艾日布林在治療癌癥中的用途的制作方法

癌癥是用于描述特征分別為特定類型的細胞不受控制生長的各種疾病的術語。其開始于包含這樣的細胞的組織，并且如果癌癥在診斷時尚未擴散至任何其它組織，則可通過例如手術、輻射或另一類型的局部療法治療。然而，當有證據表明癌癥已從其來源組織轉移時，通常使用不同的治療方法。事實上，因為不可能準確測定轉移的程度，當檢出任何擴散的證據時，通常采取系統治療方法。這些方法可包括給予干擾快速分裂細胞(例如癌細胞)的生長的化學治療藥。其它方法包括使用免疫療法，其中受試者針對癌性細胞的免疫反應被引發或增強。

軟海綿素B是結構復雜的大環化合物，其最初自海洋的海綿Halichondria okadai分離，和隨后在Axinella sp.、Phakellia carteri和Lissodendoryx sp.中發現。軟海綿素B的完全合成公開于1992年(Aicher等，J.Am.Chem.Soc.114：3162-3164，1992)。軟海綿素B已經顯示抑制微管蛋白聚合、微管裝配、β^S-微管蛋白交聯、GTP和長春堿結合至微管蛋白、和微管蛋白依賴性GTP體外水解。該分子還已經顯示在體外和體內具有抗-癌癥性質。具有抗-癌癥活性的軟海綿素B類似物描述于美國專利號6,214,865 B1。

艾日布林是軟海綿素B的合成類似物。艾日布林亦稱為ER-086526，和已指定為CAS號253128-41-5和US NCI名稱號NSC-707389。艾日布林的甲磺酸鹽(甲磺酸艾日布林，其以商標名銷售和亦稱為E7389)在2010年11月獲得FDA批準，用于治療患有轉移性乳腺癌的患者，所述患者之前已經在輔助或轉移性背景下(in either the adjuvant or metastatic setting)接受至少兩種治療

艾日布林在治療癌癥中的用途

發明背景

癌癥是用于描述特征分別為特定類型的細胞不受控制生長的各種疾病的術語。其開始于包含這樣的細胞的組織，并且如果癌癥在診斷時尚未擴散至任何其它組織，則可通過例如手術、輻射或另一類型的局部療法治療。然而，當有證據表明癌癥已從其來源組織轉移時，通常使用不同的治療方法。事實上，因為不可能準確測定轉移的程度，當檢出任何擴散的證據時，通常采取系統治療方法。這些方法可包括給予干擾快速分裂細胞(例如癌細胞)的生長的化學治療藥。其它方法包括使用免疫療法，其中受試者針對癌性細胞的免疫反應被引發或增強。

軟海綿素B是結構復雜的大環化合物，其最初自海洋的海綿Halichondria okadai分離，和隨后在Axinella sp.、Phakellia carteri和Lissodendoryx sp.中發現。軟海綿素B的完全合成公開于1992年(Aicher等，J.Am.Chem.Soc.114：3162-3164，1992)。軟海綿素B已經顯示抑制微管蛋白聚合、微管裝配、β^S-微管蛋白交聯、GTP和長春堿結合至微管蛋白、和微管蛋白依賴性GTP體外水解。該分子還已經顯示在體外和體內具有抗-癌癥性質。具有抗-癌癥活性的軟海綿素B類似物描述于美國專利號6,214,865 B1。

艾日布林是軟海綿素B的合成類似物。艾日布林亦稱為ER-086526，和已指定為CAS號253128-41-5和US NCI名稱號NSC-707389。艾日布林的甲磺酸鹽(甲磺酸艾日布林，其以商標名銷售和亦稱為E7389)在2010年11月獲得FDA批準，用于治療患有轉移性乳腺癌的患者，所述患者之前已經在輔助或轉移性背景下(in either the adjuvant or metastatic setting)接受至少兩種治療轉移性疾病的化學治療方案，所述方案應包括蒽環類抗生素和紫衫烷。

甲磺酸艾日布林的化學名稱是11，15：18，21：24，28-三橋氧-7，9-橋亞乙基-12，15-橋亞甲基-9H，15H-呋喃并[3，2-i]呋喃并[2′，3′：5，6]吡喃并[4，3-b][1，4]二氧雜環二十五-5(4H)-酮，2-[(2S)-3-氨基-2-羥基丙基]二十六氫-3-甲氧基-26-甲基-20，27-雙(亞甲基)-，(2R，3R，3aS，7R，8aS，9S，10aR，11S，12R，13aR，13bS，15S，18S，21S，24S，26R，28R，29aS)-甲磺酸鹽，和其可描述如下：

發明概述

本發明部分地基于在某些其它藥劑(例如卡培他濱、紫杉醇和卡鉑)之前給予甲磺酸艾日布林顯示改進的(例如，協同的)抗腫瘤作用的觀察結果。本發明因此特征在于通過給予艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)，接著給予一種或多種其它藥劑[例如，卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆(Ixabepilone)]來預防和治療癌癥的方法。

當術語“艾日布林”在本文中使用時，應被認為是指示艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如甲磺酸艾日布林)，除非上下文另外指示。

