局部用抗生素制劑的制作方法

技術領域：
和發明背景本發明涉及抗生素制劑和方法，并且更具體地涉及局部用銀(II)抗生素制劑、其生產方法及其使用方法。雖然在慢性和急性局部創傷的治療上已經取得了實質性進展，但是本發明認為在配制穩定、有效的局部用抗生素制劑和醫療設備上需要進一步改進；本公開和權利要求書的主題旨在滿足這種需要。發明概述根據本發明的教導，提供了一種抗微生物制劑，其包括：(a)至少一種含銀化合物，其包括含脂肪族羧酸銀的抗微生物劑，該脂肪族羧酸銀的銀的標稱化合價為2，所述至少一種含銀化合物的平均化合價為至少1.1；和(b)載體基質；所述至少一種含銀化合物分散在該基質中。根據本發明的一個方面，提供了一種適于向皮膚組織涂敷的抗微生物制劑，該制劑包括：(a)至少一種含銀化合物，其包括至少一種羧酸銀，該羧酸鹽的銀的標稱化合價為2或至少2，所述至少一種含銀化合物的平均化合價為至少1.1；和(b)載體基質；所述至少一種含銀化合物緊密地分散在該基質中，該制劑的標準白度值為至少4.0、至少4.1、至少4.2或至少4.3個反射單位(RU)；該制劑的總銀濃度為至少0.10％、至少0.20％、至少0.30％、至少0.50％、至少0.70％、至少1.00％、至少1.5％、至少2.0％、至少2.5％或至少3.0％。根據本發明的一個方面，提供了一種適合用于向皮膚組織局部涂敷的抗微生物制劑，該制劑包括至少一種含銀化合物，其包括含至少一種羧酸銀的抗微生物劑，該羧酸鹽的銀的標稱化合價為2，所述至少一種含銀化合物的平均化合價為至少1.1。根據本發明的一個方面，提供了羧酸銀在生產用于治療局部病狀的藥劑中的用途，該羧酸銀的銀的標稱化合價為至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9或2.0或基本上為2.0。根據本發明的一個方面，提供了一種適于向皮膚組織涂敷的抗微生物制劑，該制劑包括：(a)至少一種含銀化合物，其包括含至少一種羧酸銀的抗微生物劑，羧酸銀的銀的標稱化合價為至少1.1；和(b)載體基質。根據本發明的一個方面，提供了一種生產羧酸銀(II)或羧酸銀(II)制劑的方法，所述方法包括以下步驟：(a)混合羧酸與氧化銀(II)以產生反應混合物；并且(b)加熱反應混合物以生成脂肪族羧酸銀，脂肪族羧酸銀的銀的標稱化合價為2。獲得的反應混合物或其中的羧酸銀(II)可與載體基質混合以產生羧酸銀(II)制劑。反應溫度可為至少50℃、至少60℃或至少70℃，并且更通常地，為至少80℃、至少84℃或至少86℃。反應溫度可為至多135℃、至多125℃、至多115℃、至多110℃、至多107℃、至多105℃、至多103℃、至多100℃、至多98℃、至多96℃或至多94℃。反應溫度可在60℃至110℃、80℃至110℃、80℃至105℃、84℃至105℃、84℃至100℃、84℃至98℃、84℃至96℃或86℃至96℃的范圍內。步驟(b)的至少一部分，并且更通常地，基本上在整個步驟(b)中可攪拌反應混合物。如有必要，羧酸在與氧化銀(II)混合之前可預熱。通常，在這樣混合之前使羧酸呈液體形式。可引入一種溶劑或多種溶劑以形成反應混合物的一部分。優選地，任何此類溶劑均應不受氧化銀(II)的氧化影響或很大程度上不受影響，并且可選擇以至少部分溶解羧酸。在反應混合物減輕之后減少加熱。減輕可在視覺上或用儀器觀察到。根據描述的優選實施方案中的其它特征，所述制劑呈乳膏、乳劑或軟膏的形式。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述制劑的總銀含量或所述至少一種含銀化合物的總銀含量按重量計在0.0005％至20％、0.0005％至12％、0.0005％至7％、0.0005％至3.5％、0.0005％至3％、0.0005％至2.5％、0.001％至3.5％、0.005％至3.5％、0.01％至3.5％、0.03％至3.5％、0.05％至3.5％、0.10％至3.5％、0.30％至3.5％、0.5％至3.5％、0.7％至3.5％或0.9％至3.5％的范圍內。根據描述的優選實施方案中另外的特征，按Ag4O4重量計，脂肪族羧酸鹽含量為至少0.1％，所述制劑為白色或至少乳白色。根據描述的優選實施方案中另外的特征，按Ag4O4重量計，脂肪族羧酸鹽含量為至少0.1％，所述制劑為白色或至少乳白色。根據描述的優選實施方案中另外的特征，按Ag4O4重量計，通常制劑的標準白度值為至少3.4、至少3.5、至少3.6、至少3.7、至少3.8或至少3.9個反射單位(RU)，至少在0.1％至1.7％的范圍內。根據描述的優選實施方案中另外的特征，按Ag4O4重量計，所述至少一種含銀化合物的總銀含量在0.09％至1.7％的范圍內，并且所述制劑的標準白度值為至少4.0、至少4.1、至少4.2或至少4.3個反射單位(RU)。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述至少一種含銀化合物的總銀含量按重量計在0.8％至3.4％范圍內，并且所述制劑的標準白度值為至少3.5、至少3.6、至少3.7、至少3.8或至少3.9個反射單位(RU)。根據描述的優選實施方案中另外的特征，選擇羧酸銀和載體基質，使得在標準紫外線(UV)處理后，其中所述制劑經受對240nm的UV恒定暴露12小時，所述制劑的標準白度值保持在所述處理之前所述制劑的初始白度值的0.6個RU、0.5個RU、0.4個RU、0.3個RU或0.2個RU以內。根據描述的優選實施方案中另外的特征，選擇羧酸銀和載體基質，使得在標準紫外線(UV)處理，其中所述制劑經受對240nm的UV恒定暴露12小時，所述制劑的UV后白度值保持至少3.5個反射單位(RU)、至少3.6個RU、至少3.7個RU、至少3.8個RU、至少3.9個RU、至少4.0個RU或至少4.1個RU。