包含咪唑二肽的試劑的制作方法

本發明涉及一種試劑，其以選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種作為有效成分。本發明的試劑能夠用于認知功能改善、心理功能改善、抗老化、健康維持。本發明在一般食品、健康食品、藥品、美容、健康和醫療相關領域中有用。

背景技術：

肌肽是由β-丙氨酸和組氨酸構成的二肽，鵝肌肽是由β-丙氨酸和甲基化組氨酸構成的二肽。已知它們均含有于雞肉等中。對于肌肽和鵝肌肽的促進皮膚代謝(專利文獻1)、自主神經調節作用(專利文獻2)、緩解應激(專利文獻3)、以及提高學習機能和抗焦慮(專利文獻4)作用進行了研究。

近年來，預防與老化相伴的疾病、增強免疫力等維持健康并長壽的方面逐漸受到關注。老齡化在多數情況下伴隨著某種程度的認知功能的降低。另外，由阿茲海默氏病的發病、進展也會產生認知功能的降低。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2000-201649公報

專利文獻2：WO2002/076455公報

專利文獻3：日本特開2007-70316公報

專利文獻4：日本特開2000-116987公報

技術實現要素：

發明所要解決的課題

希望通過適當的飲食、運動、精神療法等，在日常生活中延緩老化的進行，并且能夠盡早應對與老化相伴的疾病。

食品除了作為能量源和必需營養素源(營養性)以外，還提供品嘗的樂趣(適口性)，對健康生活做出貢獻(功能性)。食品或包含食品來源的功能性成分的制品被期待在健康及美容方面發揮作用，作為健康食品等廣泛普遍地被人們所接受。從安全、安心的觀點出發，認為也優選利用具有食用經驗的天然物。

用于解決課題的手段

本發明人有效利用天然物，致力于對健康有益的食品和材料的研究開發。其中，此次發現雞肉來源的肌肽和鵝肌肽具有心理功能改善作用等，從而完成了本發明。本發明提供下述技術方案。

[1]一種用于神經心理功能的改善的試劑，其含有選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種。

[2]如[1]所述的試劑，其中，神經心理功能與阿茲海默氏病或老齡化有關。

[3]一種基于神經心理功能的改善的抗老化劑，其含有選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種。

[4]一種用于改變下述基因的表達的試劑，其含有選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種，

該基因為選自由下述基因組成的組中的至少一種：

作為轉運蛋白基因的SLC23A2、SLC43A2、SLC29A3、SLC35C1、SLC25A33、SLC25A23、SLC6A12和SLC6A13；

作為趨化因子基因的CXCL12和CCL17；

作為老化相關基因的TSPO和P2RY1；

作為神經系統基因的CAMK1；

作為線粒體系統基因的ACO2、ATP7A、POLG、IDH3G、UCP2、BCKDHA和TAP2；以及

作為抗老化基因的SMARCD1和SIRT6。

[5]如[1]所述的試劑，其具有抗炎癥作用。

[6]一種用于調控下述細胞因子的血液中濃度的試劑，其含有選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種，該細胞因子為選自由IP-10(CXCL10)、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8(CXCL8)、IL-13、G-CSF和MCP-1(CCL2)組成的組中的至少一種。

[7]如[1]所述的試劑，其對血糖值具有上升抑制作用或降低作用。

[8]如[1]所述的試劑，其對血中的胰島素濃度具有上升抑制作用或降低作用。

[9]如權利要求[1]～[8]中任一項所述的試劑，其用于使對象攝取每日量為200mg以上的選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種。

[10]一種營養組合物，其包含每日量為200mg以上的來自動物肉的咪唑二肽中的至少一種。

[11]如[10]所述的營養組合物，其中，咪唑二肽中的至少一種來自雞肉。

[12]如[1]～[11]中任一項所述的試劑或營養組合物，其中，進一步包含肌酸和核酸。

[13]如[1]～[12]中任一項所述的試劑或營養組合物，其以老年人或具有輕度情緒障礙的人作為對象。

[14]一種用于糖尿病和/或阿茲海默氏病的處置的試劑，其含有選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種。

[15]一種飲食方法，其包括使希望改善神經心理功能的對象攝取包含選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種的營養組合物的步驟。

[16]一種對象的神經心理功能的判定方法，該方法基于對象所具有的肌肽分解酶(CNDP1)活性。

[17]一種通過使對象攝取[1]～[14]中任一項所述的試劑或營養組合物而產生的神經心理功能的改善效果的預測方法，該方法基于對象所具有的CNDP1活性。

[18]一種用于檢測神經心理功能的改善或惡化的、基于下述基因的表達分析的方法，

該基因為選自由下述基因組成的組中的至少一種：

作為轉運蛋白基因的SLC23A2、SLC43A2、SLC29A3、SLC35C1、SLC25A33、SLC25A23、SLC6A12和SLC6A13；

作為趨化因子基因的CXCL12和CCL17；

作為老化相關基因的TSPO和P2RY1；

作為神經系統基因的CAMK1；

作為線粒體系統基因的ACO2、ATP7A、POLG、IDH3G、UCP2、BCKDHA和TAP2；以及

作為抗老化基因的SMARCD1和SIRT6。

[19]一種用于檢測神經心理功能的改善或惡化的試劑盒，其包含由下述堿基序列構成的核酸，該堿基序列選自由序列號1～20中的任一堿基序列的全部或一部分、以及與序列號1～20中的任一堿基序列互補的堿基序列的全部或一部分組成的組中的至少一種堿基序列。

[20]一種用于腦的功能老化和/或癡呆癥的處置的藥物組合物，其包含式I或II所表示的化合物。

【化1】

【化2】

(式I、式II中，

R¹、R²和R³各自獨立地為H或C_1-6烷基，

X為H或-COR⁴，此時R⁴為H或C_1-6烷基。)

[21]一種探索用于腦的功能老化和/或癡呆癥的處置的有效成分的方法，其使用[20]中定義的式I或式II所表示的化合物作為先導化合物。

附圖說明

圖1是心理功能檢查(BDI檢查)的結果。

圖2是心理功能檢查(評價腦老化的ADAScog檢查)的結果。表示出改善、無變化、惡化各自的比例。

圖3-1是通過咪唑二肽的攝取而使萎縮得到改善的腦部位(灰質)。將p<0.005的部位用彩色表示。

圖3-2是通過咪唑二肽的攝取而使萎縮得到改善的腦部位(白質)。

圖4是通過咪唑二肽的攝取而引起的神經回路功能的改善。伴隨著老齡化，海馬和扣帶后回的神經回路功能降低(左圖)，但在試驗飲食攝取組中，攝取后該功能降低得到了改善(右圖)。

