，或5μg。已經證明，當與抗原一起配制時，此類包含QS21和膽固醇的制劑是成功的佐劑。因此，例如，所公開的免疫原性組合產品的多肽可以與包含QS21和膽固醇的組合的佐劑一起提供。任選地，所述佐劑可以作為另外一種選擇或除此之外包含礦物鹽如鋁鹽（例如，氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁鉀、羥基磷酸硫酸鋁）或鈣鹽（例如，氫氧化鈣、氟化鈣、磷酸鈣）。適于所述佐劑制劑的其它鹽類包括硝酸鈰（III）六水合物和硫酸鋅七水合物。例如，含有3D-MPL和鋁鹽（例如，氫氧化鋁或“明礬”）組合的佐劑適用于配制含有如本文所述的呼吸道病原體的抗原的組合免疫原性組合產品。作為另外一種選擇，此類礦物鹽佐劑可不與非礦物鹽佐劑組合使用，即，所述組合免疫原性組合物可僅佐以一種或不止一種礦物鹽佐劑如氫氧化鋁、磷酸鋁和磷酸鈣等。適用于本文公開的免疫原性組合產品的另一類佐劑包括基于OMP的免疫刺激組合物。基于OMP的免疫刺激組合物特別適合作為粘膜佐劑，例如，用于鼻內施用。基于OMP的免疫刺激組合物是一類外膜蛋白（OMP，包括一些孔蛋白）的制備物，其來自革蘭氏陰性菌，如但不限于奈瑟氏菌屬物種(參見，例如，Lowell等人，J.Exp.Med.167:658,1988;Lowell等人，Science240:800,1988;Lynch等人，Biophys.J.45:104,1984;Lowell,in"NewGenerationVaccines"第2版，MarcelDekker,Inc.,NewYork,Basil,HongKong,第193頁,1997;美國專利No.5,726,292;美國專利No.4,707,543)，其可用作載體或可用在免疫原（如細菌或病毒抗原）的組合物中。一些基于OMP的免疫刺激組合物可以被稱為“蛋白體”，其為疏水性的并且對于人類使用是安全的。蛋白體能夠自動裝配到約20nm至約800nm的囊泡或囊泡樣OMP簇中，并且能夠與蛋白質抗原(Ags)（特別是具有疏水部分的抗原）非共價地整合、協調、關聯（例如，靜電地或疏水地）或以其它方式協作。導致外膜蛋白組分呈囊泡或囊泡樣形式（包括多分子膜結構或一種或多種OMP的熔融球狀OMP組合物）的任何制備方法均包括在蛋白體的定義中。蛋白體可以例如，如本領域所述進行制備(參見，例如，美國專利No.5,726,292或美國專利No.5,985,284)。蛋白體還可以含有來源于用于生產OMP孔蛋白的細菌(例如，奈瑟氏菌屬物種)的內源脂多糖或脂寡糖(分別為LPS或LOS)，其通常將小于總OMP制備物的2%。蛋白體主要由化學提取的來自腦膜炎奈瑟氏菌的外膜蛋白(OMP)構成（大部分為孔蛋白A和B以及4類OMP），其通過洗滌劑而保持在溶液中(LowellGH.ProteosomesforImprovedNasal,Oral,orInjectableVaccines.于:LevineMM,WoodrowGC,KaperJB,CobonGS,編撰,NewGenerationVaccines.NewYork:MarcelDekker,Inc.1997;193-206)。蛋白體可以與多種抗原如來自病毒來源的純化的或重組的蛋白質，包括本文公開的RSVF蛋白多肽，例如，通過滲濾或傳統滲析工藝一起配制，或與純化的百日咳桿菌抗原蛋白一起配制。逐步移除洗滌劑使得能夠形成直徑大約100-200nm的粒狀疏水復合物(LowellGH.ProteosomesforImprovedNasal,Oral,orInjectableVaccines.于:LevineMM,WoodrowGC,KaperJB,CobonGS,編撰,NewGenerationVaccines.NewYork:MarcelDekker,Inc.1997;193-206)。“蛋白體：LPS或Protollin”，如本文所用，指代例如通過外源添加至少一種脂多糖而混合的蛋白體制備物，以提供OMP-LPS組合物(其可以起到免疫刺激組合物的作用)。因此，所述OMP-LPS組合物可以由Protollin基本組分中的兩種構成，其包括：(1)蛋白體的外膜蛋白制備物(例如，Projuvant)，其由革蘭氏陰性菌如腦膜炎奈瑟氏菌制備而成，和(2)一種或多種脂糖的制備物。脂寡糖可以是內源性的（例如，天然包含在OMP蛋白體制備物中），可以與OMP制備物混合或組合的來自外源制備的脂寡糖（例如，由不同于所述OMP制備物的培養物或微生物制備），或可以是其組合。此類外源添加的LPS可以來自與生產所述OMP制備物的細菌相同的革蘭氏陰性菌或來自不同的革蘭氏陰性菌。Protollin還應當理解為任選地包括脂質、糖脂、糖蛋白、小分子等及其組合。所述Protollin可以例如，如美國專利申請公布No.2003/0044425中所述進行制備。不同佐劑的組合，如本文以上所述的那些，也可以用于所公開的免疫原性組合產品中（例如，與單獨組分或其混合物）。例如，正如已經指出的，QS21可以與3D-MPL一起配制。QS21:3D-MPL的比率通常將在1:10至10:1的量級；如1:5至5:1，并且通常基本上為1:1。通常，該比率的范圍為2.5:1至1:1的3D-MPL:QS21。另一種組合佐劑制劑包含3D-MPL和鋁鹽，如氫氧化鋁。在一些情況下，所述佐劑制劑包含礦物鹽，如鋁鹽（明礬），例如磷酸鋁或氫氧化鋁，或磷酸鈣。