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述制劑含有按重量計在0.30％至3.5％、0.4％至3.5％、0.5％至3.5％、0.6％至3.5％、0.7％至3.5％、0.30％至3％、0.4％至3％、0.5％至3％或0.6％至3％范圍內的羧酸銀。根據描述的優選實施方案中另外的特征，平均化合價為至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9或約2.0。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述制劑含有少于5％、少于4％、少于3％、少于2.5％、少于2.0％、少于1.5％、少于1.2％、少于1％、少于0.8％、少于0.6％或少于0.4％的氧化鋅。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述制劑含有少于5％、少于4％、少于3％、少于2.5％、少于2.0％、少于1.5％、少于1.2％、少于1％、少于0.8％、少于0.6％或少于0.4％的增白劑如無機增白劑。根據描述的優選實施方案中另外的特征，增白劑與所述至少一種含銀化合物的重量比小于7:1、小于5:1、小于3:1、小于2:1、小于1.5:1、小于1.2:1、小于1:1、小于0.8:1、小于0.6:1、小于0.4:1、小于0.3:1、小于0.2:1、小于0.1:1或小于0.05:1。根據描述的優選實施方案中另外的特征，增白劑包括，主要包括或基本上由二價鹽或氧化物，如鈣鹽或氧化鈣或鎂鹽或氧化鎂組成。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述制劑總共含有少于10％、少于9％、少于8％、少于6％、少于4％、少于2％、少于1％、少于0.5％、少于0.2％、少于0.1％或少于0.05％的選自由氟化銀(II)(AgF2)、吡啶甲酸銀(II)(C12H8AgN2O4)或在環或芳香環中具有氮原子的任何其它含銀(II)化合物、氧化銀(I)和氧化銀(II)的含銀化合物組成的組。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述至少一種羧酸銀包括碳數或平均碳數小于40、小于38、小于36、小于34、小于33、小于32、小于31、小于30、小于29、小于28、小于27、小于25、小于23、小于22或小于21的二價或至少二價羧酸銀。根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述至少一種羧酸銀包括碳數或平均碳數大于9、大于10或大于11的二價或至少二價羧酸銀。根據描述的優選實施方案中另外的特征，碳數或平均碳數小于40而大于11、小于40而大于13、小于40而大于14、小于38而大于11、小于36而大于11、小于34而大于11、小于32而大于11、小于31而大于11、小于30而大于11、小于29而大于11、小于28而大于11或小于27而大于11根據描述的優選實施方案中另外的特征，所述制劑含有至少一種羧酸，其任選地包括標稱化合價至少為2的羧酸銀的相應羧酸，該相應羧酸與該羧酸銀的摩爾比任選地為至少0.01、至少0.025、至少0.05、至少0.1、至少0.2、至少0.5、至少1.0、至少1.5、至少2或至少3。根據描述的優選實施方案中另外的特征，羧酸鹽的烴結構選自由完全飽和、單不飽和和多不飽和結構組成的組的至少一種。根據另外的特征，羧酸鹽的骨架結構包括選自由直鏈烴鏈和支鏈烴鏈組成的組的至少一種結構。根據另外的特征，羧酸鹽的骨架結構包括選自由環結構和芳香族結構組成的組的至少一種結構。根據另外的特征，羧酸鹽包括酮-羧酸的羧酸銀。根據另外的特征，所述制劑在25℃下的粘度為至少25cP、至少100cP、至少250cP、至少500cP、至少1,000cP、至少5,000cP、至少20,000cP、至少50,000cP、至少150,000cP、至少500,000cP、至少1,000,000cP、至少3,000,000cP或至少10,000,000cP。根據另外的特征，所述制劑具有特定總銀含量，并且所述制劑中銀元素的濃度為特定總銀含量的至多50％、至多30％、至多15％、至多5％、至多3％或至多1％。根據另外的特征，載體基質包括或主要地包括含油物質，含油物質可包括或主要地包括選自由蜂蠟、礦脂、液體蠟酯、油和聚乙烯蠟組成的組的物質。附圖簡述本文僅以舉例的方式，參考附圖對本發明進行描述。現詳細地具體參考附圖，應強調的是所示細節是以舉例的方式并且僅僅是為了說明性討論本發明的優選實施方案的目的，并且是為了提供被認為是對本發明原理和概念方面最有用且易于理解的描述的內容而呈現的。就這一點而言，沒有嘗試比對基本理解本發明所需更詳細地顯示本發明的結構詳情，與附圖一起所做的描述使得本發明的幾種形式如何在實踐中體現對于本領域的技術人員顯而易見。整個附圖中，同樣的參考字符用于指示同樣的要素。