圖5是通過咪唑二肽的攝取而變化的基因。在屬于SLC(轉運蛋白)的6個基因中，通過試驗飲食的攝取，與安慰劑飲食攝取相比，基因表達水平顯著地發生變化。除此以外，可知趨化因子類等圖中所示的各基因的表達水平發生了變化。

圖6是通過咪唑二肽的攝取而變化的血中細胞因子、趨化因子。平均值±SE，試驗飲食：實線，安慰劑：虛線，配對t檢驗，*：p<0.05，**：p<0.01

圖7是通過咪唑二肽的攝取而引起的血糖值的降低。

圖8-1是癡呆癥模型小鼠中的血中細胞因子類的減少。在含肌肽飲食組中，細胞因子類減少，暗示炎癥得到了抑制。wt：野生型，tg：轉基因，*：p<0.05，**：P<0.01(Dunnett檢驗對tgHFD)，#：p<0.05，##：P<0.01(學生t檢驗)

圖8-2是癡呆癥模型小鼠中的腦內炎癥反應的抑制(小鼠MRI圖像)。觀察到通過咪唑二肽的攝取而引起的炎癥抑制。

圖8-3是通過高功能二肽攝取而引起的膠質細胞的GABA轉運蛋白基因表達的抑制。Slc6A13：在星形膠質細胞中表達的GABA轉運蛋白2(GAT-2)、Slc6A12：在星形膠質細胞中表達的甜菜堿/GABA轉運蛋白1(BGT-1)

圖8-4是小鼠的血中胰島素濃度。在阿茲海默氏病(AD)高脂飲食組與AD高脂飲食+肌肽組的值之間確認到顯著性差異(學生t檢驗，P<0.05)。

圖9是ASL分析。

圖10是通過ASL分析在兩組間觀察到差異的部位(扣帶后回)。

圖11是邏輯記憶II的得分(60歲以上的亞組分析的結果)。兩組間的顯著性差異(P<0.01)。需要說明的是，攝取后試驗的難度遠高于攝取前試驗。

圖12是邏輯記憶II的得分(60歲以上的亞組分析的結果)。在試驗飲食組中，所有年齡的情況下功能均未降低，與此相對，在安慰劑飲食組中，具有與年齡相應地、功能降低變得顯著的傾向。

具體實施方式

[有效成分]

本發明涉及一種試劑，其以選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種作為有效成分。本說明書中，提及咪唑二肽時，除了特別記載的情況外，是指具有咪唑環的氨基酸與其它氨基酸結合而成的二肽。

本發明中所說的咪唑二肽可以用下述的式I或式II表示。

【化3】

【化4】

式I、式II中，R¹、R²和R³各自獨立地為H或C_1-6烷基，X為H或-COR⁴，此時R⁴為H、C_1-6烷基、具有或不具有取代基的芐基、或H₂C＝CH-。

式I中，R¹、R²優選任意一者為C_1-6烷基，另一者為H。式II中，R²、R³優選任意一者為C_1-6烷基，另一者為H。C_1-6烷基的優選例之一為甲基。

作為X為-COR⁴時的具體例，可以舉出甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、丙烯酰基。

關于式I或式II所表示的化合物的制造方法等，可以參考日本特表2003-520221、日本特開2006-232686、日本特表2006-504701、日本特表2008-517911、日本特表2009-512459、日本特開2010-31004、日本特開2011-37891、日本特開2011-37892、日本特開2013-165728、日本特開2014-12735等。

咪唑二肽包括肌肽、鵝肌肽、鯨肌肽和高肌肽。肌肽是由β-丙氨酸和組氨酸構成的二肽。根據構成肌肽的組氨酸的立體結構，肌肽存在L體和D體。在本發明及其說明中，僅稱為“肌肽”時，除了特別記載的情況外，是指L-肌肽、D-肌肽或它們的混合物。已知L-肌肽在人等哺乳類中以比較高的濃度存在于肌肉和神經組織中。

下面示出L-肌肽(L-carnosine、IUPAC名：(2S)-2-[(3-氨基-1-氧代丙基)氨基]-3-(3H-咪唑-4-基)丙酸)的結構。

【化5】

在一部分動物中，多見由β-丙氨酸和甲基化組氨酸構成的L-鵝肌肽。在本發明及其說明中，僅稱為“鵝肌肽”時，除了特別記載的情況外，是指L-鵝肌肽、D-鵝肌肽或它們的混合物。下面示出L-鵝肌肽(L-anserine、IUPAC名：(2S)-2-[(3-氨基-1-氧代丙基)氨基]-3-(3-甲基-4-咪唑基)丙酸)的結構。

【化6】

肌肽和鵝肌肽均為水溶性(肌肽在25℃為1g/3.1ml)。

本說明書中，在提及咪唑二肽的代謝產物時，除了特別記載的情況外，是指選自由肌肽、鵝肌肽、鯨肌肽和高肌肽組成的組中的一種咪唑二肽的代謝產物。咪唑二肽的代謝產物包括β-丙氨酸、組氨酸、甲基化組氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)。

本發明中提及“選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種”時，除了特別記載的情況外，是指咪唑二肽中的一種或兩種以上。例如，在提及“包含選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種作為有效成分”時，包括以肌肽作為有效成分而不包含其它咪唑二肽的情況、以及以肌肽和鵝肌肽作為有效成分的情況等。另外，關于“選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種”，在提及量或濃度時，除了特別記載的情況外，在存在兩種以上的咪唑二肽及其代謝產物時是指所有咪唑二肽及其代謝產物的合計的量或濃度。需要說明的是，本說明書中，在咪唑二肽及其代謝產物中，有時以使用了咪唑肽或肌肽或鵝肌肽的方式為例進行說明，但該說明也適合使用其它咪唑二肽及其代謝產物的情況。