當例如在與3D-MPL的組合中存在明礬時，其量通常在約100μg至1mg，如約100μg，或約200μg至約750μg，如約500μg/劑量。在一些實施方案中，所述佐劑包含油和水乳液，例如，水包油乳液。水包油乳液的一個實例是在水性載體中包含：可代謝油如角鯊烯、母育酚如生育酚（例如，α-生育酚）和表面活性劑如脫水山梨醇三油酸酯(Span85?)或聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(Tween80?)。在某些實施方案中，所述水包油乳液不含任何額外的免疫刺激物（具體地講，其不含無毒脂質A衍生物如3D-MPL，或皂草苷如QS21）。所述水性載體可以是例如磷酸鹽緩沖鹽水。另外，所述水包油乳液可以含有span85和/或卵磷脂和/或三辛酸甘油酯。在另一個實施方案中，所述組合免疫原性組合物包含水包油乳液和任選地一種或多種另外的免疫刺激物，其中所述水包油乳液包含0.5-10mg可代謝油(適當地為角鯊烯)、0.5-11mg母育酚(適當地為生育酚，如α-生育酚)和0.4-4mg乳化劑。在一個特定的實施方案中，所述佐劑制劑包含以乳液（如水包油乳液）形式制備的3D-MPL。在一些情況下，所述乳液具有小于0.2μm直徑的小粒徑，如WO94/21292中所公開的。例如，3D-MPL的顆粒可以小到足以通過0.22微米的膜進行無菌過濾（如歐洲專利號0689454中所述）。作為另外一種選擇，可以將所述3D-MPL制備在脂質體制劑中。任選地，所述含有3D-MPL（或其衍生物）的佐劑還包含另外的免疫刺激組分。所述佐劑被選擇為對于所述免疫原性組合物所施用的群體是安全并有效的。對于成人和老年人群體，所述制劑通常含有相比通常見于嬰兒制劑中的更多的佐劑組分。在使用水包油乳液的具體制劑中，此類乳液可以包含額外的組分，例如，如膽固醇、角鯊烯、α-生育酚和/或洗滌劑，如tween80或span85。在示例性制劑中，此類組分可以如下的量提供：1-50mg膽固醇、2至10%角鯊烯、2至10%α-生育酚和0.3至3%tween80。通常，角鯊烯:α-生育酚的比率等于或小于1，因為這提供了更穩定的乳液。在一些情況下，所述制劑還可以含有穩定劑。當含有RSVF蛋白多肽抗原的組合免疫原性組合物被配制成向嬰兒施用時，佐劑的劑量被確定為對于嬰兒個體是有效并相對非反應原性的。通常，嬰兒制劑中佐劑的劑量低于設計為施用給成人（例如，年齡在65歲或以上的成人）的制劑中所用的劑量（例如，所述劑量可能是施用給成人的制劑中所提供劑量的分數）。例如，3D-MPL的量通常范圍為1μg-200μg，如10-100μg，或10μg-50μg/劑量。嬰兒劑量通常在此范圍的下端，例如，約1μg至約50μg，如約2μg，或約5μg，或約10μg，至約25μg，或至約50μg。通常，當QS21被用于制劑中時，其范圍是類似的（并且根據上述比率）。就油和水乳液（例如，水包油乳液）而言，提供給兒童或嬰兒的佐劑的劑量可以是施用給成人個體的劑量的分數。如本文公開的或用于所公開疫苗接種方案、方法、用途和試劑盒的免疫原性組合產品通常含有免疫有效量（或其分劑量）的所述免疫原性組分（和/或多肽或核酸）并且可以通過常規技術制備。“免疫有效量”是組合物（通常，免疫原性組合物）的數量，用于誘發個體對該組合物或對該組合物中的抗原的免疫應答。通常，所需結果是產生抗原（例如，病原體）特異性免疫應答，其能夠或有助于保護個體對抗病原體。然而，為了獲得針對病原體的保護性免疫應答，可能需要多次施用所述免疫原性組合物。因此，在本公開的上下文中，術語免疫有效量涵蓋了分劑量，其與在先或后續施用組合以有助于獲得保護性免疫應答。制備免疫原性組合物（包括施用給人類個體的那些）在以下文獻中有一般性描述：PharmaceuticalBiotechnology,Vol.61VaccineDesign-thesubunitandadjuvantapproach,由Powell和Newman編著,PlenurnPress,1995；NewTrendsandDevelopmentsinVaccines,由Voller等人編著，UniversityParkPress,Baltimore,Maryland,U.S.A.1978。封裝在脂質體內例如由Fullerton在美國專利4,235,877中有述。將蛋白質結合至大分子例如由Likhite在美國專利4,372,945以及由Armor等人在美國專利4,474,757中公開。通常，在所述免疫原性組合物的各個劑量中抗原（例如蛋白質）的量或編碼抗原的核酸的量被選擇為這樣的量，其在典型個體中誘導保護性（或免疫保護性）應答而沒有顯著的不良副作用。保護性在此上下文中不一定意指針對感染的完全保護性；其意指針對癥狀或疾病（尤其是與病原體相關的嚴重疾病）的保護。抗原的量可以根據所采用的特異性抗原（或核酸）而變化。因此，所述抗原或編碼抗原的核酸以免疫有效劑量施用。本領域技術人員應當理解，所述免疫有效量可以基于如重量、年齡以及免疫和/或生理狀態等參數而在個體間有所不同，使得例如嬰兒劑量通常低于成人劑量，并且人類劑量可以不同于施用給實驗（非人動物）個體的劑量。例如，人類劑量通常是施用給小鼠的劑量的10-20倍。通常，相對于所述多肽抗原組分，預計每個人類劑量將包含1-1000μg的每種蛋白質或抗原，如約1μg至約100μg，例如，約1μg至約50μg，如約1μg、約2μg、約5μg、約10μg、約15μg、約20μg、約25μg、約30μg、約40μg、或約50μg。