圖中：圖1提供了實施例4的反應產物的電子自旋共振(ESR)譜；圖2提供了吡啶甲酸銀(II)的對比ESR譜；圖3提供了實施例6的反應產物的紅外(IR)光譜圖比對棕櫚酸原料的光譜；圖4是顯示使用金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)25923，實施例18-29的脂肪族羧酸銀(II)隨時間推移的抗菌性能的柱狀圖；圖5是顯示使用大腸桿菌(Escherichiacoli)35218，實施例18-29的脂肪族羧酸銀(II)隨時間推移的抗菌性能的柱狀圖；圖6是顯示使用白色念珠菌(Candidaalbicans)10231，實施例18-29的脂肪族羧酸銀(II)隨時間推移的抗真菌性能的柱狀圖；圖7提供了二硬脂酸銀(90％)和二山崳酸銀(10％)的混合物的ESR譜；圖8是含有(1)：Ag4O4(0.7％)；(2)：Ag2O(0.7％)；和(4)：吡啶甲酸銀(II)(0.7％)，各自處于含有蜂蠟(19.8％)和荷荷芭油(79.5％)的基質中的制劑比對在基本上相同的基質中含0.7％二硬脂酸銀的發明制劑的制劑白度的柱狀圖；圖9是含有以下物質的現有技術氧化銀(II)在經受UV暴露o之前和之后的制劑白度的柱狀圖：(1)：Ag4O4(0.1％)；(2)：Ag4O4(0.7％)；(3)：Ag4O4(1.5％)；和(4)：Ag4O4(3％)；圖10是含有以下物質的現有技術氧化銀(I)在經受UV暴露之前和之后的制劑白度的柱狀圖：(1)：Ag2O(0.1％)；(2)：Ag2O(0.7％)；(3)：Ag2O(1.5％)；和(4)：Ag2O(3％)；圖11是由Ag4O4和蜂蠟生產的發明制劑在經受UV暴露之前和之后的制劑白度的柱狀圖；圖12是含Ag4O4和各種無機增白劑的現有技術制劑在經受UV暴露之前和之后的制劑白度的柱狀圖；圖13是由Ag4O4和蜂蠟生產的發明制劑在經受UV暴露之前和之后的制劑白度的柱狀圖，一些制劑含有各種無機增白劑；以及圖14是在各種基質中含有羧酸銀(II)的發明制劑經受UV暴露之前和之后的制劑白度的柱狀圖。詳述參考附圖和所附描述可以更好地理解根據本發明的羧酸銀(II)制劑的原理、生產這些制劑的方法及其使用方法。詳細解釋本發明的至少一個實施方案之前，應理解本發明在其應用上不限于以下描述中闡述的詳情。本發明能夠有其它實施方案或能夠以不同方式實踐或實施。同樣，應理解本文采用的措詞和術語是為了描述的目的而不得視為限制。Ag4O4(四氧化四銀)相對于局部用制劑中的其它組分可特別有反應性，從而損害該制劑的穩定性。于是該制劑可不利地獲得深褐色或黑色。發明人已經發現一種制備具有抗微生物性質的羧酸銀(II)制劑的方法。此類制劑中的許多可有利地具有淺色(例如，淺黃色、棕褐色或乳白色)或白色外觀。顯著地并且與含氧化銀(II)和氧化銀(I)的制劑形成鮮明對比，本發明的制劑隨著含銀抗微生物劑的濃度增加，可不表現出暗色化，或至多不表現出輕微暗色化。發明制劑中的羧酸銀(II)通常標稱化合價為2，或至少2。該制劑中這些羧酸銀(II)的濃度可為至少20ppm并且按重量計高達15％或高達20％或更高。在一些實施方案中，這些羧酸銀(II)的濃度為至少30ppm、至少100ppm、至少0.05％、至少0.10％、至少0.3％、至少0.5％、至少0.7％、至少1％、至少2％、至少3％、至少5％、至少7％、至少10％、至少15％或至少20％。必須強調的是已經發現從抗微生物或抗生角度看，低至20ppm的濃度非常有效。在一些實施方案中，這些羧酸銀的濃度為至多10％、至多7％、至多5％、至多3.5％、至多3％或至多2.5％。在一些實施方案中，這些羧酸銀的濃度在20ppm至50％、20ppm至45％、20ppm至40％、20ppm至30％、20ppm至20％、20ppm至15％、20ppm至10％、20ppm至5％、100ppm至3％、0.05％至3％、0.1％至3％、0.2％至3％、0.3％至3％、0.5％至3％或0.7至3％的范圍內。已經發現本發明的制劑具有抗生性質，即它們可以攻擊和破壞至少一個物種或類型的微生物，同時對于人和哺乳動物細胞選擇性地表現出相對惰性。更通常地，抗生物質選擇性地攻擊和破壞通常在皮膚、創面、褥瘡等繁殖的至少一個物種或類型的微生物，同時對于人和哺乳動物的皮膚細胞表現出相對惰性。實施例現參考以下實施例，以下實施例與上面的描述一起以非限制方式說明本發明。在這些實施例中，使用的微生物：大腸桿菌35218和金黃色葡萄球菌25923及白色念珠菌10231從美國模式培養物保藏所(ATCC)獲得。關于材料和設備，氧化銀(II)從AmesGoldsmithInc.(NewJersey,USA)獲得。氧化銀(II)通常含有按重量計90％的Ag4O4，并且可含有一些AgO和Ag2O。Ag2O(目錄號S1090)，也稱為氧化銀(I)，從SpectrumChemicals(NewJersey,USA)獲得。4-苯基丁酸和2-乙基-己酸從Sigma-Aldrich獲得(分別為項號P21005和538701)。細菌計數試劑盒和FungaLightTM酵母活力試劑盒從InvitrogenInc.(Texas,USA)獲得。細菌培養液體培養基和培養基從RemelInc.(NewYork,USA)獲得。微生物振蕩培養箱(型號311DS，LabnetInc.)和Attune流式細胞儀(InvitrogenInc.)分別用于細菌培養和細菌測定。1H和13C-NMR光譜是在BrukerDPX-300分光計上獲得的。化學位移用由Me4Si(TMS)向低場移動的ppm表示，其用作內標。值在δ標度上給出。低分辨率質譜(LRMS)也是在Q-TOFmicro(WatersUK)分光計上使用ESI(電噴霧電離)獲得的。熔點是在Fisher-Johns裝置上測定的并且未校正。銀元素分析通過感應耦合等離子體(ICP)原子發射光譜法(Ultima2,JobinYvonHoriba)進行。電子自旋共振(ESR)譜是在X波段ElexsysE500EPR分光計(Bruker,Karlsruhe,Germany)上獲得的。實施例1根據本發明生產所述制劑(例如，軟膏和羧酸銀濃縮物)的示例性一般程序如下：在稱皿中稱量氧化銀(II)粉末。