在第一方面，本發明提供用于治療患有或有風險發生乳腺癌的受試者(例如，人類患者)(例如，經診斷患有乳腺癌、在乳腺癌治療中或在乳腺癌治療后恢復中的受試者)的方法。所述方法包括給予所述受試者(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)，和隨后(ii)選自卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，順鉑、卡鉑或奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆的第二種藥劑。所述治療可任選地在例如手術之前作為新輔助療法進行。在各種實例中，乳腺癌是原發性腫瘤、局部晚期(local advanced)、轉移和/或特征為雌激素受體陽性或陰性的、孕酮受體陽性或陰性的、HER-2陽性或陰性的或三陰性乳腺癌。

在某些實施方案中，艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)通過靜脈內輸注給予(例如，持續約1-約20分鐘，或約2-約5分鐘)，其量的范圍為約0.1mg/m²至約20mg/m²(例如，約1.1mg/m²或1.4mg/m²)，和/或21天周期的第1天和第8天各自一次。

在各種實施方案中，艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)在給予第二種藥劑之前完成，而在其它實施方案中，艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)的給予在開始給予第二種藥劑后繼續進行。

在某些實施方案中，給予的第二種藥劑是卡培他濱，其可例如每日給予，持續兩周，接著停藥一周。

在各種實施方案中，根據本發明的方法的治療：(i)減少癌細胞數；(ii)減少腫瘤體積；(iii)增加腫瘤消退速率；(iv)減少或減慢癌細胞侵潤至周圍器官；(v)減少或減慢腫瘤轉移；(vi)減少或抑制腫瘤生長；(vii)預防或延遲癌癥的發生和/或復發，和/或延長無疾病或無腫瘤存活時間；(viii)增加總存活時間；(ix)減少治療頻率；和/或(x)減輕與癌癥相關的一個或多個癥狀。

在另一方面，本發明還包括用于減少患有乳腺癌的受試者的腫瘤大小的方法。這些方法包括給予所述受試者(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)，和隨后(ii)選自卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，順鉑、卡鉑或奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆的第二種藥劑。艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)和/或其它藥劑可任選按上文和本文他處所述給予，和可產生例如一種或多種上文所列的效果(i-x)。該治療可任選在例如手術之前在新輔助療法背景下進行。在各種實例中，乳腺癌是原發性腫瘤、局部晚期、轉移和/或特征為雌激素受體陽性或陰性的、孕酮受體陽性或陰性的、HER-2陽性或陰性的，或三陰性乳腺癌。

在進一步的方面，本發明包括用于增加選自卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，順鉑、卡鉑或奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆的藥劑在治療受試者的乳腺癌中的功效的方法。這些方法包括在所述藥劑之前給予所述受試者艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)。在各種實例中，艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)和/或其它藥劑按上文和本文他處所述的時間表和劑量給予，以及給予按上文和本文他處所述的特定受試者(以實現例如一種或多種上文所列的效果)。

在另一方面，本發明包括用于在患有乳腺癌的受試者中治療乳腺癌或減少腫瘤大小的藥盒。所述藥盒包括(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)，和(ii)選自卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，順鉑、卡鉑或奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆的第二種藥劑，任選地呈劑量形式。任選地，所述藥盒包括使用說明書和/或用于給予的裝置或試劑。

本發明還包括如本文所述的艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)和隨后給予的第二種藥劑在治療如本文所述的患有或有風險發生乳腺癌的受試者中的用途，或在制備用于該目的的藥物中的用途。

本發明的方法提供針對癌癥的改進功效。在一些情況下，組合方法可例如用于獲得協同效果，其中例如，所述效果大于單獨給予的藥物的效果的總和。導致加和效果的組合方法也是有益的。

根據以下詳細描述、附圖和權利要求書，本發明的其它特征和優點將是顯而易見的。

附圖簡述

圖1是顯示在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下(s.c.)異種移植物模型中在艾日布林治療后卡培他濱的抗腫瘤作用的圖。

圖2是顯示在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中艾日布林和紫杉醇(PTX)的連續治療的抗腫瘤作用的圖。

圖3A和3B是顯示在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中艾日布林加卡鉑(CBDCA)和紫杉醇加卡鉑的連續治療的抗腫瘤作用的圖。圖3A顯示抗腫瘤作用，和圖3B顯示連續治療的體重。

圖4是顯示在用艾日布林治療后在MDA-MB-231腫瘤中卡鉑的濃度的圖。

詳細描述

本發明提供用于預防和治療癌癥的方法，包括在第二種(或另外的)抗癌劑例如卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆之前給予艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)。根據本發明的方法，艾日布林可在新輔助療法背景中，在用于乳腺癌療法的一線、二線或三線的第二種抗癌劑之前給予，以提高第二種抗癌劑的功效。

根據本發明的方法的癌癥治療可(i)減少癌細胞數；(ii)減少腫瘤體積；(iii)增加腫瘤消退速率；(iv)減少或減慢癌細胞侵潤至周圍器官；(v)減少或減慢腫瘤轉移；(vi)減少或抑制腫瘤生長；(vii)防止或延遲癌癥的發生和/或復發，和/或延長無疾病或無腫瘤存活時間；(viii)增加總存活時間；(ix)減少治療頻率；和/或(x)減輕與癌癥相關的一個或多個癥狀。

藥物組合物、劑量和方法

包含艾日布林和/或本文所述的其它藥劑的藥物組合物可使用本領域已知的標準方法制備，或可自市售來源獲得。通常，用于本發明的艾日布林和其它藥劑包括在分開的藥物組合物中，但它們可任選地包括在單一的組合中。艾日布林、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑和奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆通常以體液形式提供，用于靜脈內給予，而卡培他濱通常以片劑形式提供，用于口服給予。