作為另外一種選擇，所述多肽組分可以如下量施用：50μg至250μg，如約50μg、75μg、100μg、120μg、150μg、175μg、200μg或250μg。這些量將理解為說明性的，并且以上范圍內的整數或區間是可接受的。相對于所述核酸組分，類似地計算其量以向個體提供免疫有效量（在一次或多次施用中）。就核酸而言，此類量可能在1ng至100mg。例如，合適量的DNA可以是1μg至100mg。就RNA而言，合適的量可以是1ng至100μg。所述具體核酸（例如，載體）的適當量可以由本領域技術人員容易地確定。核酸組分的示例性有效量可以是：1ng至100μg，如1ng至1μg(例如，100ng-1μg)，或1μg至100μg，如10ng、50ng、100ng、150ng、200ng、250ng、500ng、750ng或1μg(或所涵蓋的任何整數或包含這些量的區間)。核酸的有效量還可以包括：1μg至500μg，如1μg至200μg，如10至100μg，例如1μg、2μg、5μg、10μg、20μg、50μg、75μg、100μg、150μg或200μg，或1至200μg之間的整數或區間或分數。作為另外一種選擇，核酸的示例性有效量可以是：100μg至1mg，如100μg至500μg，例如，100μg、150μg、200μg、250μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg或1mg，或1μg至1mg之間的任何整數或區間。就含有所述核酸組分的重組病毒載體（例如，腺病毒）而言，其通常以1x105至1x1015個病毒顆粒的劑量施用，如1x108至1x1012(例如，1x108、5x108、1x109、5x109、1x1010、2.5x1010、5x1010、1x1011、5x1011、1x1012個顆粒)。作為另外一種選擇，病毒載體可以通常1x105至1x1010個空斑形成單位(PFU)的劑量施用，如1x105PFU、5x105PFU、1x106PFU、5x106PFU、1x107PFU、5x107PFU、1x108PFU、5x108PFU、1x109PFU、5x109PFU或1x1010PFU。如上，可以施用指定范圍內的任何整數或區間。通常，人類劑量將是0.5ml至2ml的體積。因此，用于本文所述的用途和方法的組合物可以被配制成例如0.5、1.0、1.5或2.0ml體積的人類劑量/單獨的或合并的免疫原性組分。根據個體群體而選擇在免疫原性組合物中所用的量。對于具體組合物的最佳量可以通過涉及觀察個體中的抗體滴度和其它應答的標準研究來確定。在初次疫苗接種后，個體可以在約4-12周后接受第二次施用（例如，加強）。例如，當向嬰兒個體施用免疫原性組合物時，初次及后續接種的施用可以與在此期間施用的其它疫苗重合。另外的配制細節可見于WO2010/149745，其通過引用并入本文中，用于提供有關配制包含RSVF蛋白抗原（如PreF類似物）的免疫原性組合物的額外細節。本文所述的免疫實施方案經由合適的施用途徑進行，如胃腸外方法，包括肌內、透皮、皮內或皮膚施用。例如，所述免疫可以在皮膚上進行，其意味著將抗原引入到皮膚的真皮和/或表皮中（例如，皮內）。在某些優選的實施方案中，將所述免疫原性組合產品的兩種免疫原性組分共定位施用在個體上相同或大致相同的部位，例如，相同側面或肢體。在胃腸外施用的情況下，共定位是指靠近身體上相同（或大致相同）的部位，如相同部位（例如，通過相同裝置），或約10cm以內，或更常見地約5cm以內，如約2cm以內或1cm以內。在一些情況下，所述兩種或更多種組分被合并（共配制）在單一組合物中用于施用到相同部位。因此，應當理解，在一個優選的實施方案中，將所述免疫原性組分施用到兩側對稱的個體（如人類）可以是施用到身體的同側面。也就是說，含有所述多肽抗原的免疫原性組分與含有所述編碼抗原的核酸的免疫原性組分同側施用。任選地，所述兩種組分在制造期間或施用前被共配制在單個免疫原性組合物中。相比其它途徑（如肌內）遞送，經由皮膚途徑（包括皮內途徑）遞送可以允許更低劑量的抗原。因此，還提供了用于皮膚或皮內遞送的免疫原性組合產品，其包含低劑量的呼吸道病原體的抗原，例如，低于正常肌內劑量，例如，如上提供的蛋白質或核酸組分的正常肌內劑量的50%或更低。任選地，用于皮膚或皮內遞送的免疫原性組合物還包含佐劑，例如金屬鹽或QS21或3D-MPL或其組合。用于皮膚施用的裝置包括短針裝置(其具有長度為約1至約2mm的針)，如在US4,886,499、US5,190,521、US5,328,483、US5,527,288、US4,270,537、US5,015,235、US5,141,496、US5,417,662和EP1092444中所述的那些。皮膚疫苗還可通過限制針在皮膚中有效穿透長度的裝置來施用，如在WO99/34850中所述的那些（通過引用并入本文中）及其功能等同物。噴射注射裝置也是合適的，其經由液體噴射注射器或經由刺穿角質層并產生到達真皮的射流的針而將液體疫苗遞送至真皮。噴射注射裝置在例如以下文獻中有述：US5,480,381、US5,599,302、US5,334,144、US5,993,412、US5,649,912、US5,569,189、US5,704,911、US5,383,851、US5,893,397、US5,466,220、US5,339,163、US5,312,335、US5,503,627、US5,064,413、US5,520,639、US4,596,556、US54,790,824、US4,941,880、US4,940,460、WO97/37705和WO97/13537。