在反應容器中稱取通常在室溫下為固體的含羧酸的材料，并且通常加熱到在88-93℃范圍內的溫度，以獲得液體介質。將黑色氧化銀(II)粉末引入熱液體中，并用力攪拌反應混合物。繼續攪拌，同時在該階段的剩余時間將溫度維持在88-93℃下。通常，在將反應混合物維持在88-93℃時，溶液將逐漸變淡。可觀察到一般顏色進展：反應混合物的顏色可從黑色(添加氧化銀(II)之后)變成橄欖綠再變成深黃色。在許多情況下，反應混合物的顏色可繼續發展成淺黃色，并且可進一步發展成乳白色并且最終發展成白色。根據特定羧酸鹽的特性、氧化銀(II)與羧酸官能團的摩爾比、混合條件(包括粘度)和溫度，反應時間可為約1.5至48小時。任選地，可故意減少反應以便確保所述制劑中Ag4O4的存在。對于特別粘的含羧酸的材料而言，可通過引入低級羧酸(例如，C12酸)，通過引入低級(低碳數)羧酸銀(例如，C12羧酸銀(II))，或通過送回來自于先前生成的一批羧酸銀(II)的一部分產物材料來降低反應混合物的粘度。來自于實施例1的產物材料可經歷進一步配制。例如，產物材料可與油和/或液體蠟酯如荷荷芭油混合。任選地，可向制劑中摻入一種或多種羧酸銀(I)。同樣，可引入一種或多種精油如玫瑰草油。在混合物冷卻到約40℃以下期間，可繼續攪拌，通常0.5至2小時。然后將制劑倒入儲存容器中。實施例2根據本發明生產乳劑基羧酸銀(II)組合物和制劑的示例性一般程序如下：可將液體如水在配制容器中，優選與增稠劑如膨潤土或鋰蒙脫石高速混合或摻和。在引入羧酸銀(II)(優選已加熱)時，可繼續混合。任選地，可添加精油如玫瑰草油。在一些情況下，在將羧酸鹽引入配制容器之前，可加熱液體蠟酯并且與羧酸銀(II)混合。增稠劑濃度越高(例如，4-7％膨潤土)可能與乳膏越稠相關；增稠劑濃度越低(例如，1-2％膨潤土)可能與乳膏具有相對低的粘度相關。實施例3將30克蜂蠟和/或羧酸在熱板上，通常在大約100℃的溫度下熔化。蜂蠟和/或脂肪酸熔化后，添加1克AgO。應注意確保混合物不會燃燒。混合物通常從最初的深黑色變淡，最終變成淺黃色、乳白色或白色。然后使20g乳化蠟在90℃左右熔化，并且隨后添加到上述反應混合物中，并用力攪拌。然后可使溫度緩慢地降到約75℃。應注意不要使溫度降低太多，因為可引起蠟硬化。單獨地，可在高剪切摻和器中摻和680克水和70克膨潤土。然后可在高設置下摻和混合物約60分鐘。隨后，可將240克荷荷芭油添加到上述混合物中，同時繼續摻和過程操作。此時，可向乳劑中添加50克Ag-蜂蠟/羧酸乳化混合物，同時可繼續強烈摻和40分鐘。終產物可為含羧酸銀(II)的乳劑。實施例4Ag4O4(0.3克，24.22mmol)和4-苯基丁酸(芳香脂肪族羧酸)(3.97g，2.42mmol)的混合物在90℃下攪拌過夜。反應混合物最初為黑色，最終變成白色。將約10mg獲得的白色固體的樣品與水和少量濃縮氨水混合并且得到溶液的ESR譜。圖1中提供的獲得的ESR譜表明自由基如Ag+2的存在。基于下文描述的各種試驗程序，反應產物為二-4-苯基丁酸銀(II)。為了比較的目的圖2中提供了吡啶甲酸銀(II)的ESR譜。實施例5用Ag4O4(0.2克，1.61mmol)進行與實施例4中描述的反應類似的反應，而用2-乙基己酸(1.86克，10mmol)，即一種支鏈脂肪族羧酸，代替4-苯基丁酸。反應混合物最初為黑色，逐漸變淡，并且最終變成白色。對白色固體進行的13C-NMR(300MHz，DMSO-D6)在2-乙基己酸中產生ppmδ，COOH碳的化學位移為177.34ppm，而在分離的銀鹽中COO-碳的化學位移為179.4ppm。實施例6將三(3.0)克Ag4O4引入40克棕櫚酸。將反應混合物維持在90℃至110℃的范圍內過夜，產生白色蠟狀物質。將所得物質進行(IR)光譜分析并將結果與用于合成的棕櫚酸的光譜比較。圖3中提供了獲得的IR圖。波數1519和大約1420(未分辨)處的峰可表示羧酸鹽的COO-非對稱和對稱伸縮振動。1519峰完全匹配Liu等在“ThermalDecompositionProcessofSilverBehenate”,ThermochimicaActa440(2006)1–6,ElsevierPress中報道的山崳酸銀的峰。棕櫚酸樣品不存在這些峰。另外，從脂肪酸到產物在波數1703處的C＝O伸縮和在波數1296處的C-O伸縮減小，表明COOH基團的數量減少。這些證據強烈表明羧酸銀復合物的形成。實施例7-10使用1.5克含0.012摩爾銀的Ag4O4進行實施例7-10中進行的所有反應。這些反應使用正-二十二醇作為介質或媒介物進行，其中正-二十二醇和脂肪酸的重量總計40克。所用棕櫚酸含97.4％棕櫚酸；在摩爾計算中考慮到了與純凈物質的差異。表1中總結了結果。對于2:1(羧基：Ag4O4，按AgO計)及以上的摩爾比，獲得白色固體，而對于1.6:1的摩爾比，獲得淺褐色固體。似乎沒有足夠羧酸與Ag4O4反應，因此，剩余Ag4O4與溶劑反應，或可能保持部分不反應。下文提供了對于羧酸鹽中銀的化合價的額外支持。表1實施例11-14使用1.5克含0.012摩爾銀的Ag4O4進行實施例11-14中進行的所有反應。這些反應使用正-二十二醇作為介質或媒介物進行，其中正-二十二醇和脂肪酸的重量總計40克。所用山崳酸含89.3％山崳酸；在摩爾計算中考慮到了與純凈物質的差異。表2中總結了結果：表2對于高于2:1的摩爾比，獲得白色固體。在實施例13中，略少的山崳酸(少于0.3克)與Ag4O4反應，并且反應混合物變成淺褐色。同上，似乎沒有足夠羧酸與Ag4O4反應，因此，過量的Ag4O4與溶劑反應，或可能保持部分不反應。在1:1，明顯低2:1的摩爾比下，反應混合物變成褐灰色。