用于本發明的藥物組合物可通過例如將具有所需純度的活性成分混合或溶解在生理學上可接受的稀釋劑、載體、賦形劑或穩定劑中制備(參見例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第20版)，編輯A.Gennaro，2000，Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia，PA)。可接受的稀釋劑包括水和鹽水，任選包括緩沖液例如磷酸鹽、檸檬酸鹽或其它有機酸；抗氧化劑，包括丁羥甲苯(BHT)、丁羥茴香醚(BHA)、抗壞血酸；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖或其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA；糖醇，例如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，例如鈉；和/或非離子表面活性劑，例如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或PEG。

在制備用于口服劑型的組合物(例如，包含卡培他濱的組合物)中，可使用任何常用的藥用介質，例如水、二醇、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑。此外，在口服固體制劑例如粉劑、膠囊劑和片劑的情況下可使用載體例如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、粒化劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。

任選地，本發明的制劑包含藥學上可接受的防腐劑。在一些實施方案中，防腐劑濃度范圍為0.1 to 2.0％，通常v/v。合適的防腐劑包括制藥領域已知的那些，例如苯甲醇、苯酚、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯。此外，艾日布林和/或其它藥物制劑可任選地包括藥學上可接受的鹽，例如氯化鈉(例如約生理學濃度)。因此，在一個實例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)在0.9％氯化鈉注射液(USP)中配制。

上述制劑(和其它制劑)可用于藥物的胃腸外給予。因此，藥物可通過途徑，其包括靜脈內、瘤內、瘤周圍、動脈內、皮內、膀胱內、經眼、肌內、皮內、腹膜內、經肺、皮下和經皮途徑，給予。也可使用其它途徑，包括例如經粘膜、經皮、吸入、陰道內、直腸和口服給予途徑。

本文所述給予的艾日布林和其它藥劑的劑量可顯著不同，其取決于靶標疾病的類型，遞送方法的選擇，以及患者的年齡、性別和體重，癥狀的嚴重性，以及其它因素。

除了給予方案以外，用于本發明的方法的每種藥物在下文描述。這些描述之后是根據本發明的組合方法可如何進行艾日布林預治療的實例。

艾日布林

用于合成艾日布林的方法描述于例如美國專利號6,214,865；美國專利號7,982,060；美國專利號8,350,067；和美國專利號8,093,410，其各自通過引用結合到本文中。如上所述，甲磺酸艾日布林可市售獲得，和作為出售。

如上所述，艾日布林可任選以鹽形式用于本發明。對于使用的鹽沒有特別限制，無論是無機酸鹽還是有機酸鹽。例如，鹽可選自甲磺酸鹽(例如，甲磺酸艾日布林)、鹽酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、過磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、糖精酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、撲酸鹽等。此外，使用鋁、鈣、鋰、鎂、鈉、鋅和二乙醇胺的鹽是可接受的。

艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的每日劑量范圍可為例如，0.001mg/m²至約100mg/m²(例如，范圍為約0.1mg/m²至約50mg/m²或范圍為約0.7mg/m²至約1.5mg/m²，或這些范圍內的任何單一量(例如，1.4mg/m²或1.1mg/m²))。艾日布林可作為單劑量一天、一周、一月或一年給予一次，或每天、每周、每月或每年可給予超過一個劑量的艾日布林。例如，在一種給予方案中，艾日布林可在21天周期的第1天和第8天給予一次。更特別的，甲磺酸艾日布林的建議劑量是在21天周期的第1天和第8天經2-5分鐘靜脈內給予1.4mg/m²。在患有輕度肝損傷(Child-Pugh A)的患者中甲磺酸艾日布林的建議劑量是在21天周期的第1天和第8天經2-5分鐘靜脈內給予1.1mg/m²，而在患有中度肝損傷(Child-Pugh B)的患者中甲磺酸艾日布林的建議劑量是在21天周期的第1天和第8天經2-5分鐘靜脈內給予0.7mg/m²。此外，在患有中度腎損傷(肌酐清除為30-50mL/min)的患者中甲磺酸艾日布林的建議劑量是在21天周期的第1天和第8天經2-5分鐘靜脈內給予1.1mg/m²。這些或其它更低劑量的甲磺酸艾日布林可任選地用于根據本發明的方法的組合治療的情況。

卡培他濱

卡培他濱(XELODA，Roche)，一種氟嘧啶氨基甲酸酯，是5’-脫氧-5-氟尿苷(5’-DFUR)的前藥。卡培他濱的每日劑量不特別受到限制，但通常該藥物可以1000-4000mg/m²(例如，1500-3500mg/m²、2000-3000mg/m²或2500mg/m²)的范圍給予。其可作為單劑量一天、一周、一月或一年給予一次，或每日、每周、每月或每年可給予超過一個劑量(例如，2個劑量)的卡培他濱。例如，在一種給予方案中，每日口服(以兩個分開的劑量)給予2500mg/m²卡培他濱，持續兩周，接著停藥1周，由此形成3周的周期。在各種實施方案中，根據艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-給予，與標準劑量相比，卡培他濱的量可減少。