本發明中，作為有效成分使用的咪唑二肽及其代謝產物可以是合成的物質，也可以是發酵生產的物質，還可以是由天然物獲得的物質。另外，也可以為分離得到的物質、精制得到的物質。更具體而言，咪唑二肽及其代謝產物可以來自各種動物、例如牛、馬、豬、雞、鯨、魚(例如鰹魚、金槍魚、鰻魚。優選例之一為來自雞肉。咪唑二肽及其代謝產物也可以作為天然物的提取物、濃縮物、粗精制物等含有于試劑中。

[用途、功能]

本發明的試劑能夠用于神經心理功能的改善。神經心理功能的改善包括抗抑郁(心理功能的改善)和認知功能的改善。另外，神經心理功能的改善包括與神經心理功能有關的、腦萎縮的抑制、腦功能降低的抑制(與海馬的功能連接的增強)、以及炎癥引起的神經元損傷的改善。神經心理功能也可以與阿茲海默氏病或老齡化有關。另外，神經心理功能的改善包括腦的功能老化和/或癡呆癥的處置。

本發明的試劑所產生的抗抑郁(心理功能的改善)效果可以通過BDI問卷調查(http：//www.chibatc.co.jp/catalogue/04/1/67.html)來評價。BDI問卷調查的分數高表示具有抑郁傾向，因此，例如通過在本發明試劑的攝取期間的前后進行調查并對攝取前的分數和攝取后的分數進行比較，能夠比較出心理功能改善的程度。本發明的試劑特別是對于具有輕度情緒障礙的對象能夠期待改善心理功能的效果。

本發明的試劑所產生的認知功能的改善效果可以通過ADAS-cog(Alzheimer's Disease Assessment Scale-cognitive subscale，阿茲海默氏病評定量表-認知分量表)法來評價。本發明所產生的認知功能的改善效果包括：對與老化相伴的記憶力變差的程度進行改善的情況、和對病態性的認知能力降低(癡呆癥)進行改善的情況。本發明的試劑特別是對于與阿茲海默氏病或老齡化有關的認知功能的降低能夠期待改善效果。

本發明的試劑可以用于腦萎縮的抑制、腦功能降低的抑制(與海馬的功能連接的增強)、或炎癥引起的神經元損傷的改善。對于這些障礙的效果可以通過圖像診斷等本領域技術人員熟知的方法來評價。根據本發明人的研究，在包括老年人的對象組中，腦的灰質和白質中分別觀察到萎縮的發展得到抑制的部位。這種效果未見于施用了不含鵝肌肽和肌肽的安慰劑的組中。

本發明的試劑可以用于處置腦的功能老化和癡呆癥的發病，更特定而言，可以用于預防、延遲或抑制腦的功能老化和癡呆癥的發病或者防止重癥化。這種效果可以通過對對象者的扣帶后回部位的血流變化、或以60歲以上的被測者為對象的邏輯記憶(延遲回憶任務)進行評價來確認。根據本發明人的研究可知，在以包括60歲以上的人的被測者作為對象的情況下，在包含咪唑二肽的試驗飲食攝取組中，與安慰劑飲食組相比，扣帶后回部位的血流保持有顯著性差異。另外可知，在以60歲以上的人作為被測者的情況下，在3個月試驗飲食攝取組中，與安慰劑飲食組相比，邏輯記憶的分數具有顯著性差異。

本發明的試劑可以用于改變轉運蛋白的表達。轉運蛋白是與通道、受體一同存在于細胞膜的膜蛋白，但與通道不同，轉運蛋白不僅識別內源性物質作為輸送底物，還識別包括藥物、環境化學物質在內的許多外源性物質作為輸送底物。轉運蛋白目前分為利用ATP的水解能進行輸送的ABC(ATP結合盒)家族、和不利用ATP的能量進行輸送的SLC(溶質攜帶蛋白)家族這兩種，對于人而言，已鑒定出48種ABC轉運蛋白基因和319種SLC轉運蛋白基因。因轉運蛋白的異常而產生的疾病隨著老齡化而增加，認為約10％的50歲之后的高齡化疾病相關基因與轉運蛋白有關。

本發明的試劑特別是可以用于改變選自由SLC23A2、SLC43A2、SLC29A3、SLC35C1、SLC25A33、SLC25A23、SLC6A12、SLC6A13組成的組中的至少一種、優選至少3種以上、更優選5種以上、進一步優選所有轉運蛋白的表達。表達的變化包括增加表達和減少表達。

本發明的試劑可以用于改變趨化因子的表達。趨化因子是藉由G蛋白偶聯受體表現出其作用的堿性蛋白質，是細胞因子中的一類。其引起白細胞等的游走，參與炎癥的形成。迄今為止已發現了數量眾多的趨化因子。根據結構上的不同，分類成CC趨化因子、CXC趨化因子、C趨化因子、CX3C趨化因子。迄今為止已鑒定出50種以上的趨化因子。

本發明的試劑特別是可以用于改變選自由CXCL12和CCL17組成的組中的至少一種、優選兩種趨化因子的表達。表達的變化包括增加表達和減少表達。

本發明的試劑可以用于改變老化相關基因的表達。老化相關基因作為與個體老化、細胞老化相關的基因被鑒定，迄今為止已鑒定出數量眾多的老化相關基因。

本發明的試劑特別是可以用于改變選自由TSPO和P2RY1組成的組中的至少一種、優選兩種老化相關基因的表達。表達的變化包括包括增加表達和減少表達。

本發明的試劑可以用于改變神經系統基因的表達。神經系統基因是與神經產生、神經分化等有關的基因，迄今為止已鑒定出數量眾多的神經系統基因。

本發明的試劑特別是可以用于改變神經系統基因CAMK1的表達。表達的變化包括增加表達和減少表達。

本發明的試劑可以用于改變線粒體系統基因的表達。線粒體系統基因是與線粒體生物合成、融合、TCA循環、呼吸有關的基因，迄今為止已鑒定出數量眾多的基因。

本發明的試劑特別是可以用于改變選自由ACO2、ATP7A、POLG、IDH3G、UCP2、BCKDHA和TAP2組成的組中的至少一種、優選至少3種以上、更優選5種以上、進一步優選全部線粒體系統基因的表達。表達的變化包括增加表達和減少表達。