實施例15-17實施例7的棕櫚酸銀(II)、實施例11的山崳酸銀(II)和實施例4的4-苯基丁酸銀(II)中的每一種均并入含有蜂蠟和荷荷芭油的載體基質中以生產實施例15-17的制劑(1％/20％蜂蠟/79％荷荷芭油)。制劑表現出物理和化學穩定性。在3-12個月過程期檢查棕櫚酸銀(II)(實施例15)、山崳酸銀(II)(實施例16)和(II)4-苯基丁酸銀(II)制劑中的每一種以評估長期物理和化學穩定性。未觀察到制劑降解：基本上不存在相物理離析，并且制劑隨時間推移保持其淺色/白色。其它羧酸銀(II)樣品是正在進行的老化研究的對象。各種羧酸銀(II)制劑已經在加速試驗程序中經受了紫外(UV)線。下面在實施例84-104中提供了結果連同各種對比例。實施例18-29Ag4O4和各種脂肪族羧酸之間的一系列反應通常根據實施例1中提供的合成程序進行。在每次合成中，將80克特定羧酸(范圍從C8到C26)或80克蜂蠟轉移到反應容器中。所有這些脂肪族羧酸的熔點均低于90℃。使特定羧酸或酸熔化之后，必要時，可緩慢升溫到約90-100℃。反應可相當緩慢，或在較低溫度下不能進行，并且高于約105℃，可發生各種副反應，或甚至占優勢。隨后，引入3克Ag4O4，并且在反應過程中攪拌反應混合物。觀察到一般顏色進展：反應混合物的顏色通常從黑色(添加黑色氧化銀(II)粉末之后)變成橄欖綠再變成深黃色。在許多情況下，反應混合物的顏色可繼續發展，首先發展成淺黃色，并且隨附加反應時間，發展成乳白色并且最終發展成白色。根據特定脂肪酸，反應通常似乎在約3-30小時內完成。將約320克荷荷芭油加熱至約88℃并且在反應似乎完全之后引入反應混合物中。然后勻化混合物約30秒，逐漸冷卻至約40℃，并且轉移到儲存容器中。下面表3中總結了反應結果。實施例301.最初按照ATCC指南將細菌細胞接種在311DS培養箱中裝有胰蛋白酶大豆瓊脂的培養瓶中。2.細胞需要大約30小時達到90％匯合。然后將細胞單獨接種在裝有10ml液體培養基的試管中，并且注意維持每支管中的相同細胞計數。3.對于每個實驗時間點，也接種對照管。4.在生物罩中處理無菌紙盤并且在其中仔細涂抹1％試驗制劑。5.然后將盤投入具有細菌液體培養基的試管中并且放入振蕩培養箱中。同時，將“空”盤投入對照細菌液體培養基中。6.使用各種制劑和運行長度重復該過程幾次。實施例311.使細菌受特定制劑處理指定時間點(20-180分鐘)后，將管連同相應對照一起從培養箱中取出。使用無菌鑷子，取出盤并丟棄并且5000g離心細菌30秒。2.使細菌沉淀重新懸浮在2mL新鮮胰蛋白酶大豆液體培養基中。3.此時，向細胞中添加2μL的細菌菌株(組分A)并且孵育5分鐘。4.孵育后，添加10μL的組分B，并且繼續再孵育5分鐘。然后使用流式細胞儀分析樣品。流式細胞儀提供了作為對照百分比的結果，并且用其作為標度，可用數學方法確定細胞的數量。5.基于用菌株的可染性，確定細菌計數。每2周使用一個新試劑盒，因為組分在約15天之后開始降解。使用上面提到的技術，分析細胞的細胞活力并且如下文所提供的那樣，記錄結果。實施例32-41脂肪族羧酸銀(II)的抗菌性能--金黃色葡萄球菌使用以上提供的技術，使用金黃色葡萄球菌25923，評價實施例18-29的大多數脂肪族羧酸銀(II)的抗菌性能。在圖4的柱狀圖中示出了隨時間推移的結果。在4小時測量過程中，10種含銀(II)制劑全部表現出抗菌活性。10種制劑中，碳數高于C12的那些似乎特別有效，使得在4小時后，微生物計數降低到對照值的約1/5至1/3。實施例42-51使用以上提供的技術，使用大腸桿菌35218，評價實施例18-29的大多數脂肪族羧酸銀(II)的抗菌性能。在圖5的柱狀圖中示出了隨時間推移的結果。在4小時測量過程中，10種含銀(II)制劑全部表現出抗菌活性。10種制劑中，碳數高于C12的那些似乎特別有效，使得在4小時后，微生物計數降低到對照值的約0至1/3。實施例521.用特定制劑處理真菌樣品指定時間點(20-180分鐘)后，將管連同相應對照一起從培養箱中取出。使用無菌鑷子，取出盤并丟棄并且1000g離心真菌樣品60秒。2.使真菌沉淀重新懸浮在2ml新鮮沙氏液體培養基中。3.此時，向細胞中添加10μL的FungaLightTM酵母活力試劑盒并且孵育5分鐘。4.然后使用流式細胞儀分析樣品。流式細胞儀提供了作為對照百分比的結果，并且用其作為標度，可用數學方法確定細胞的數量。5.基于用FungaLightTM酵母活力試劑盒的可染性確定真菌計數。每2周使用一個新試劑盒，因為組分在約15天之后開始降解。實施例53-62使用以上提供的技術，使用白色念珠菌10231，評價實施例18-29的大多數脂肪族羧酸銀(II)的抗真菌性能。在圖6的柱狀圖中示出了隨時間推移的結果。在4小時測量過程中，10種含銀(II)制劑全部表現出抗真菌活性。10種制劑中，碳數高于C12的那些似乎特別有效，使得在6小時后，微生物計數相對于對照值通常降低多于1/2，更通常降低約60-75％。實施例63合成程序通常根據實施例1中提供的程序進行。在反應容器中將30克棕櫚酸加熱到約98℃。隨后，引入3克Ag4O4，并且在約48小時過程中攪拌反應混合物。反應混合物的顏色，從最初黑色氧化銀(II)粉末的黑色，最終變成白色。生成的濃縮棕櫚酸銀(II)(也稱為二棕櫚酸銀(II))的計算濃度為約46％，其余部分主要由過量棕櫚酸組成。實施例64通常根據實施例3中提供的程序制備乳劑。向高剪切摻和器中引入約680克水，并且向其中添加70克膨潤土。可在高設置下摻和混合物60分鐘。在燒杯中，將240克荷荷芭油加熱到約93℃，并且引入10克實施例62的濃縮棕櫚酸銀(II)制劑。然后勻化混合物1分鐘。然后將這種混合物添加到水-膨潤土基質中，并且高速攪拌新混合物約40分鐘。