抗有絲分裂劑

紫杉醇

紫杉醇(Bristol-Myers Squibb)是一種有絲分裂抑制劑。紫杉醇的每日劑量不特別受到限制，但通常該藥物可以50-300mg/m²(例如，100-250mg/m²、150-200mg/m²或175mg/m²)的范圍給予。其可作為單劑量一天、一周、一月或一年給予一次，或每天、每周、每月或每年可給予超過一個劑量(例如，2個劑量)的紫杉醇。例如在一種給予方案中，每三個周經1-5(例如，3)小時靜脈內給予135-175mg/m²紫杉醇，持續2-6(例如，4)個療程。在另一實例中，50-120mg/m²(例如，70-100mg/m²或80-90mg/m²)紫杉醇每周給予，持續例如，6-12(例如，9)個周。在各種實施方案中，根據艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-給予，與標準劑量相比，紫杉醇的量可減少。

多西他賽

多西他賽(Taxotere；Docefrez)是一種有絲分裂抑制劑。多西他賽的每日劑量不特別受到限制，但通常該藥物可以50-300mg/m²(例如，60-250mg/m²、75-200mg/m²或100-150mg/m²)的范圍給予。其可作為單劑量一天、一周、一月或一年給予一次，或每天、每周、每月或每年可給予超過一個劑量(例如，2個劑量)的多西他賽。例如，在一種給予方案中，每三個周經0.5-2(例如，1)小時靜脈內給予60-100(例如，75)mg/m²多西他賽，持續2-6(例如，4)個療程。在各種實施方案中，根據艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-給予，與標準劑量相比，多西他賽的量可減少。

基于鉑的抗腫瘤劑

可用于本發明的基于鉑的抗腫瘤藥(鉑類)包括例如，順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、沙鉑、吡鉑、奈達鉑、triplatin和lipolatin。這些藥物的劑量和給予方案是本領域眾所周知的，和可容易地經適應用于本發明。在各種實施方案中，根據艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-給予，與標準劑量相比，基于鉑的抗腫瘤藥的量可減少。例如在卡鉑的情況下，可參考Calvert等，J.Clin.Oncol.7：1748-1756，1989，其說明了根據例如腎小球濾過率來決定劑量的眾所周知的方法。作為具體的實例，基于鉑的抗腫瘤藥(例如，卡鉑)可以AUC 4/5/6 IV Q3周的量給予。

多柔比星

多柔比星(Adriamycin；Rubex；Doxil，以脂質包囊形式)分類為蒽環類抗生素。多柔比星的每日劑量不特別受到限制，但通常該藥物可每21-28天以40-60mg/m²IV的范圍給予。或者，每21天60-75mg/m²IV一次。其可作為單劑量一天、一周、一月或一年給予一次，或每天、每周、每月或每年可給予超過一個劑量(例如，2個劑量)的多柔比星。在各種實施方案中，根據艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-給予，與標準劑量相比，多柔比星的量可減少。

伊沙匹隆

伊沙匹隆(IXEMPRA)是一種屬于epithilone類的抗腫瘤劑的微管抑制劑。Epothilones自粘桿菌纖維堆囊菌(Sorangium cellulosum)分離。伊沙匹隆是epothilone B(一種16元多聚乙酰大環內酯)的半合成類似物，其中天然存在的內酯置換為化學修飾的內酰胺。伊沙匹隆的每日劑量不特別受到限制，但通常該藥物可以20-60(例如，40)mg/m²的范圍每3個周經1-4(例如，2-3)小時靜脈內給予。其可作為單劑量一天、一周、一月或一年給予一次，或每天、每周、每月或每年可給予超過一個劑量(例如，2個劑量)的伊沙匹隆。在各種實施方案中，根據艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的共-給予，與標準劑量相比，伊沙匹隆的量可減少。

組合給予方案

如上所述，根據本發明的方法，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)在本文所述的一種或多種其它藥劑之前給予。因此，例如，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)可在另一種藥劑之前1、2、3、4、5或6天或1-12(例如，2-10或4-8)周給予，由本領域技術人員合適地確定。

在各種實例中，一個或多個(例如，1-8、2-7、3-6或4-5個)劑量或全周期的艾日布林治療可在一個或多個(例如，1-8、2-7、3-6或4-5個)劑量或全周期的本文所述的一種或多種其它藥劑治療之前給予。因此，在一個實例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林；例如，1.4mg/m²或1.1mg/m²經例如2-5分鐘給予)在21天周期的第1天和第8天給予，和進行1-8、2-7、3-6或4-5(例如，4)個全周期。然后停止艾日布林治療，和開始使用本文所述的不同藥劑治療。在一個實例中，然后開始每周給予紫杉醇(例如，80mg/m²)，持續1-20(例如，2-18、3-16、4-14、5-12、6-11或7-9)個周。因此，在該實例中，艾日布林預-治療在開始紫杉醇給予之前完成。在該方法的變化中，在艾日布林給予的第1天開始給予第三種藥劑(例如，基于鉑的抗腫瘤劑，例如卡鉑、順鉑或奧沙利鉑；例如，AUC 6)，和在艾日布林和紫杉醇治療的整個療程期間每三個周繼續進行。在其它實例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林；例如，1.4mg/m²或1.1mg/m²經例如2-5分鐘給予)在21天周期的第1天和第8天給予，和進行1-8、2-7、3-6或4-5(例如，4)個全周期。在最后一個艾日布林周期后，進行一個或多個(例如，1-8、2-7、3-6或4-5)個周期的卡培他濱、多西他賽、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆給予，如上文關于每種這些藥劑所述。