本發明的試劑可以用于改變抗老化基因的表達。抗老化基因是實現細胞老化抑制、抗衰老的基因，迄今為止已鑒定出數量眾多的基因。

本發明的試劑特別是可以用于改變選自由SMARCD1和SIRT6組成的組中的至少一種、優選兩種趨化因子的表達。表達的變化包括增加表達和減少表達。

另外，本發明的試劑可以用于選自由IP-10(CXCL10)、IL-2、IL-5、IL-7、IL-8(CXCL8)、IL-13、G-CSF和MCP-1(CCL2)組成的組中的至少一種細胞因子的調控。調控包括使水平上升和下降。

另外，本發明的試劑還可以用于抗炎癥劑或者血糖值的上升抑制或降低。

本發明中，關于疾病或狀態，在提及“改善”或“處置”時，包括發病風險的降低、發病的延遲、預防、治療、惡化的停止和延遲。用于改善或處置的行為包括：醫生所進行的以疾病的治療為目的的醫療行為；醫生以外的人、例如營養師(管理營養師、保健師、助產士、護士、臨床檢查技師、美容人員、美容師、食品制造者、食品銷售者等所進行的非醫療行為等。另外，處置包括：特定食品的給予或攝取的推薦、飲食方法指導、保健指導、營養指導(包括對于傷病者的療養所需要的營養指導、和用于保持增進健康的營養指導)、供給飲食管理、與供給飲食相關的營養改善方面所需要的指導。本發明中的處置的對象包括人(個體)，優選為希望實施上述中任一種處置、或者需要實施上述中任一種處置的人。

需要說明的是，本發明人為了驗證咪唑二肽的有效性所產生的個體差異，測定了被測者血清中的血清肌肽分解酶(下文中稱為CNDP1)活性。活性測定的結果，確認到根據被測者的不同存在很大的個體差異。CNDP1存在于血液中，將咪唑二肽分解。因此，CNDP1會對咪唑二肽攝取后的血中咪唑二肽濃度產生影響，因而，有可能對咪唑二肽的有效性產生影響。因此認為，對象中的CNDP1的活性信息對于預先判定基于咪唑二肽的攝取的處置是否有效是有用的。因此，本發明提供一種對象的神經心理功能的判定方法，該方法基于對象所具有的肌肽分解酶(CNDP1)活性；并且提供一種通過使對象攝取本發明的試劑或營養組合物而產生的神經心理功能的改善效果的預測方法，該方法基于對象所具有的CNDP1活性。這些方法中，可以是預先確定用于判斷的基準值并根據該基準機械地進行預測的方法。

[試劑]

本發明中在提及“試劑”時，除了特別記載的情況外，包括為有效成分本身的情況、和包含有效成分及其以外的成分的情況，不包括含有選自由咪唑二肽及其代謝產物組成的組中的至少一種的現有食品、例如雞肉本身。

只要能夠發揮目標效果，本發明的試劑中可以混配有效成分以外的其它成分。其它成分可以是作為食品所允許的各種添加劑、或作為藥品所允許的各種添加劑。其示例包括賦形劑、抗氧化劑、香料、調味料、甜味料、著色料、增稠穩定劑、發色劑、漂白劑、防霉劑、膠基、苦味料等、酶、光澤劑、酸味料、乳化劑、增強劑、制造用劑、粘結劑、等滲化劑(等滲劑)、緩沖劑、助溶劑、防腐劑、穩定劑、凝固劑等。

其它成分也可以為有效成分以外的功能性成分。作為其它功能性成分的示例，可以舉出氨基酸類(例如支鏈氨基酸類、鳥氨酸)、不飽和脂肪酸類(例如EPA、DHA)、維生素類、微量金屬類、葡糖胺、軟骨素類等。

本發明的試劑由有效成分和有效成分以外的其它成分構成的情況下，關于有效成分的含量，本領域技術人員可以從制造容易性、使用容易性等方面出發進行適當設計，例如可以為0.1％～99.9％、并且可以為1％～95％、并且可以為10％～90％、進而可以為51％～90％以上。另外，作為肌肽可以為21％以上，作為鵝肌肽可以為31％以上。

如上所述，除現有的食品外，本發明的試劑的形態可以為各種形態。例如，可以為經口藥品等藥物組合物或營養組合物。另外，本發明的試劑可以添加至經口藥品等藥物組合物或營養組合物中來使用。本發明中在提及“營養組合物”時，除了特別記載的情況外，不僅包括固體物質，還包括液態的物質、例如飲料。另外，本發明中在提及“營養組合物”時，除了特別記載的情況外，包括健康食品、營養補充劑、保健功能食品(包括營養功能食品和特定保健用食品)，并且包括治療食物(起到治療目的的食物。醫生開出飲食處方，基于根據該處方由營養師等制作的菜譜而烹調的食物)、飲食療法食物、成分調整食物、低鹽食物、護理食物、低卡路里食物和減肥食物、以及用于這些食物的材料。

作為本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物的形態的示例，可以舉出散劑、細粒劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、液態制劑(包括酏劑、檸檬水劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、溶液劑、飲料劑)、凝膠狀制劑、治療食物、飲料、點心、食用肉加工品、魚貝類加工品、蔬菜加工品、副食、調味料組合物、食品添加物。

關于本發明的有效成分的攝取量，本領域技術人員可以根據進行攝取的對象的年齡、體重、性別、所適用的疾病或狀態等進行適當設計。有效成分的攝取量例如可以為200mg/天、優選為400mg/天、更優選為500mg/天以上、進一步優選為750mg/天以上。另外，可以為1,000mg/天以上、可以為2,000mg/天以上、可以為5,000mg/天以上、也可以為7,500mg/天以上。無論哪種情況，均可以為10,000mg/天以下。另外，無論哪種情況，下限值均可以為50,000mg/天以下、優選為30,000mg/天以下、更優選為20,000mg/天以下、進一步優選為10,000mg/天以下。作為有效成分，可以一次攝取上述的每一天的攝取量，也可以分成兩次以上來攝取。

關于本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物中的有效成分的量，本領域技術人員可以適當設計，例如可以為1,000mg/100g以上、優選為1,500mg/100g以上、更優選為2,000mg/100g以上、更優選為2,500mg/100g以上、更優選為3,000mg/100g以上、進一步優選為3,500mg/100g以上。無論哪種情況，均可以為50,000mg/100g以下、優選為40,000mg/100g以下、更優選為30,000mg/100g以下、進一步優選為20,000mg/100g以下。