獲得的制劑是含有大約0.5％棕櫚酸銀(II)的乳劑。實施例65根據實施例64中提供的程序制備乳劑，但是僅引入2克實施例63的濃縮棕櫚酸銀(II)制劑。獲得的制劑是含有大約0.1％棕櫚酸銀(II)的乳劑。實施例66-68使用實施例1中描述的方法，將1.4克Ag4O4引入加熱的蜂蠟中，混合以產生羧酸銀(II)。然后將50克于蜂蠟中熔化的羧酸銀(II)添加到50克先前熔化的礦脂(實施例66)、AC-629(實施例67)和椰油(實施例68)中，在單獨容器中，加熱到約80℃。然后勻化和冷卻每種混合物。發現三種軟膏全部起到有力抗微生物劑的作用。實施例69-71如先前實施例中所述，將Ag4O4引入加熱的蜂蠟中。然后將10克于蜂蠟中熔化的羧酸銀(II)添加到50克先前熔化的礦脂(實施例69)、AC-629(實施例70)和椰油(實施例71)中，在單獨容器中，加熱到約80℃。然后勻化和冷卻每種混合物。發現三種軟膏全部起到有力抗微生物劑的作用。實施例72通常根據實施例1，但是使用可商購的棕櫚酸銀(I)制備基于羧酸銀(I)和荷荷芭油的軟膏。發現含按重量計約2.2％羧酸銀的軟膏表現出抗微生物活性。實施例73通常根據實施例66，但是使用可商購的硬脂酸銀(I)，而不是使氧化銀(II)與蜂蠟反應，制備基于羧酸銀(I)的軟膏。發現含按重量計約1.3％羧酸銀的軟膏表現出抗微生物活性。實施例74來自于實施例22的棕櫚酸銀(II)和來自于實施例72的棕櫚酸銀(I)單獨加熱并且按1:6比率混合以產生混合的羧酸銀(I)-羧酸銀(II)制劑。發現所得制劑表現出抗微生物活性。實施例75來自于實施例21的月桂酸銀(II)和來自于實施例72的棕櫚酸銀(I)單獨加熱并且按1:9比率混合。發現所得制劑表現出抗微生物活性。實施例76對乳膏或軟膏中與銀結合的有機酸的測定及對其中發現的羧酸銀中的銀離子氧化態的測定可如下進行：將乳膏樣品與甲苯混合以去除親脂性物質，留下固體或半固體相中的有機鹽。離心混合物并且輕輕倒出上清液。用醚洗滌殘渣以去除剩余微量的甲苯，并干燥殘渣。然后將殘渣與過量三氟乙酸混合，以將任何羧酸銀轉化為三氟乙酸銀，并且使羧酸鹽呈相應的游離羧酸釋放。蒸發獲得的混合物。將殘渣與醚混合并離心，并且分離和蒸發上清液。通過1H-NMR(300MHz，CDCl3)分析醚蒸發之后獲得的殘渣。殘渣產生具有以下特征的光譜：ppmδ0.90(t,3H),1.25(bs,28H),1.61(q,2H),2.24(t,2H)，這表明存在的化合物為硬脂酸。然而，1.25ppm下峰的積分指示存在少量額外的氫，這可歸因于少量(少于存在的酸的10％)的山崳酸。將乳膏與甲苯混合后獲得的第二份殘渣樣品(207mg)溶于少量濃硝酸中。用醚洗滌硝酸溶液，將醚輕輕倒出，并用水稀釋水相。通過ICP的銀元素分析揭示獲得的銀的量(33.6mg/L)在約97％精確度內，對應于二硬脂酸銀(90％)和二山崳酸銀(10％)的混合物中銀的計算濃度。207mg殘渣，由90/10二硬脂酸鹽/二山崳酸銀鹽組成時，產生32.5mg/L的銀計算值。這個32.5mg/L的理論值在33.6mg/L的測量值的3％以內，表明銀離子的氧化態為Ag+2。獲得的鹽是Ag+1離子的鹽，207mg殘渣中銀的計算量將為49mg/L。而且，圖7中提供的獲得的ESR譜似乎確認了Ag+2的存在。實施例77如下評價制劑反射率、亮度或白度：通常使用金屬抹刀將大約1克特定樣品(通常為軟膏或乳膏)涂在5cmx5cm面積的白色棉布上并且均勻分布。使用LabScanXE分光光度儀(HunterLab,VA)評價每份樣品的反射率。該儀器的工作原理涉及光反射的性質。布樣儲存在完全黑暗的容器中。為測量反射率，該儀器將樣品暴露于受控制、可重復的光脈沖。樣品的亮度通常與反射率相關：值越高對應的樣品越亮。分光光度計的波長范圍為375nm至750nm并且光學分辨率為10nm。分光光度計使用0°/45°幾何角度測量反射顏色。實施例78如下，根據對紫外線的暴露時間評價制劑反射率：使用實施例74中描述的LabScanXE分光光度計。每份樣品持續暴露于照明源產生的紫外線。持續的UV暴露是通過分發的254nm、6WUV燈泡。UV源與樣本或制劑之間的距離為18英寸(約45.7cm)。樣品制備基本上與實施例74中描述的相同。初始測量(“時間0”)之后，在對紫外線的暴露過程中，通常在12或24小時后進行另外的測量。實施例79-83圖8是描繪含有(1)：Ag4O4(0.7％)；(2)：Ag2O(0.7％)；和(4)：吡啶甲酸銀(II)(0.7％)，各自處于含有蜂蠟(19.8％)和荷荷芭油(79.5％)的基質中的制劑比對在基本上相同的基質中含0.7％二硬脂酸銀的發明制劑的制劑白度的柱狀圖。實施例84-87圖9是描繪含有以下物質的現有技術制劑的制劑白度的柱狀圖：(1)：Ag4O4(0.1％)；(2)：Ag4O4(0.7％)；(3)：Ag4O4(1.5％)；和(4)：Ag4O4(3％)，各自處于含有約4:1重量比的荷荷芭油和蜂蠟的基質中。在UV暴露之前的初始測量之后，在暴露于紫外線12小時之后進行另外的測量(參見實施例77-78)。實施例88-91圖10是描繪含有以下物質的現有技術制劑的制劑白度的柱狀圖：(1)：Ag2O(0.1％)；(2)：Ag2O(0.7％)；(3)：Ag2O(1.5％)；和(4)：Ag2O(3％)，各自處于含有約4:1重量比的荷荷芭油和蜂蠟的基質中。在UV暴露之前的初始測量之后，在暴露于紫外線12小時之后進行另外的測量(參見實施例77-78)。