用于皮膚施用的裝置還包括彈道粉末/顆粒遞送裝置，其使用壓縮空氣加速粉末形式的疫苗通過皮膚外層到達真皮。另外，常規注射器可用于皮膚施用的經典曼托法（mantoux）中。然而，使用常規注射器要求高度熟練的操作人員，因而能夠準確遞送而無需高度熟練的使用者的裝置是優選的。用于皮膚施用的另外的裝置包括貼劑，其包含如本文所述的免疫原性組合物。皮膚遞送貼劑將通常包括背板，其包含固體基質（例如閉合或非閉合的外科手術敷料）。此類貼劑經由刺穿角質層的微突起而將免疫原性組合物遞送到真皮或表皮。微突起通常為10Dm至2mm，例如20Dm至500Dm、30Dm至1mm、100至200、200至300、300至400、400至500、500至600、600至700、700、800、800至900、100Dm至400Dm，特別是約200Dm至300Dm或約150Dm至250Dm。皮膚遞送貼劑通常包括多個微突起，例如2至5000根微針，例如1000至2000根微針。所述微突起可以是適用于刺穿角質層、表皮和/或真皮的任何形狀。微突起例如可以如WO2000/074765和WO2000/074766中所公開的那樣成形。所述微突起可具有縱橫比為至少3:1(高度相對于基座直徑)、至少約2:1、或至少約1:1。所述微突起的一種合適形狀是具有多邊形（例如六邊形或菱形）底部的錐形。其它可能的微突起形狀在例如美國已公布專利申請2004/0087992中示出。在具體的實施方案中，微突起的形狀朝著基座方向變厚。陣列中微突起的數量通常為至少約100、至少約500、至少約1000、至少約1400、至少約1600、或至少約2000。微突起的面積密度，考慮到其小尺寸，可能不會特別高，但例如微突起的數量/cm2可能為至少約50、至少約250、至少約500、至少約750、至少約1000、或至少約1500。在本公開的一個實施方案中，所述組合免疫原性組合物在貼劑被放置到宿主皮膚上的5小時內被遞送到個體中，例如，在4小時、3小時、2小時、1小時或30分鐘內。在具體的實施方案中，所述組合免疫原性組合物在貼劑被放置到皮膚上的20分鐘內被遞送，例如在30秒、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19分鐘內。所述微突起可以由技術人員已知的任何合適的材料制成。在具體的實施方案中，所述微突起的至少一部分是可生物降解的，特別是所述微突起的尖端或所述微突起的最外層。在具體的實施方案中，基本上整個所述微突起都是可生物降解的。術語“可生物降解的”，如本文所用，意指在預期的體內使用條件下（例如插入皮膚中）可降解，而與生物降解的機制無關。示例性生物降解機制包括崩解、分散、溶解、侵蝕、水解和酶降解。包含抗原的微突起的實例在WO2008/130587和WO2009/048607中被公開。可代謝微針的生產方法在WO2008/130587和WO2010/124255中被公開。用抗原涂覆微突起可以通過技術人員已知的任何方法進行，例如通過WO06/055844、WO06/055799中所公開的方法。在本文所述的方法和用途中，適用于皮膚遞送（包括皮內遞送）的遞送裝置，包括：BDSoluviaTM裝置（其為用于皮內施用的微針裝置）、CoriumMicroCorTM貼劑遞送系統、佐治亞理工（GeorgiaTech）微針疫苗貼劑、Nanopass微針遞送裝置和DebiotechNanojectTM微針裝置。還提供了皮膚或皮內遞送裝置，其含有如本文所述的組合免疫原性組分或組合（任選地與佐劑一起配制）。所述免疫原性組合產品可以經由包括如鼻內或口腔途徑在內的粘膜途徑施用，使抗原直接與上呼吸道粘膜接觸。因此，設想了將所述免疫原性組合產品及其組分用于醫藥，并且特別是用于預防或治療人類個體中的呼吸道病原體（如RSV）感染或與之相關的疾病。在此類方法和用途的具體實施方案中，所述個體是人類個體。所述人類個體可以選自：新生兒；嬰兒；兒童；青少年；成人；和老年人。所述個體可以是懷有胎兒的孕婦。或者，所述個體可以不是孕婦。當所述個體是新生兒時，所述組合免疫原性組合物的施用可能在出生后1天之內、或1周之內、或1個月之內進行。結合所公開的用于誘發針對呼吸道病原體的免疫應答的方法（包括向個體施用免疫有效量的本文公開的免疫原性組合產品），所誘發的針對所述呼吸道病原體（例如，RSV）的免疫應答有利地包括保護性免疫應答，其減少或預防所述病原體（例如，RSV）感染的發生率或降低其嚴重程度，并且/或者減少或預防所述病原體感染后的病理反應的發生率或降低其嚴重程度。所述誘發的免疫應答可以是加強應答。優選地，相比未疫苗接種的個體，此類施用減少此類群組中的癥狀或疾病（例如，肺炎和/或呼吸窘迫與衰竭，或由于嚴重的呼吸道疾病而需要住院治療）至少約50%、或至少約60%、或60至70%、或至少約70%、或至少約80%、或至少約90%。是否視為由于嚴重的LRTI而需要住院治療，或具體的LRTI病例是否住院治療，可能在各個國家間有差異，因而根據本領域熟知的明確的臨床癥狀判定嚴重的LRTI可能是相比需要住院治療而言更好的量度。當將所述免疫原性組合產品施用給嬰兒時，所述組合物可以施用一次或多次。