另外，本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物也可以包含有效成分以外的成分。有效成分以外的成分例如為肌酸和核酸。關于肌酸的含量，例如一天量可以為10mg以上、優選為20mg以上、更優選為30mg以上、更優選為60mg以上、更優選為100mg以上、進一步優選為200mg以上。無論哪種情況，均可以為2,000mg以下、優選為1,000mg以下、更優選為750mg以下、進一步優選為500mg以下。關于核酸的含量，例如一天量可以為0.15mg以上、優選為0.30mg以上、更優選為0.50mg以上、更優選為1.0mg以上、更優選為2.0mg以上、進一步優選為3.0mg以上。無論哪種情況，均可以為50mg以下、優選為40mg以下、更優選為20mg以下、進一步優選為10mg以下。

在將本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物制成治療食物(起到治療目的的食物。醫生開出飲食處方，基于根據該處方由營養師等制作的菜譜而烹調的食物)、飲食療法食物、成分調整食物、低鹽食物、護理食物、低卡路里食物、減肥食物、或運動食物(包括以有氧運動中的能力增強為目的的食物、以有氧運動中的持久力增強為目的的食物、為了至比賽當天為止使身體蓄積營養的食物、比賽中用于補充營養的食物、和以恢復比賽結束后的疲勞為目的的食物)的情況下，有效成分的含量可以考慮作為一餐的攝取量來進行設計。

本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物可以反復使對象攝取，并且可以長時間使對象攝取。特別是在以增強與運動相關的能力為目的的情況下，優選在運動前攝取，并且優選日常進行攝取。

可以在本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物上進行能夠用于神經心理功能、腦的萎縮或功能降低、以及炎癥引起的神經元的損傷的表示，并且進行推薦特定對象、例如65歲以上的老年人或具有輕度的情緒障礙的人進行攝取的表示。表示可以直接或間接地進行，直接表示的示例是在制品本身、包裝、容器、標簽(label)、標簽(tag)等有形物體上進行記載，間接表示的示例包括利用網站、店鋪、展覽會、廣告牌、布告欄、報紙、雜志、電視機、收音機、郵寄物、電子郵件等場所或手段所進行的廣告和宣傳活動。

[制造方法]

本發明的試劑、藥物組合物或營養組合物可以利用各種公知的技術來制造。將有效成分調整為規定濃度的步驟可以在制造步驟的各種階段應用。本領域技術人員可以考慮有效成分的溶解性、穩定性、揮發性等來適當設計用于本發明的試劑的制造步驟。根據本發明人的研究，確認到鵝肌肽和肌肽在常溫下充分穩定，并且在180℃以下的烹調條件下充分穩定。此外確認到，在溶液狀態下至少能夠穩定地保存2年9個月。

在以雞肉提取物構成本發明的有效成分的情況下，對雞肉提取物的制造方法的一例進行具體說明，將雞肉切碎，加入溫水，根據需要調節pH，根據需要進行加熱，用幾分鐘～幾天進行提取。提取條件的一例為50℃～100℃下處理1小時～10小時。所得到的提取液可以根據需要通過硅藻土過濾、超濾等進行精制和分級。可以根據需要進行脫鹽處理、蛋白酶處理。作為原料的雞肉的部位沒有特別限定，基于大量含有肌肽和/或鵝肌肽的原因，優選包含胸肉。所得到的提取物可以通過熱風干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等進行干燥，制成干燥物。也可以進行造粒，制成顆粒。

[表達分析]

另外，本發明還提供一種用于檢測神經心理功能的改善或惡化的基于下述基因的表達分析的方法，該基因為選自由下述基因組成的組中的至少一種：作為轉運蛋白基因的SLC23A2、SLC43A2、SLC29A3、SLC35C1、SLC25A33、SLC25A23、SLC6A12和SLC6A13；作為趨化因子基因的CXCL12和CCL17；作為老化相關基因的TSPO和P2RY1；作為神經系統基因的CAMK1；作為線粒體系統基因的ACO2、ATP7A、POLG、IDH3G、UCP2、BCKDHA和TAP2；以及作為抗老化基因的SMARCD1和SIRT6。并且還提供一種用于檢測神經心理功能的改善或惡化的試劑盒，其包含由選自由序列號1～20中的任一堿基序列的全部或一部分、和與序列號1～20中的任一堿基序列互補的堿基序列的全部或一部分組成的組中的至少一種堿基序列構成的核酸。

表達分析優選對下述基因的表達進行分析：選自由SLC23A2、SLC43A2、SLC29A3、SLC35C1、SLC25A33、SLC25A23、SLC6A12和SLC6A13組成的組中的至少一種轉運蛋白基因；選自由CXCL12和CCL17組成的組中的至少一種趨化因子基因；選自由TSPO和P2RY1組成的組中的至少一種老化相關基因；選自CAMK1的神經系統基因；選自由ACO2、ATP7A、POLG、IDH3G、UCP2、BCKDHA和TAP2組成的組中的至少一種線粒體系統基因；選自由SMARCD1和SIRT6組成的組中的至少一種抗老化基因。更優選對上述所有的基因的表達進行分析。

在新藥、功能性食品成分的開發等中，下述方法受到關注：在細胞水平上對候選藥劑、成分的作用進行監控，對它們的藥效及安全性進行評價，在整個基因組范圍內捕捉藥劑施用前后在細胞中表達的基因，以基因表達量的變化定量地捕捉藥劑或成分的作用。在這種方法中，通過對由本發明提供的基因的組合進行表達分析，能夠分析出候選藥物對神經心理功能的效果。

在與表達分析有關的本發明中，作為由選自由序列號1～20中的任一堿基序列的全部或一部分、和與序列號1～20中的任一堿基序列互補的堿基序列的全部或一部分組成的組中的至少一種堿基序列構成的核酸，可以是能夠與作為檢測對象的試樣中的轉錄產物特異性雜交的探針、或者能夠作為對轉錄產物的全部或一部分進行擴增的引物而發揮功能的一對引物對。核酸可以為DNA，也可以為RNA。