實施例92-95圖11是描繪根據本發明的制劑的制劑白度的柱狀圖，該制劑含有：(1)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計0.1％)；(2)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計0.7％)；(3)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計1.5％)；和(4)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計3％)；各自置于含有約4:1重量比的荷荷芭油和蜂蠟的基質中。羧酸銀(II)由Ag4O4和蜂蠟生成。在UV暴露之前的初始測量之后，在暴露于紫外線12小時之后進行另外的測量(參見實施例77-78)。實施例96-98圖12是描繪含有以下物質的現有技術制劑的制劑白度的柱狀圖：(1)：5％ZnO和0.7％Ag4O4；(2)：5％MgO和0.7％Ag4O4；和(3)：5％TiO2和0.7％Ag4O4，各自處于含有約4:1重量比的荷荷芭油和蜂蠟的基質中。在UV暴露之前的初始測量之后，在暴露于紫外線12小時之后進行另外的測量(參見實施例77-78)。實施例99-101圖13是描繪根據本發明的制劑的制劑白度的柱狀圖，該制劑含有：(1)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計0.7％)和5％ZnO；(2)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計0.7％)和5％MgO；和(3)：羧酸銀(II)(按Ag4O4計0.7％)和5％TiO2；各自置于含有約4:1重量比的荷荷芭油和蜂蠟的基質中。羧酸銀(II)由Ag4O4和蜂蠟生成。在UV暴露之前的初始測量之后，在暴露于紫外線12小時之后進行另外的測量(參見實施例77-78)。實施例102-104圖14是描繪根據本發明的制劑的制劑白度的柱狀圖，該制劑含有：(1)：在礦脂基質中的羧酸銀(II)(0.7％按Ag4O4計)；(2)：在AC-629基質中的羧酸銀(II)(0.7％按Ag4O4計)；(3)：在椰油基質中的羧酸銀(II)(0.7％按Ag4O4計)。羧酸銀(II)由Ag4O4和蜂蠟生成。在UV暴露之前的初始測量之后，在暴露于紫外線12小時之后進行另外的測量(參見實施例77-78)。實施例105-113根據為實施例21-29提供的程序，但是用2.4克氧化銀(II)(而不是3克)制備羧酸銀(II)制劑。儲存在氣密性塑料儲存容器中之后，以三個月一次的方式監測制劑的顏色和紋理。在室溫下儲存3個月、6個月、9個月或1年后這些制劑未表現出分相或變暗/顏色變化。至今為止，儲存14個月后，制劑看上去與相似的、新生產的羧酸銀(II)制劑基本上相同。而且，老化制劑繼續表現出很強的抗微生物活性。實施例114病毒測定方案接種健康的NRK52E(大鼠腎上皮細胞)：1.制備三種基本上相同的細胞基液，每份溶液在生長培養基中具有1·106個細胞/mL：溶液1：對照溶液；溶液2：向第二種基液引入約0.1重量％的含有0.7％羧酸銀(II)(按AgO計)、0.2％含醇(67％)、水(33％)的液體和微量金鐘柏樹皮提取物的發明順勢療法、疣制劑，全部組分置于含有約3.5:1荷荷芭油與蜂蠟的基質中。溶液3：向第三種基液引入約0.1重量％的含0.7％羧酸銀(II)(按AgO計)和水楊酸(12％)的發明疣棒(wartstick)，羧酸銀(II)和水楊酸兩者置于含有約5:1荷荷芭油與蜂蠟的基質中。2.渦旋全部三種溶液；3.向6孔板添加1.0mL生長培養基；和4.在37℃、5％CO2培養箱內孵育板。約12-24小時后，細胞應約90-100％匯合。制備用于感染的腺病毒：1.準備4支管，每支管裝有2mL的PBS；2.向第一支管添加20μL病毒樣品；3.充分渦旋。用病毒感染細胞：1.從每個孔吸取并丟棄5mL培養基。現在每個單層中應保留1mL培養基；2.向每個孔添加100uL病毒溶液；此時應有三張6孔板：對照、具有順勢治療劑的terrasil和具有水楊酸的terrasil，各自感染腺病毒。3.在37℃下孵育感染的單層24小時。瓊脂覆蓋層：1.通過在121℃下高壓滅菌20分鐘，制備在蒸餾水中的4％瓊脂糖無菌溶液。2.將瓊脂糖冷卻到37℃；3.向三份樣品的每個孔輕輕覆蓋3mL瓊脂糖，并且允許固化15分鐘。4.將板移到37℃下具有10％CO2的加濕培養箱中；感染48-72小時后將可見深紫色斑塊。斑塊肉眼可見并且可以通過將孔板放在光源之上計數。實施例115-116病毒測定--結果樣品編號斑塊大致數量對照67實施例114：21實施例115：13實施例117Ag4O4和亞油酸(多不飽和ω-6脂肪酸)之間的反應通常根據實施例1中提供的合成程序進行。亞油酸，在室溫下為液體，在反應容器中加熱到約93℃。隨后，引入3.75克Ag4O4，并且在反應過程中攪拌反應混合物。在添加黑色氧化銀(II)粉末之后，反應混合物的顏色逐漸從深灰色變成黃色至乳白色。生成的白色固體可與液體分離，并且展示抗微生物功效。實施例118Ag4O4和油酸(單不飽和脂肪酸)之間的反應根據實施例117中提供的合成程序，使用等量的Ag4O4和脂肪酸進行。在添加黑色氧化銀(II)粉末之后，反應混合物的顏色逐漸從深灰色變成黃色至乳白色。生成的白色固體可與液體分離，并且展示抗微生物功效。亞油酸的轉化似乎比油酸的轉化更快發生。發明人相信在本發明的制劑中，酮部分可沿著烴鏈的長度取代氫部分(除距離酸部分1-2個位置內)。合成期間此類結構很大程度上不受氧化銀(II)攻擊。類似地，鹵素部分，最通常為氯部分，一般可沿著烴鏈的長度取代氫部分。