首次施用可以是在出生時或鄰近的時間（例如，在出生當天或翌日），或在出生后1周內或出生后約2周內。作為另外一種選擇，首次施用可以是在出生后約4周、出生后約6周、出生后約2個月、出生后約3個月、出生后約4個月，或更晚，如出生后約6個月、出生后約9個月、或出生后約12個月。如上所述，用于所公開的疫苗接種方案、方法和用途中的組合的免疫原性組分可以是如本文所述共配制的組合物，或可以是單獨提供各組分的不同的組合物。此類“單獨的”組合物可以試劑盒的形式提供。在此類試劑盒中，（如上所公開的）第一免疫原性組分的多肽抗原和/或第二免疫原性組分的編碼抗原的核酸可以被裝在（合并的或共配制的）一個容器或不止一個容器中，如在至少一個（或一個或多個）預填充注射器中。此類注射器可以是多腔（例如，雙腔）注射器。就多腔注射器而言，在實施方案中，所述第一免疫原性組分被裝在一個腔室內，而所述第二免疫原性組分被裝在第二個腔室內。在施用前，可以混合所述兩種組分并隨后將其引入到個體中的相同部位（例如，通過單根針）。在另一個實施方案中，所述試劑盒包括替代的遞送裝置，如本文所公開的貼劑。提供了下列實施例以說明某些具體特征和/或實施方案。這些實施例不應當理解為將本發明限制于所述具體特征或實施方案。實施例實施例1：用表達RSVF、N和M2.1蛋白的腺病毒載體與佐劑化重組F蛋白聯合免疫CD1小鼠相比各單獨疫苗方案誘導更廣泛的免疫應答。在小鼠中評價了兩個劑量的聯合的PanAd3RSV(含有編碼SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的核酸插入序列的PanAd3載體)與重組F(rF)蛋白/AS04的免疫原性。用下列制劑以4周的間隔對CD1小鼠的組(n=10/組)進行兩次肌內免疫接種(第一次施用/第二次施用)。在此實施例中，所述重組F蛋白被選擇為構象上受限的F蛋白類似物，其經工程改造而被穩定在融合前構象（在下文的實施例中稱為rF或PreF–這是SEQIDNO:2中所示的抗原）。在第5組中，通過在相同部位間隔大約10min進行2次注射而共施用腺病毒和重組蛋白。第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIM108vpPanAd3RSVIM108vp2PanAd3RSVIN108vpMVAIM107pfu3PanAd3RSVIM108vprF蛋白0.5ug-AS044rF蛋白0.5ug-AS04rF蛋白0.5ug-AS045PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ug-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ug-AS04在第49天（第二次免疫接種后20天），單獨采集所有小鼠的血清并使用空斑減數測定法測試RSV中和抗體的存在。簡而言之，將各血清的系列稀釋液與RSVA（Long毒株）在37oC預溫育。溫育后，將該病毒-血清混合物轉移到用Vero細胞預先接種的平板上。在每個平板上，一列細胞僅與病毒溫育（100%的感染性），而2個孔不接收病毒或血清（細胞對照）。將平板在33oC溫育2小時，移除培養液并向所有的孔中加入含有0.5%CMC(低粘度羧甲基纖維素)的RSV培養液。將平板在33oC溫育3天，然后進行免疫熒光染色。對于染色，用PBS洗滌細胞單層并用1%多聚甲醛進行固定。使用商用山羊抗-RSV抗血清，接著是綴合至FITC的兔抗山羊IgG，來檢測RSV陽性細胞。使用自動成像系統計算染色空斑數/孔。各血清的中和抗體滴度被測定為造成空斑數減少60%（相比不含血清的對照）的血清稀釋度的倒數（ED60）。結果示于圖1中。用于比較不同組的統計方法是在log10值上的方差分析(ANOVA1)。通過在第二次免疫接種后3周測量產生IFNγ的脾細胞來評價細胞應答。通過標準ELISpot測定法測定脾細胞的抗原特異性IFNγ產量。簡而言之，用抗小鼠IFNγ抗體涂布多篩96孔過濾平板并在+4℃溫育過夜。第二天，制備淋巴細胞并在存在跨越對應抗原的肽的情況下在Ag涂布的孔中于37℃溫育16小時。過夜溫育后，移除細胞并加入生物素化的抗小鼠IFNγ并在室溫下溫育3小時。對于顯色，加入堿性磷酸酶綴合的鏈霉親和素，然后加入1-StepNBT-BCIP顯色溶液。通過自動讀板機對平板進行采集和分析。ELISpot數據表示為IFNγ斑點形成細胞(SFC)/百萬脾細胞。結果示于圖2中。圖1中所示的結果表明，共施用PanAd3RSV和佐劑化重組F蛋白(共施用組)誘導了最高水平的中和抗體。另外，相比兩個劑量的佐劑化重組F蛋白，共施用組誘導了高得多的細胞應答（圖2）。當比較共施用組與兩個劑量的PanAd3RSV時觀察到了相反情況：共施用組誘導了略高的T細胞應答但顯著更高的中和抗體滴度。雖然引發PanAd3RSV/加強MVA組誘導了高細胞應答（圖2），但該組中的中和抗體滴度顯著低于在共施用組中觀察到的那些（圖1)。綜上所述，在所有測試的疫苗方案中，共施用PanAd3RSV和佐劑化重組F蛋白導致最高的合并的體液和細胞應答。實施例2：用表達RSVF、N和M2.1蛋白的腺病毒載體與佐劑化重組F蛋白聯合免疫Balb/c小鼠誘導高水平的中和抗體和CD8T細胞應答。第二次免疫接種后14天，通過在免疫接種小鼠（近交Balb/c）血液中測量中和抗體應答以及識別M2.1特異性CD8T細胞，評價聯合的PanAd3RSV+rF/AS04的免疫原性。