在其它實例中，在使用另一藥劑開始治療的同一時間開始艾日布林治療和繼續進行(無論是在周期的過程期間還是在周期的開始)。在該方法的一個實例中，艾日布林在21天周期的第1天給予。在該周期的第8天，再次給予艾日布林，和開始使用其它藥劑之一的治療過程。在卡培他濱的情況下，例如，給予可每日進行，持續2個周，和上述1周停藥期可在開始另一個艾日布林21天周期之前或重疊進行。在另一實例中，艾日布林在21天周期的第1天給予。在該周期的第8天，再次給予艾日布林，和還在該天給予第二種藥物(例如，紫杉醇、多西他賽、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、多柔比星或伊沙匹隆)，和然后每三個周給予所述第二種藥物，與另外的艾日布林給予周期重疊進行。任選地，在紫杉醇、多西他賽、多柔比星或伊沙匹隆治療之前的艾日布林預-治療的情況下，基于鉑的抗腫瘤藥(例如，順鉑、卡鉑、奧沙利鉑)在該21天周期中給予一次。該給予可在周期的第一天或在任何天數發生，其由本領域技術人員合適地確定。該治療過程可重復進行，由本領域技術人員根據耐受性和有效性來確定。

除了艾日布林和上述藥劑(即卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆)之外，本發明的方法還可包括給予一種或多種另外的治療劑。在這些藥劑中，免疫調節劑(例如，抗體或疫苗)、化學治療劑/抗腫瘤劑、抗菌劑、鎮吐藥和抗炎劑是合適的。在其它實例中，艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)和所述藥劑(卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆)可作為唯一的治療(例如，唯一的抗-癌癥)藥劑用于治療方案。因此，本發明的方法可由給予以下藥劑組成：(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽(例如，甲磺酸艾日布林)，和(ii)卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆。

本發明的方法可用于治療(包括例如，延遲進展)或預防受試者(例如，人類患者)的癌癥和/或減少腫瘤大小。受試者可被診斷患有癌癥、處于發生癌癥的風險中、在癌癥治療中或在癌癥治療后恢復中。此外，該方法可用于治療或預防轉移和/或復發。該治療可以是單獨的化學療法，但也預期該治療與除去或減少腫瘤大小的手術、輻射療法、免疫療法和/或部分切除術療法(ablation therapy)組合。

如上所述，本發明的方法可用于治療乳腺癌。根據本發明的方法可治療的乳腺癌的類型包括例如，雌激素受體陽性或陰性的、孕酮受體陽性或陰性的、HER-2陽性或陰性的，或三陰性乳腺癌。本發明的方法可進一步用于治療局部晚期或轉移乳腺癌。在各種實例中，本發明的方法可在新輔助療法的背景下進行，和因此在另一種主要治療例如手術之前進行。

藥盒

本發明還提供了藥盒，其包括含艾日布林(例如，甲磺酸艾日布林)的容器和/或含本文所述的一種或多種其它藥劑(卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、多柔比星或伊沙匹隆的容器。在這樣的藥盒中艾日布林和/或其它藥劑可以足以治療有需要的患者的癌癥的量(例如，對于單次給予或多次給予足夠的量)提供。所述藥盒因此可包括多個容器，其各自包括有效量的單劑量艾日布林和/或其它藥劑藥物組合物。任選地，給予所述藥物組合物所需要的工具和/或裝置也可包括在藥盒中。此外，藥盒可包括其它組分，例如用艾日布林和/或本文所述的其它藥劑治療癌癥患者的說明書或給予時間表。

本發明通過以下實施例進行說明，其絕不意圖限制本發明。

實驗實施例

材料和方法

化合物、細胞系和動物

艾日布林(E7389，)和卡培他濱由Eisai Co.，Ltd(Tokyo，Japan)生產，和紫杉醇和卡鉑分別購自LC Laboratories(Woburn，MA)和BMS(Tokyo，Japan和Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)。人乳腺癌細胞系MDA-MB-231獲自ATCC(Rockville，MD)。雌性無胸腺裸鼠獲自Charles River Laboratories JAPAN Inc.(Kanagawa，Japan)，Taconic(Germantown，NY)或Japan SLC Co.，Ltd.(Shizuoka，Japan)。所有的動物實驗按照Eisai Co.，Ltd.或Eisai Inc的動物實驗指南進行。

試驗化合物給藥制劑的制備

將艾日布林以濃度0.1mg/mL溶于鹽水。將卡培他濱懸浮于包含5％阿拉伯膠的40mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)，以得到54mg/mL的濃度。將紫杉醇(PTX)以濃度40mg/mL溶于Cremophore EL∶乙醇＝1∶1和用5％葡萄糖溶液稀釋10倍。預制的10mg/mL卡鉑溶液用于該測定。該溶液以100mg/kg的濃度注射。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中在艾日布林治療后卡培他濱的抗腫瘤作用