在與表達分析有關的本發明中，關于由選自由序列號1～20中的任一堿基序列的全部或一部分、和與序列號1～20中的任一堿基序列互補的堿基序列的全部或一部分組成的組中的至少一種堿基序列構成的核酸的長度，在作為探針使用的情況下，例如為15堿基長以上、優選為20堿基長以上、更優選為25堿基長以上。對于探針核酸，為了能夠進行靶核酸的檢測、定量，例如可以利用放射性同位素、酶、熒光物質、發光物質進行了標記。作為探針的核酸可以固定于固相上。

作為引物使用時的核酸的長度例如為15～約100堿基長、優選為15～50堿基長，優選為設計成可擴增100bp～幾kbp的DNA片段的引物對。

所使用的核酸可以通過利用市售的DNA/RNA自動合成儀等進行化學合成來制造。另外，也可以通過在硅或玻璃等固相上直接合成核酸而制成固定有核酸的芯片(陣列)。作為以核酸探針被固定化于基板的狀態進行提供的優選方式，可以舉出DNA微陣列。

為了利用微量的試樣定量地對規定的基因簇的表達進行分析，可以使用競爭性RT-PCR或實時RT-PCR。作為分析對象的試樣，可以為由人采集的血液。

[作為先導化合物的利用]

根據本發明，提供一種探索用于神經心理功能的改善、特別是腦的功能老化和/或癡呆癥的處置的有效成分等的方法(篩選方法)，其使用上述咪唑二肽及其代謝產物作為先導化合物。先導化合物通常是指藥理活性的特性明確、通過對其進行化學改變能夠期待活性提高、毒性減弱的化合物。咪唑二肽及其代謝產物如上所述具有神經心理功能的改善、特別是腦的功能老化和/或癡呆癥的處置這樣的藥理活性，通過對其進一步進行化學改變，能夠期待活性的提高、毒性的減弱。

化學改變例如是指，通過對上述先導化合物進行化學修飾而進行先導化合物的優化。化學修飾例如可以為部分氨基酸的置換、去除、至少一個氨基酸的添加、插入。另外，可以考慮對各氨基酸的官能團添加、置換、去除；以及各氨基酸向D體氨基酸或人工氨基酸的置換等。

根據本發明，通過以咪唑二肽及其代謝產物作為先導化合物進行優化，能夠探索出在物性、藥代動力學和毒性等方面更為優異的有效成分。

下面，利用實施例對本發明進行說明，但本發明的范圍不限于實施例中記載的范圍。

實施例

[利用健康人志愿者進行的評價1]

使被測者(將28名40歲以上的健康人男女志愿者分成試驗飲食組和安慰劑飲食組這2組)攝取3個月包含雞肉來源咪唑二肽(以肌肽、鵝肌肽計，1天1000mg)的試驗飲食，在其前、中、后對腦功能的變化等進行評價。將試驗飲食和安慰劑飲食的配比(以每天量計)示于下表。

【表1】

1.抗抑郁效果(通過BDI問卷調查進行的評價)

在攝取期間的前和后，通過BDI問卷調查(http：//www.chibatc.co.jp/catalogue/04/1/67.html)對抑郁傾向進行了評價。需要說明的是，BDI問卷調查的分數高，表示具有抑郁傾向。

結果示于圖1。通過BDI分數的變化、即攝取前的分數(測試1)－攝取后的分數(測試2)對改善的程度進行了比較，結果在安慰劑組中幾乎沒有觀察到改善，與此相對，在試驗飲食組中觀察到改善傾向。另外，按照排名示出了攝取前后的變化(排名的數字越大，越得到改善)，結果試驗飲食組觀察到變化更大的傾向。健康人有時也具有輕度抑郁的傾向，認為咪唑二肽可能是通過調整GABA神經系統的功能而改善了該抑郁傾向。

2.認知功能的改善效果(基于ADAS-cog的評價)]

在攝取期間的前和后，通過ADAS-cog(Alzheimer's Disease Assessment Scale-cognitive subscale，阿茲海默氏病評定量表-認知分量表)對認知功能進行了評價。

結果示于圖2。示出了在攝取前后改善了3分以上的人、惡化了3分以上的人的比例，結果，在試驗飲食組中，改善的人數比例多于安慰劑組。

3.對于腦的萎縮等的效果

進行了基于三維T1加權圖像的腦結構分析、基于靜息態功能MRI的功能連接分析。在試驗飲食組15名、安慰劑飲食組13名的基線以及3個月后的結構變化的縱切分析中，可知：在灰質中在右額下回和左顳下回(圖3-1)、在白質中在右扣帶后回，試驗飲食組與安慰劑飲食組相比抑制了萎縮的進行(圖3-2)。

另外，在基于靜息態功能MRI的功能連接分析中，在基線中，隨著老齡化，與海馬的功能連接在扣帶后回處降低(圖4)。扣帶后回與記憶的再現有關，已知在阿茲海默氏病中其功能是最先降低的。試驗飲食組在3個月后與安慰劑飲食組相比，在該部位與海馬的功能連接得到增強。另外，該部位與在試驗飲食組中觀察到萎縮抑制效果的白質部位(圖3-2)是一致的。

4.基因表達分析

試驗飲食組使用13名(2名無法制備)被測者血液樣品(初次檢查時和中間檢查時的樣品)，安慰劑組使用全部13名被測者血液樣品(初次檢查時和中間檢查時的樣品)，利用PAXgene RNA采血管(日本Becton Dickinson、東京)進行采血后，利用PAXgene血液RNA試劑盒(Qiagen)制備高品質RNA，通過微陣列分析了基因表達的變化。

方法

微陣列利用Agilent公司(CA，USA)的全人類基因組低聚DNA微陣列(4×44K)v2來進行。

(1)標記

首先，利用PAXgene血液RNA試劑盒(Qiagen)從被測者的血液樣品提取總RNA，利用Agilent Low-Input QuickAmp標記試劑盒、單色分別對各200ng進行標記。首先，向預先準備的單色加標混合物儲存液(One-Color Spike Mix stock solution)2μL中加入200ng的總RNA 2.5μL。接著，加入T7啟動子引物0.8μL，用微量恒溫儀于65℃溫育10分鐘，之后在冰上驟冷5分鐘。進而，加入預先制備的cDNA混合母液4.7μL，利用40℃的微量恒溫儀溫育2小時，之后移至70℃的微量恒溫儀并進一步溫育15分鐘。之后，在冰上驟冷5分鐘，加入預先制備的轉錄混合母液6μL。利用40℃的微量恒溫儀遮光溫育2小時后，加入84μL的無RNA酶水使總量為100μL，進一步加入緩沖液RLT 350μL，進一步加入250μL的乙醇。接著，將全部量添加至RNeasy柱中，以13000rpm在4℃離心30秒，利用緩沖液RPE 500μL清洗2次后，最后用30μL的無RNA酶水進行洗脫。