用下列制劑以3周的間隔對Balb/c小鼠的組(n=11/組)進行兩次肌內免疫接種(第一次/第二次)。組第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIM108vpPanAd3RSVIM108vp2PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ugPanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ug(共配制的)3PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5μg-明礬PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5μg-明礬(共定位的)4PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5μg-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5μg-AS040.5ug(共定位的)5PBSPBS如實施例1中所述評價了中和抗體應答，結果示于圖3中。兩個劑量的由PanAd3RSV和用明礬或AS04佐劑化的重組F蛋白(PreF)構成的聯合疫苗誘導了顯著高于2個劑量的PanAd3RSV的滴度。通過用攜帶M2.182-90表位的經熒光標簽的五聚體主要組織相容性復合物(MHC)I類識別全血中的M2.1特異性細胞來測量CD8T細胞應答。為此，從每只小鼠收集血液，裂解紅細胞，并用熒光活力標志物、CD3、CD8和B-220抗體以及MHC五聚物對細胞進行染色。經染色的細胞通過流式細胞術（LSR,BecktonDickinson）分析并測定五聚物陽性CD8T細胞的比例（圖4）。用兩個劑量的PanAd3RSV或用任何共施用方案進行疫苗接種誘導了強力的M2.1特異性CD8應答。當與中和抗體數據結合時，CD8T細胞數據表明，由共施用PanAd3RSV和用明礬或AS04佐劑化的rF組成的疫苗方案合并了強力的體液和細胞免疫應答。實施例3：用表達RSVF、N和M2.1蛋白的腺病毒載體與佐劑化重組F蛋白同時免疫Balb/c小鼠誘導強力體液免疫應答并保護免受RSV攻毒。在Balb/c小鼠中評價了兩個劑量的共施用的PanAd3RSV+RSV-rF/AS04的免疫原性。用下列制劑以3周的間隔對Balb/c小鼠的組(n=13/組)進行兩次肌內免疫接種：組第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIN108vpMVAIM107pfu2PanAd3RSVIM108vpMVAIM107pfu3PanAd3RSVIN108vprF蛋白2μg-AS044PanAd3RSVIM108vprF蛋白2μg-AS045PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2μg-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2μg-AS046rF蛋白2μg-AS04rF蛋白2μg-AS047活的RSV8.3x1057pfu無疫苗8FI-RSV1/150FI-RSV1/1509PBSPBS在第5組中，通過在相同部位間隔大約10分鐘進行2次注射而共施用腺病毒和重組蛋白。在第二次免疫接種后14天（研究的第35天）采集血清，在此時用2.9x106pfu活的RSVALong對動物進行鼻內攻毒。在攻毒后4天收集5只動物的肺，用于評價肺部病毒載量。在第二次免疫接種后14天，如實施例1中所述評價了中和抗體應答。如同在CD1小鼠中觀察到的，在Balb/c中，共施用PanAd3RSV和佐劑化的F(PreF)蛋白導致RSV中和抗體的水平顯著高于所有其它測試組，值得注意的是，兩個劑量的佐劑化的F蛋白或順序施用PanAd3RSV與MVA的組合或PanAd3RSV與重組蛋白的組合(圖5)。為了測量這些示例性疫苗的功效，在RSV攻毒后4天收集肺部并單獨稱重以及均質化。將各個肺部均質物的系列稀釋液（各8個重復）與Vero細胞一起溫育，并在接種后6天，通過免疫熒光識別含有空斑的孔。使用Spearman-K?rber法測定病毒滴度用于TCID50計算并表示為每克的肺。病毒復制在所有接種疫苗的動物的肺部均受到抑制，表明所有測試的疫苗方案在此模型中均是保護性的（圖6)。實施例4：用表達RSV蛋白的腺病毒載體與佐劑化重組F(PreF)蛋白同時免疫Balb/c小鼠在RSV攻毒后在肺部T細胞中誘導Th1表型并且不會誘導肺部嗜酸性粒細胞增多或粘液產生。在Balb/c小鼠中評價了用包括腺病毒載體RSV候選和佐劑化蛋白的方案疫苗接種對攻毒后肺部CD4T細胞的Th1/Th2應答、肺部嗜酸性粒細胞增多以及粘液產生的影響。使用了FI-RSV作為增強病理的陽性對照。