MDA-MB-231細胞用包含10％(v/v)FBS的RPMI 1640培養基培養。將培養的腫瘤細胞以密度10×10⁷個細胞/mL懸浮于50％(v/v)BD Matrigel(BD bioscience，San Jose，CA)用于皮下接種至裸鼠。將0.1-mL等份的細胞懸浮液皮下移植到小鼠的右側區。腫瘤體積按照下式計算：(寬[mm]²×長[mm])/2。腫瘤重量按照下式計算：腫瘤體積(mm³)×1(mg/mm³)。在MDA-MB-231異種移植物模型中，在第1天當平均腫瘤體積達到100和300mg之間(1mm³＝1mg)時，將裸鼠隨機分成各組。在第1天給予對照(無治療)；卡培他濱，540mg/kg，QD8，p.o.；或艾日布林，1.0mg/kg，QD1，i.v.。在艾日布林組中，艾日布林處理的小鼠隨機分成兩個組。在第12天(作為圖1中新的第1天)，當腫瘤大小恢復至初始水平，兩個艾日布林組如下處理：(i)艾日布林后對照和(ii)艾日布林后卡培他濱，540mg/kg，QD8，p.o.。給予體積(0.1mL/10g體重)根據給予前體重計算。腫瘤體積每周測量兩次。各組的小鼠數是6。顯示的數據是平均值+/-SEM(圖1)。數據通過Dunnett多重比較檢驗進行分析，以比較兩個組(GraphPad Prism版本6.02(GraphPad Software Inc.，La Jolla，CA))。*＜0.05的值被認為是統計學顯著的。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中艾日布林和紫杉醇的連續治療的抗腫瘤作用

MDA-MB-231細胞用包含10％(v/v)FBS的RPMI 1640培養基培養。將培養的腫瘤細胞以密度10×10⁷個細胞/mL懸浮于50％(v/v)GelTrex(Life Technologies，Tokyo，Japan)中用于皮下接種至裸鼠。將0.1-mL等份的細胞懸浮液皮下移植至小鼠的右側區。腫瘤體積按照下式計算：(寬[mm]²×長[mm])/2。按照下式計算腫瘤重量：腫瘤體積(mm³)×1(mg/mm³)。在MDA-MB-231異種移植物模型中，在第0天當平均腫瘤體積達到100和300mg之間(1mm³＝1mg)時，將裸鼠隨機分成各組。在第0天和第7天給予對照(無治療)；艾日布林，1mg/kg i.v.；或PTX，40mg/kg i.v.。給予體積(0.1mL/10g體重)根據給予前體重計算。腫瘤體積每周測量兩次。各組的小鼠數是5。顯示的數據為平均值+SD(圖2)。治療組之間腫瘤生長曲線的差異通過重復測量ANOVA分析。*＜0.05的值(雙向)被認為是統計學顯著的。使用GraphPad Prism版本6.02(GraphPad Software Inc.，La Jolla，CA)進行統計學分析。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中艾日布林加卡鉑和紫杉醇加卡鉑的連續治療的抗腫瘤作用

MDA-MB-231細胞用包含10％(v/v)FBS的RPMI 1640培養基培養。將培養的腫瘤細胞以密度10×10⁷個細胞/mL懸浮于50％(v/v)GelTrex(Life Technologies，Tokyo，Japan)用于皮下接種至裸鼠。將0.1-mL等份的細胞懸浮液皮下移植至小鼠的右側區。腫瘤體積按照下式計算：(寬[mm]²×長[mm])/2。腫瘤重量按照下式計算：腫瘤體積(mm³)×1(mg/mm³)。在MDA-MB-231異種移植物模型中，在第0天當平均腫瘤體積達到100和300mg之間(1mm³＝1mg)時，將裸鼠隨機分成各組。在第0天給予對照(無治療)；艾日布林，1mg/kg i.v.；或PTX，40mg/kg i.v.，和在第7天給予卡鉑，100mg/kg i.v.。給予體積(0.1mL/10g體重)根據給予前體重計算。腫瘤體積每周測量兩次。進行分析直到第35天。各組的小鼠數為5。顯示的數據為平均值+SD(圖3)。治療組之間腫瘤生長曲線的差異通過重復測量ANOVA分析。*＜0.05的值(雙向)被認為是統計學顯著的。使用GraphPad Prism版本6.02(GraphPad Software Inc.，La Jolla，CA)進行統計學分析。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中在給予艾日布林后卡鉑在腫瘤中的藥代動力學研究

雌性裸鼠在適應后，在右側區使用26-號針頭，按1∶1比率(各自50μL)以0.1mL的體積在磷酸鹽緩沖鹽水中皮下注射5x10⁶MDA-MB-231細胞與基質膠。這確保可獲得足夠的帶有體積范圍大約200～300mm³的腫瘤的小鼠用于研究。當腫瘤達到大約250mm³的平均尺寸時，選擇30只小鼠。研究包括包含24只小鼠的初始實驗。第一組接受作為3mg/kg的單劑量i.v.給予的甲磺酸艾日布林；對于20g動物，給予200μL的0.3mg/mL甲磺酸艾日布林溶液。為控制腫瘤大小(to control for tumor size)，在卡鉑給藥前引入由27只小鼠組成的溶媒對照組(溶媒B)。該組的小鼠經選擇使得它們的腫瘤大小與甲磺酸艾日布林-治療小鼠組的腫瘤大小匹配。溶媒B組被分成2個組，第一組3只小鼠，其接受溶媒(鹽水)i.v.注射；和第二組24只小鼠，其接受卡鉑i.v.注射。在溶媒B的第1天或在艾日布林治療后第15天，靜脈內給予100mg/kg卡鉑至所有小鼠和在麻醉下在指定的時間點0.083，0.25，0.5，1，4，8，24和48小時收集腫瘤樣品(對于各時間點n＝3)。用3倍各個腫瘤的重量的1x PBS使用Mini Bead Beater-96將腫瘤勻化，和各腫瘤勻漿液中卡鉑的濃度通過經驗證的LC-MS方法進行分析。