(2)雜交

接著，按照Agilent公司推薦的操作規程進行雜交。首先，將之前洗脫的RNA與片段混合物(Fragmentation mix)混合而進行片段化，利用60℃的微量恒溫儀溫育30分鐘，立即冰冷1分鐘。接著，在該來自片段混合物的cRNA中混合2x GEx雜交緩沖液HI-RPM，制作出雜交混合物。將雜交混合物加樣至微陣列載玻片后，設置于雜交室中，并設置于分子雜交儀中，在65℃以10rpm用17小時進行雜交。

(3)微陣列載玻片的清洗和掃描

使用預先準備的基因表達清洗緩沖液進行微陣列載玻片的清洗。首先，在雜交結束前，在3個清洗用玻璃容器中的2個中裝滿基因表達清洗緩沖液1，在其余的1個中裝滿37℃的基因表達清洗緩沖液2。將雜交結束后的雜交室在第1個清洗用玻璃容器中進行分解，取出微陣列載玻片，在第2個清洗用玻璃容器中進行清洗。在第3個清洗用玻璃容器中進一步清洗微陣列載玻片后，將微陣列載玻片從水面緩慢地提起，由此使其干燥，最后設置于專用的掃描儀中，進行微陣列載玻片的掃描。

(4)數據分析

利用Agilent公司的特征提取軟件進行數據的數值化。標準化使用統計分析軟件R，通過分位數法來進行。另外，由標準化后的信號值計算出Z分數和比例，僅提取具有±2以上的變化的基因，利用注釋數據庫DAVID(http：//david.abcc.ncifcrf.gov/)對所得到的數據進行分析。

首先，向數據庫中輸入確認到變化的基因的GenBank登錄號，之后進行功能注釋聚類，對發生了基因變化的功能分別進行聚類。另外，同樣地利用DAVID進行了KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，京都基因與基因組百科全書)的通路分析。

結果

基于p<0.05的顯著性差異水平，將通過試驗飲食的攝取與安慰劑飲食組相比發生了顯著變化的基因示于圖5。由該基因表達分析的結果可知，血液細胞上存在的各種轉運蛋白分子的表達發生了大幅變化。特別是發現，通過咪唑二肽的攝取，位于淋巴細胞的膜表面的維生素C轉運蛋白(圖5中，SLC23A2)的表達量顯著地上升。另外，對于與線粒體的能量代謝相關的多個基因而言，其表達增加(作為TCA循環的酶的ACO2(順烏頭酸酶)、IDH3G(異檸檬酸脫氫酶))。利用這樣的機制，咪唑二肽有可能發揮出增進健康的作用。

在趨化因子類中，觀察到CXC趨化因子、CC趨化因子的表達降低。暗示了試驗飲食具有抑制炎癥的傾向。

另外，確認到老化相關基因的表達增強。暗示了試驗飲食所引起的老化調控。

此外，確認到抗老化基因的表達增強。暗示了試驗飲食所引起的抗老化。

已知肌肽具有肌肉疲勞改善效果，認為疲勞恢復是對肌肉中的pH進行中和的效果。但是，此次，通過試驗飲食的攝取，觀察到線粒體系統的基因的增強，因而還暗示了經由糖酵解系統的線粒體的功能增強這種對于肌肉的新功能。另外，此次獲知，作為長壽基因而已知的SIRT6的表達增強。已知該基因在小鼠個體中高度表達時，小鼠的壽命延長。因此，或許還可以期待通過咪唑二肽來延長壽命。進而，就咪唑肽的攝取導致各種SLC的基因表達發生變化這一點而言，通過與肌肽配伍食用，或許可以期待對各種生理活性物質、食物成分的應答發生變化的、所謂配伍食用效果。

5.血清中細胞因子類的濃度變化

在3個月的攝取期間，對于來自食品攝取前、攝取中(開始6周后)、期間剛結束后的被測者的血液樣品，進行了生物化學檢查、血細胞計數檢查、血糖檢查、凝血檢查。通過試驗飲食的攝取，觀察到血糖值的降低傾向。關于除此以外的指標，在攝取前后未觀察到變化，因而再次確認了試驗飲食和安慰劑飲食攝取的安全性。

另外，對于相同的血液樣品，實施了27種細胞因子、趨化因子的定量分析。利用使用了xMAP技術(Luminex公司)的基于微珠的多重分析對被測者外周血的血清中細胞因子濃度進行了定量分析。該方法使用結合在分別以不同熒光進行了標記的微珠上的特異抗體，利用流式細胞術的原理，同時對各細胞因子進行定量分析。下面示出使用了Bio-Plex Pro^TMHuman Cytokine Grp I panel 27-pLex試劑盒(Bio-Rad公司)的分析方法的概要。將各抗體微珠分注于96孔分析板中，用Bio-Plex清洗緩沖液清洗2次后，添加血清和標準溶液，遮光在室溫下于搖床上溫育1小時。用清洗緩沖液清洗3次后，加入檢測抗體溶液，遮光在室溫下于搖床上溫育30分鐘。用清洗緩沖液清洗3次后，加入PE標記鏈霉親和素溶液，遮光在室溫下于搖床上溫育10分鐘。用清洗緩沖液清洗3次后，加入檢測緩沖液，遮光振蕩10秒。利用Bio-Plex 200系統(Bio-Rad公司)測定各微珠的PE熒光強度，由使用已知試樣求出的標準曲線計算出血清中的各細胞因子濃度。對于各被測者在攝取前后利用配對t檢驗進行統計分析，將在試驗飲食組中確認到變化的細胞因子示于圖6。