用下列制劑以3周的間隔對Balb/c小鼠的組(n=12或13/組)進行兩次肌內免疫接種：組第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIN108vpMVAIM107pfu2PanAd3RSVIM108vpMVAIM107pfu3PanAd3RSVIN108vprF蛋白2μg-AS044PanAd3RSVIM108vprF蛋白2μg-AS045PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2μg-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2μg-AS046rF蛋白2μg-AS04rF蛋白2μg-AS047活的RSV8.3x1057pfu無疫苗8FI-RSV1/150FI-RSV1/1509PBSPBS在第5組中，通過在相同部位間隔大約10分鐘進行2次注射而共施用腺病毒和重組蛋白。在第二次免疫接種后十四天（研究的第35天），用1-3x106pfu活的RSVALong對動物進行鼻內攻毒。從12只動物/組收集肺部并制備了4個集合（3個肺部/集合）。將肺部切碎并在含有LiberaseTL和DNAse的RPMI中在軌道式搖床上于37℃溫育45min。然后將所有組織均質化，通過無菌100μm尼龍細胞濾器過濾，并通過離心法（Percollgradient）分離淋巴細胞。從交界面收集白細胞并與來自F抗原的重疊肽在37℃溫育6h，并在溫育的頭30min后加入布雷菲德菌素A（BrefeldinA）。將平板在4℃保存過夜。在第二天，將細胞離心、重懸浮、洗滌、與活力標志物溫育、洗滌、固定并滲透以及用針對CD4、CD8、CD45、IL-13和IFNγ的熒光標記抗體染色。在流式細胞儀(LSR,BectonDickinson)上采集細胞并測定CD45posCD4posCD8negIFNγpos/IL-13neg細胞(Th1)和CD45posCD4posCD8negIFNγneg/IL-13pos細胞(Th2)的百分比。計算了Th2/Th1細胞的比率（圖7）。圖7顯示，當與rF/AS04制劑比較時，聯合疫苗PanAd3RSV+rF/AS04使Th2/Th1比率向Th1偏移(平衡的Th2/Th1比率1由虛線標示)。所有含有rF、PanAd3RSV或MVA組合的疫苗制劑均誘導相比在FI-RSV組（一種已知誘導高水平CD4Th2細胞的疫苗方案）中觀察到的低得多的Th2/Th1比率。對于組織病理學，收集了來自13只動物的左肺，充入福爾馬林并在福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)的小鼠肺部組織切片上進行希氏高碘酸染色。使用圖像分析軟件對染色玻片進行定量分析。對于PAS陽性組織（粘液產生細胞）的定量分析，PAS陽性分段組織的面積（除以因子10）通過氣道上皮細胞的周長進行標準化，并表示為平均PAS載量/毫米基底膜（BM）±標準偏差。這通常在20個氣道/個體上進行，并且計算了平均PAS/mmBM/個體（圖8）。圖8顯示，當與fF/AS04制劑比較時，聯合疫苗PanAd3RSV+rF/AS04能夠減少粘液產生細胞的數量。此外，所述共施用制劑和所有其它測試的PanAd3RSV-、MVA-以及fF/AS04組合在RSV攻毒后誘導顯著低于FI-RSV疫苗的粘液產生細胞。從8只動物的右肺葉收集支氣管肺泡灌洗(BAL)液。通過用針對CD45、CD11c和SiglecF的熒光標記抗體對BAL細胞染色進行BAL微分。在流式細胞儀(LSR,BectonDickinson)上采集細胞并測定CD45posSiglecFposCD11cneg(嗜酸性粒細胞)細胞的百分比。BAL中嗜酸性粒細胞的百分比被用作增強病理的標志物（圖9）。圖9顯示，在PanAd3RSV+fF/AS04的共施用組以及在除FI-RSV以外的其它疫苗組中觀察到極低水平的嗜酸性粒細胞。綜上，圖7至9中所示的數據表明，同時施用由PanAd3RSV和fF/AS04構成的疫苗與RSV攻毒引起的增強病理不相關，正如偏向Th1的肺部CD4T細胞應答以及肺部低水平的粘液產生細胞和嗜酸性粒細胞所證明。實施例5：用表達RSV蛋白的腺病毒載體與佐劑化重組F蛋白以兩種蛋白和三種佐劑劑量同時免疫Balb/c小鼠在RSV攻毒后在肺部T細胞中誘導中和抗體和T細胞應答以及Th1表型，并顯著降低肺部病毒載量。在Balb/c小鼠中，用包括含有表達RSVF、N和M2.1的核酸(SEQIDNO:4)的腺病毒載體(黑猩猩腺病毒155；ChAd155-RSV)RSV候選和佐劑化蛋白(PreF，SEQIDNO:2)的共施用方案，以兩種蛋白和三種明礬佐劑劑量，評價了免疫接種對攻毒后肺部CD4T細胞的Th1/Th2應答、肺部嗜酸性粒細胞增多和粘液產生的免疫原性和影響。用下列制劑以3周的間隔對Balb/c小鼠的組(n=15/組)進行兩次肌內同時（相隔數分鐘）免疫接種：組共施用：制劑1+制劑21ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白2μg和氫氧化鋁(50μg)2ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白2μg和氫氧化鋁(17μg)3ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白2μg和氫氧化鋁(6μg)4ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白0.2μg和氫氧化鋁(50μg)5ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白0.2μg和氫氧化鋁(17μg)6ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白0.2μg和氫氧化鋁(6μg)7ChAd155-RSVRSVIM108vp+PreF蛋白2μg和AS04D(50μg)8PBS+ChAd155-RSVRSVIM108vp9PreF蛋白2μg-和氫氧化鋁(50μg)+PBS10明礬吸附的FI-RSV1/15011活的RSV~3.6x106pfu12PBS+PBS免疫原性：在第35天（第二次免疫接種后14天），單獨采集來自11只小鼠/組的血清并如實施例1中所述使用空斑減數測定法測試RSV中和抗體的存在。