藥代動力學參數的計算

卡鉑在腫瘤中的PK參數使用非區室方法計算(Pheonix/WinNonlin v.6.3，Pharsight；Mountain View，CA)。卡鉑濃度最高的時間點表示為tmax。卡鉑的最高濃度表示為Cmax。從時間零至最后可計量的時間點(AUC(0-t))和至無限(AUC(0-inf))的腫瘤濃度相對時間的曲線下觀察到的面積使用梯形法計算。AUC(0-inf)計算為AUC(0-t)+AUC extrap，其中AUC extrap表示從最后可計量的時間點(Clast)至無限外推的AUC，和計算為Clast/λZ。Lamda z(λZ)，在終末階段期間濃度相對時間的曲線的斜率，通過線性回歸確定。

腫瘤濃度的均值、標準偏差(SD)和百分比變異系數(％CV)使用Excel 2010(Microsoft，Redmond，WA)計算。卡鉑的PK參數的均值、SD和％CV用WinNonlin或Excel 2010確定。由于WinNonlin和Excel之間的舍入和格式化(formatting)差異，均值、SD和％CV值可出現較小差異。然而，這些差異被認為是不顯著的，其并不損害研究的整合性(integrity)。

儀器操作和測定條件

HPLC系統

使用Shimadzu HPLC系統(Shimadzu Scientific Instruments，Columbia，MD)，其由自動采樣器(型號：SIL HTc)、柱隔室單元(型號：CTO-20AC)、脫氣器(型號：DGU-20A3)和泵(型號：LC-20AD)構成。

MS/MS條件

將AB Sciex(Foster City，CA)API5000質譜儀，其具有在正離子模式下的電噴射電離，用于樣品分析。將使用N2的碰撞活化解離(CAD)用于產生結構特征性產物離子，用于定量。

卡鉑濃度的計算

卡鉑的峰面積使用Analyst 1.6(AB Sciex，Foster City，CA)積分，和該面積被輸入Watson 7.2(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)。將內標甲苯磺丁脲加入至各樣品，除了沒有IS的空白之外，然而由于在所有分析運行中甲苯磺丁脲的不一致的儀器響應，IS不用于定量。校準曲線通過將卡鉑的峰面積針對在腫瘤勻漿物中校準標準品的濃度作圖而建立。1/x2加權的線性回歸(Y＝aX+b)用于計算在腫瘤勻漿物中的參數a和b。各樣品中卡鉑的濃度自各個標準曲線的回歸方程計算。Excel 2010(Microsoft，Redmond，WA)用于計算均值、SD、百分比差異(％Diff)和％CV。所有報告的數據經過舍入。

結果

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中在艾日布林治療后卡培他濱的抗腫瘤作用

我們評價了有或沒有用1.0mg/kg艾日布林預治療的情況下540mg/kg卡培他濱在MDA-MB-231模型中的抗腫瘤活性，以檢查艾日布林預治療是否將改變腫瘤細胞對化學治療劑的藥物敏感性和提高卡培他濱的抗腫瘤活性。在MDA-MB-231異種移植物模型中，與沒有預治療的情況下實現的抗腫瘤活性相比，艾日布林的預治療顯著提高卡培他濱的抗腫瘤活性(圖1)。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中艾日布林和紫杉醇的連續治療的抗腫瘤作用

接下來，我們研究了在MDA-MB-231模型中以下連續治療的抗腫瘤活性：Gr.1；在第0天和第7天溶媒，Gr.2；在第0天1mg/kg艾日布林和在第7天40mg/kg紫杉醇和Gr.3；在第0天40mg/kg紫杉醇和在第7天1mg/kg艾日布林。兩種連續組合治療顯示顯著的抗腫瘤作用，和艾日布林和紫杉醇的連續組合治療顯示清楚的抗腫瘤活性，具有腫瘤收縮(圖2)。針對在無胸腺小鼠中異種移植的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231，艾日布林接著紫杉醇治療的抗腫瘤活性顯著強于紫杉醇接著艾日布林治療的抗腫瘤活性。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中艾日布林加卡鉑和紫杉醇加卡鉑的連續治療的抗腫瘤作用

然后，我們研究了在MDA-MB-231模型中在第0天1mg/kg艾日布林加在第7天100mg/kg卡鉑和在第0天40mg/kg紫杉醇加在第7天100mg/kg卡鉑的連續治療的抗腫瘤活性。兩種連續組合治療顯示顯著的抗腫瘤作用，和艾日布林加卡鉑的連續組合治療顯示清楚的抗腫瘤活性，具有腫瘤收縮(圖3)。針對在無胸腺小鼠中異種移植的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231，艾日布林接著卡鉑的治療的抗腫瘤活性顯示顯著強于紫杉醇接著卡鉑的治療的抗腫瘤活性。

在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中在給予艾日布林后卡鉑在腫瘤中的藥代動力學研究

如下表1和圖4所示，艾日布林預治療組小鼠在腫瘤中具有高的卡鉑暴露。如表1所示，在艾日布林預治療組中，Cmax為溶媒B組的約2.20倍，和AUC(0-8)為溶媒B組的約1.37倍。

表1：在人乳腺癌細胞系MDA-MB-231皮下異種移植物模型中在給予艾日布林后卡鉑在腫瘤中的藥代動力學研究

其它實施方案

盡管本發明已經結合其具體的實施方案進行了描述，但將理解，其能夠進一步改變，和本申請意欲涵蓋總體上遵循本發明的原理和包括在本發明所述領域內的已知或慣常實踐內的與本公開內容的偏離的本發明的任何變化、用途或改編(adaptations)，并可適用于本文所述的必要特征。