發現本文提供的方法特別適合羧酸，并且更具體地，適合熔點低于105℃并且更通常低于102℃、低于100℃、低于98℃、低于96℃、低于93℃或低于90℃的脂肪族羧酸如脂肪酸。熔點遠低于這些溫度的羧酸趨向于轉化為具有更高便利性的(Ag+2)羧酸鹽。單不飽和和多不飽和酸的轉化相對于相應的飽和酸可以相對便利性發生。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，關于化學劑或制劑的術語“抗微生物”是指對微生物有害，或抑制其生長的物質。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“抗生素”是指選擇性攻擊和破壞至少一個物種或類型的微生物，同時對于人和哺乳動物細胞表現出相對惰性的物質。更通常地，抗生物質選擇性地攻擊和破壞通常在皮膚、創面、褥瘡等繁殖的至少一個物種或類型的微生物，同時對于人和/或哺乳動物的皮膚細胞表現出相對惰性。術語“抗生素”特別意在排除抗微生物防腐劑，抗真菌防腐劑和抗菌防腐劑兩種。此類抗真菌防腐劑包括但不限于諸如苯甲酸和抗壞血酸及其堿式鹽的化合物，及諸如對羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯(尼泊金(parabens))的酚類化合物。抗菌防腐劑包括但不限于諸如季銨鹽、醇、苯酚、汞劑和雙胍的化合物。術語“抗生素”特別意在排除諸如食鹽等抗微生物防腐劑、醋、硝酸鈉、亞硝酸鈉和亞硫酸鹽。術語“抗生素”特別意在包括但不限于氧化銀如氧化銀(I)和氧化銀(II)、磺胺嘧啶銀，和在嚴重皮膚創傷如褥瘡、皮膚潰瘍和刺傷的治療中有效，或在普通皮膚創傷的治療中有效的任何其它局部用抗生素。術語“抗生素”特別意在包括“傳統的”局部用抗生素如桿菌肽(Bacitracin)、新霉素(Neomycin)、紅霉素(Erythromycin)和氯霉素(Chloramphenicol)。另外的局部用抗生物質可對于本領域的普通技術人員顯而易見。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，關于抗生物質或制劑的術語“治療有效量”是指足以在至少一種局部感染的治療中產生積極結果的量。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，關于制劑或醫療設備中的抗生物質的術語“治療有效濃度”是指制劑或醫療設備中足以在至少一種局部感染的治療中產生積極結果的抗生素的濃度。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，除非另有特別說明，否則術語“百分比”或“％”是指重量百分比。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“按Ag4O4重量計”是指通過材料中銀重量含量乘以(AgO/Ag)因數或約1.148得到的重量基位。類似地，如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，除非另有特別說明，否則術語“比率”是指重量比。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“氧化銀(II)”是指單位結構含有基本上1:1摩爾比的銀和氧的氧化銀。術語“氧化銀(II)”特別意在包括Ag4O4(常常表示為Ag2O3·Ag2O)和AgO。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，關于羧酸銀中的銀的術語“標稱化合價”，是指羧酸銀化合物(分子、鹽、復合物等)中的銀的平均化合價。因此，舉例而言，在表示為Ag(OOCR)3·AgOOCR的羧酸銀(II)中銀的標稱化合價將為2。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，關于羧酸的術語“相應”是指羧酸銀的酸形式。因此，棕櫚酸是棕櫚酸銀相應的羧酸。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“含銀化合物”特別意在排除金屬銀(Ag0)。術語“含銀化合物”特別意在包括解離銀物質和/或形成復合物的銀物質。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“氧化銀(I)”是指單位結構含有基本上2:1摩爾比的銀和氧的氧化銀。術語“氧化銀(I)”特別意在包括Ag2O。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“標準白度值”等意在指實施例77中描述的程序。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，術語“標準紫外線(UV)處理”等意在指實施例78中描述的程序。如本文在說明書和以下權利要求部分中所用，關于制劑中的組分的術語“很大程度上包括”、“很大程度上由......組成”等是指按重量計至少30％的含量；術語“主要包括”、“主要由......組成”等是指按重量計至少50％的含量；術語“主要地包括”、“主要地由......組成”等是指按重量計至少65％的含量。應認識到為清楚起見在單獨實施方案的上下文中描述的本發明的某些特征也可在單個實施方案中呈組合提供。相反，為簡潔起見在單個實施方案的上下文中描述的本發明的各種特征也可單獨地或呈任何合適的子組合提供。雖然已經連同其具體實施方案一起描述了本發明，但是顯然對于本領域的技術人員而言許多替代方案、修改和改變將顯而易見。因此，旨在囊括屬于所附權利要求的精神和廣泛范圍的所有此類替代方案、修改和改變。當前第1頁1 2 3