結果示于圖10中。兩個劑量的由同時施用的ChAd155-RSV和用明礬或AS04佐劑化的重組F(PreF)蛋白構成的聯合疫苗誘導了與2個劑量的用50μg的明礬佐劑化的蛋白相似的中和抗體滴度，但顯著高于兩個劑量的ChAd155-RSV的滴度。ChAd155-RSV和佐劑化蛋白的組合允許明礬的劑量減少至17μg，同時保持與用50μg佐劑化的蛋白(單獨或與ChAd155-RSV同時)類似的中和抗體應答。在2μg至0.2μg的蛋白劑量觀察到了劑量應答，而最低水平的明礬(6μg)在兩種蛋白劑量中導致更低的中和抗體滴度。通過用攜帶M2.182-90表位的經熒光標簽的五聚體主要組織相容性復合物(MHC)I類識別全血中的M2.1特異性細胞來測量CD8T細胞應答。為此，在第二次免疫接種后14天，從5只小鼠/組收集血液。裂解紅細胞，并用熒光活力標志物、CD3、CD8和B-220抗體以及MHC五聚物對細胞進行染色。通過流式細胞術(LSR,BecktonDickinson)分析經染色的細胞，并測定五聚物陽性CD8T細胞的比例（圖11）。在所有用ChAd155RSV免疫的組的全血T細胞中均檢測到了相似的CD8應答，但在僅用PreF蛋白免疫的組中未檢測到。對攻毒的應答：用1-3x106pfu活的RSVALong對小鼠進行鼻內攻毒。在攻毒后第4天，收集肺部并單獨稱重以及均質化。將各個肺部均質物的系列稀釋液（各8個重復）與Vero細胞一起溫育，并在接種后6天，通過免疫熒光識別含有RSV空斑的孔。使用Spearman-K?rber法測定病毒滴度用于TCID50計算并表示為每克的肺（圖12）。ChAd155-RSV和/或佐劑化蛋白的組中的大多數動物顯示出完全保護（在肺部無法檢測到病毒載量）。最低明礬劑量傾向于具有略低的保護。在攻毒后4天從4只動物/組收集肺，并如實施例4中所述進行制備。在用匯集的來自F抗原的肽再刺激淋巴細胞之后，如實施例4種所述對細胞染色用于細胞內細胞因子的流式細胞術分析，并計算Th2/Th1細胞的比率（圖13）。在用匯集的來自M2.1抗原的肽以類似的方式再刺激肺淋巴細胞之后，計算表達IFNγ的CD8+T細胞的比例（圖14）。圖13顯示，當與PreF/明礬制劑比較時，ChAd155RSV+PreF(在所有佐劑劑量中)使Th2/Th1比率向Th1偏移(平衡的Th2/Th1比率1由虛線標示)，而佐劑的選擇和劑量影響甚微。所有含有ChAd155RSV+PreF組合的疫苗制劑均還誘導相比在FI-RSV組（一種已知誘導高水平CD4Th2細胞并與增強的RSV疾病相關的疫苗方案）中觀察到的更低的Th2/Th1比率。圖14顯示，在所有共施用ChAd155RSV+PreF的組的肺部均檢測到高水平的表達INFg的CD8+T細胞。在更高的蛋白劑量下，明礬的減少與更高的CD8應答相關，但佐劑水平在更低的蛋白劑量下影響甚微。僅用ChAd155RSV免疫的小鼠的肺部的CD8水平低于共施用組，并且在PreF蛋白/明礬組中無法檢測到。對于組織病理學，如實施例4中所述進行希氏高碘酸染色以在福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)的小鼠肺部組織切片上定量粘液產生細胞。在Balb/cRSV攻毒模型中，粘液產生細胞與由FI-RSV誘導的增強的RSV病理相關。計算了平均PAS/mmBM/個體（圖15）。圖15顯示，當與PreF/明礬制劑比較時，共施用ChAd155-RSV與PreF/明礬在RSV攻毒后不會增加粘液產生細胞的數量。在更高的蛋白劑量下，明礬的減少與更低的粘液產生細胞的數量相關，但佐劑水平在更低的蛋白劑量下影響更小。相比等同的ChAd155-RSV/PreF+明礬組合，ChAd155-RSV與PreF/AS04D的組合誘導了更低水平的粘液產生細胞。在僅施用ChAd155-RSV時觀察到最低數量的粘液產生細胞。圖10-15中的結果表明，由ChAd155RSV和佐劑化PreF蛋白抗原構成的同時施用疫苗能夠在RSV攻毒時誘導保護性中和抗體應答和T細胞應答，其具有Th1/Th2平衡的CD4應答并且沒有增強的病理。序列表SEQIDNO:1:示例性構象上受限的PreF抗原的核苷酸序列。SEQIDNO:2:示例性構象上受限的PreF抗原的氨基酸序列。SEQIDNO:3:編碼RSV抗原的示例性核酸的核苷酸序列。SEQIDNO:4:編碼RSV抗原的示例性核酸的氨基酸序列。位置1-524=FΔTM蛋白位置525-552=2a序列位置553-943=N蛋白位置944-1146=M2-1蛋白當前第1頁1 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