本說明書中提及的所有出版物和專利申請通過引用結合到本文中，至如同各獨立的出版物或專利申請明確和單獨地指出通過引用以其整體結合到本文中一樣的程度。

本文中單數形式例如“a”和“the”的使用不排除指示相應的復數形式，除非上下文有相反指示。類似地，復數詞語的使用不排除指示相應的單數形式。

在以下編號的段落中進一步描述本發明。

1.用于治療患有或有風險發生乳腺癌的受試者的方法，所述方法包括給予所述受試者(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽，和隨后(ii)選自卡培他濱、抗有絲分裂劑、基于鉑的抗腫瘤劑、多柔比星和伊沙匹隆的第二種藥劑。

2.段落1的方法，其中所述受試者是人類患者。

3.段落1或2的方法，其中所述受試者經診斷患有乳腺癌、在乳腺癌治療中或在乳腺癌治療后恢復中。

4.段落1-3中任一項的方法，其中所述治療作為手術前新輔助療法進行。

5.段落1-4中任一項的方法，其中所述乳腺癌是原發性腫瘤。

6.段落1-4中任一項的方法，其中所述乳腺癌是局部晚期的。

7.段落1-4中任一項的方法，其中所述乳腺癌是轉移的。

8.段落1-7中任一項的方法，其中所述乳腺癌是雌激素受體陽性或陰性的、孕酮受體陽性或陰性的、HER-2陽性或陰性的或三陰性乳腺癌。

9.段落1-8中任一項的方法，其中艾日布林的所述藥學上可接受的鹽是甲磺酸艾日布林。

10.段落1-9中任一項的方法，其中所述艾日布林或所述其藥學上可接受的鹽通過靜脈內輸注給予。

11.段落10的方法，其中所述靜脈內輸注持續約1-約20分鐘。

12.段落11的方法，其中所述靜脈內輸注持續約2-約5分鐘。

13.段落1-12中任一項的方法，其中所述艾日布林或所述其藥學上可接受的鹽以約0.1mg/m²至約20mg/m²的范圍的量給予。

14.段落13的方法，其中所述艾日布林或所述其藥學上可接受的鹽以約1.1mg/m²或1.4mg/m²的量給予。

15.段落1-14中任一項的方法，其中所述艾日布林或所述其藥學上可接受的鹽在21天周期的第1天和第8天各自給予一次。

16.段落1-15中任一項的方法，其中艾日布林或所述其藥學上可接受的鹽的給予在所述第二種藥劑的給予之前完成。

17.段落1-15中任一項的方法，其中艾日布林或所述其藥學上可接受的鹽的給予在開始給予所述第二種藥劑后繼續進行。

18.段落1-17中任一項的方法，其中給予的所述第二種藥劑是卡培他濱。

19.段落18的方法，其中所述卡培他濱每日給予，持續2周，接著停藥1周。

20.段落1-17中任一項的方法，其中給予的所述第二種藥劑是抗有絲分裂劑。

21.段落20的方法，其中所述抗有絲分裂劑是紫杉醇或多西他賽。

22.段落1-17中任一項的方法，其中所述第二種藥劑是基于鉑的抗腫瘤劑。

23.段落22的方法，其中所述基于鉑的抗腫瘤劑選自順鉑、卡鉑和奧沙利鉑。

24.段落1-17中任一項的方法，其中所述第二種藥劑是多柔比星。

25.段落1-17中任一項的方法，其中所述第二種藥劑是伊沙匹隆。

26.段落1-25中任一項的方法，其中在1-8、2-7、3-6或4-5個劑量或全周期的所述第二種藥劑之前，給予1-8、2-7、3-6或4-5個劑量或全周期的艾日布林。

27.段落1-26中任一項的方法，其中所述治療：(i)減少癌細胞數；(ii)減少腫瘤體積；(iii)增加腫瘤消退速率；(iv)減少或減慢癌細胞侵潤至周圍器官；(v)減少或減慢腫瘤轉移；(vi)減少或抑制腫瘤生長；(vii)預防或延遲癌癥的發生和/或復發，和/或延長無疾病或無腫瘤存活時間；(viii)增加總存活時間；(ix)減少治療頻率；和/或(x)減輕與癌癥相關的一個或多個癥狀。

28.用于減少患有乳腺癌的受試者的腫瘤大小的方法，所述方法包括給予所述受試者(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽，和隨后(ii)選自卡培他濱、抗有絲分裂劑、基于鉑的抗腫瘤劑、多柔比星和伊沙匹隆的第二種藥劑。

29.用于增加選自卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，順鉑、卡鉑或奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆的藥劑在治療受試者的乳腺癌中的功效的方法，所述方法包括在所述藥劑之前給予所述受試者艾日布林或其藥學上可接受的鹽。

30.用于在患有乳腺癌的受試者中治療乳腺癌或減少腫瘤大小的藥盒，所述藥盒包括(i)艾日布林或其藥學上可接受的鹽，和(ii)選自卡培他濱、抗有絲分裂劑(例如，紫杉醇或多西他賽)、基于鉑的抗腫瘤劑(例如，順鉑、卡鉑或奧沙利鉑)、多柔比星和伊沙匹隆的第二種藥劑，任選地呈劑量形式。

其它實施方案在隨附權利要求的范圍內。