可知：通過試驗飲食的攝取，以IL-8(CXCL8)為代表，IL-5、IL-7、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、MCP-1(CCL2)等許多細胞因子、趨化因子分子的血中水平顯著地降低。另一方面，還可知：IP-10(CXCL10)的血中水平通過試驗飲食攝取而顯著地上升。需要說明的是，為了使必需氨基酸量與試驗飲食相符，此次的安慰劑飲食中包含組氨酸，已知組氨酸具有抗炎癥作用。因此，對于上述分子組中的IL-5、IL-7、MCP-1(CCL2)而言，通過安慰劑飲食的攝取，其血中水平也顯著地降低。

對血糖值進行了測定。結果示于圖7。安慰劑組具有上升傾向，試驗飲食組具有降低傾向。與安慰劑組相比，試驗飲食組中具有血糖值改善的傾向。另一方面，此次的試點試驗是以健康的中老年人為對象，因此被視為糖尿病的標記分子的HbA1c(糖化血紅蛋白)在許多被測者中處于正常值的范圍內，通過試驗飲食的攝取，其值未發現變化。

[利用病態小鼠進行的評價]

對轉基因小鼠(阿茲海默氏病模型小鼠)提供高脂飲食(HFD：High Fat Diet)，誘導腦功能降低。對小鼠施用肌肽(L-組氨酸-β-丙氨酸)，評價了肌肽的影響。

將結果示于圖8-1、8-2、8-3和8-4。在含肌肽飲食組中，細胞因子類減少，暗示炎癥得到了抑制(圖8-1)。另外，由MRI檢查的結果顯示，在肌肽施用組中腦的炎癥得到了抑制(圖8-2：紅色部分)。微陣列分析的結果，在阿茲海默氏模型中觀察到的7Slc6a12、slc6a13之類的GABA轉運蛋白的表達上升在肌肽施用組中被抑制(圖8-3)。暗示了如下可能性：在阿茲海默氏病模型小鼠中，由于轉運蛋白表達上升，能夠作為遞質發揮作用的GABA量減少，而肌肽抑制GABA量的減少。

另外，使小鼠斷食一晩后，采集血液，利用試劑盒(morinaga)檢測血中胰島素濃度。血液檢查的結果可知，在肌肽施用組中，在高脂飲食施用所引起的阿茲海默氏病中觀察到的血中胰島素濃度的上升被抑制(圖8-4)。

[利用健康人志愿者進行的評價2]

與上述同樣地，使被測者(將40歲以上的健康人志愿者分成試驗飲食組和安慰劑飲食組)攝取3個月包含雞肉來源的咪唑二肽的試驗飲食，在其前、中、后對腦功能的變化等進行評價。試驗飲食和安慰劑飲食的配比(以每天量計)如表1所記載的那樣。進行了第1次試點試驗和第2次試點試驗。

第1次與第2次合在一起的被測者的合計為試驗飲食組30名、普通飲食組(安慰劑飲食組)30名(參照下表)。

【表2】

第1次試點試驗的研究參加者

【表3】

第2次試點試驗的研究參加者

1.基于MRI攝像法的分析

在第2次試點試驗中，進行了對伴隨癡呆癥的進展而變化的腦血流進行直接測定的MRI攝像法。

腦的血流變化可以利用MRI裝置通過不使用標記體而使用磁來實現血流變化的方法─動脈自旋標記法等進行測量。

將結果示于圖9和10。可知：在試驗飲食攝取組中，其血流隨著從癡呆前階段的進展和發病而發生變化的扣帶后回部位的血流變化的降低與安慰劑飲食組相比具有顯著性差異(P<0.005)。

2.亞組分析

以第1次和第2次試點試驗的被測者的亞組分析(60歲以上)為對象，對隨著從癡呆前階段的進展和發病而降低的邏輯記憶(延遲回憶任務)進行評價。

將結果示于圖11和12。可知：本試驗的情況下，由于第2次試驗的難度比第1次試驗高，因此存在第2次的分數比第1次變差的傾向，但在試驗飲食攝取組中，與安慰劑飲食組相比，以統計學上的強顯著性(P<0.01)抑制了分數變差。

由這兩個結果暗示，包含雞肉來源的咪唑二肽的試劑具有預防腦的功能老化和癡呆癥的發病的作用。

[制造例]

(1)雞肉提取物的制造

通過下述步驟制造出包含雞肉來源的咪唑二肽的試驗飲食。

利用絞肉機將雞胸肉切碎，在雞胸肉中加入相對于肉的重量為1.5倍量的溫水，在90℃加熱4小時，濃縮至Brix為20％以上后，進行硅藻土過濾和超濾，最終制備成肌肽+鵝肌肽濃度為約10％(w/v％)。

(2)膠囊劑

將肌肽1.0重量份、胎盤提取物(粉末)0.2重量份和乳糖1.3重量份混合并使其均勻后，根據常規方法填充至硬膠囊中，制造出內容量為250mg的膠囊劑(肌肽100mg/膠囊)。

(3)片劑

制造出片劑，在每一片(300mg)中，與麥芽糖、糊精、淀粉、含維生素E的植物油、低聚異麥芽糖、難消化性糊精、貝鈣、海藻糖、蔗糖酯、維生素C、檸檬酸、磷酸鈣、香料、蟲膠、煙酸、維生素K、甜味料、氯化鉀、維生素A、泛酸鈣、生物素、焦磷酸鐵、維生素B類、維生素D、碳酸鎂、葉酸一同包含肌肽、鵝肌肽混合物60mg。

序列表自由文本

序列號1：SLC23A2，NM_203327

序列號2：SLC43A2，NM_152346

序列號3：SLC29A3，NM_018344

序列號4：SLC35C1，NM_018389

序列號5：SLC25A33，NM_032315

序列號6：SLC22A23，NM_015482

序列號7：CXCL12，NM_199168

序列號8：CCL17，NM_002987

序列號9：TSPO，NM_000714

序列號10：P2RY1，NM_002563

序列號11：CAMK1，NM_003656

序列號12：ACO2，NM_001098

序列號13：ATP7A，NM_000052

序列號14：POLG，NM_002693

序列號15：IDH3G，NM_004135

序列號16：UCP2，NM_003355

序列號17：BCKDHA，NM_000709

序列號18：TAP2，NM_018833

序列號19：SMARCD1，NM_139071

序列號20：SIRT6，NM_016539