本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種治療燙傷的組合物，更具體地，本發明涉及主要有效成分包括3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)2-莰醇的組合物，其在治療燙傷中的應用。
背景技術：
燙傷是一種伴隨著局部和遠隔組織器官強烈炎癥反應、組織損傷和感染的創傷后炎癥性疾病。多種原因會導致燙傷患者不能及時有效地進行液體復蘇，而延遲復蘇將產生大量氧自由基，對機體細胞造成嚴重損害。
3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，商品名：依達拉奉，其結構式：
分子式：C10H10N2O；分子量：174.20
依達拉奉為自由基清除劑，可清除羥自由基、一氧化氮自由基及ONOO-離子，抑制TNF-α、IL-1β、COX-2及iNOS等炎癥相關蛋白表達，抑制脂質過氧化，從而抑制燙傷延遲復蘇后大量氧自由基產生所引起的氧化損傷。
(+)2-莰醇是一味常用的中藥，具有“回蘇開竅、芳香走簾、引藥上行”之功，常做“引藥”以增加其他藥物的治療效果。
技術實現要素：
本發明涉及一種治療燙傷的復方藥物組合物。具體地，本發明提供了主要有效成分包括3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)2-莰醇的組合物，以及該組合物在治療燙傷中的應用。
本發明提供一種治療燙傷的組合物，包括有效量的3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇。其中(+)-2-莰醇為市售的(+)-2-莰醇，純度一般在99％以上，其非主要成分的減少降低了毒副作用。
在本發明的一些實施方案中，該組合物中3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇的重量比為16:1～1:16，進一步優選重量比為8:1～1:8，更進一步優選重量比為4:1～1:4。3-甲基 -1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇的重量比可選自16:1，8:1，4:1，2:1，1:1，1:2，1:4，1:8，1:16等。
在本發明的另一些實施方案中，該組合物可以為搽劑，可以含有溶劑，可以使3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇更好地混合。所述溶劑可以選用水溶性有機溶劑、或者水溶性有機溶劑與水的混合物。
優選地，所述水溶性有機溶劑為醇類溶劑、醚類溶劑或酮類溶劑。
進一步優選地，所述醇類溶劑為乙醇、異丙醇、乙二醇、丙二醇、甘油或聚乙二醇；所述醚類溶劑為乙二醇單乙基醚或乙二醇單丁基醚；所述酮類溶劑為丙酮或N-甲基-2-吡咯烷酮。
更優選地，所述水溶性有機溶劑為甘油。
另一方面，本發明提供了上述組合物及其搽劑在制備治療燙傷中的應用，也涉及3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在制備與(+)-2-莰醇聯用藥品中的應用。
優選地，所述燙傷為嚴重燙傷后延遲復蘇損傷。
定義
“有效量”是指足以顯示其對于所施用對象益處的劑量。
具體實施方式
本發明公開了一種包括3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇的組合物及其搽劑，及其在制備治療燙傷中的應用。本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的產品及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。
本發明實施例中提及的依達拉奉是指3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮(來源：南京先聲東元制藥有限公司)。(+)-2-莰醇(來源：吉安市林科天然冰片廠)純度在99％以上。
實施例1 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩 緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例2 (+)-2-莰醇搽劑的制備
取(+)-2-莰醇2g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例3 (+)-2-莰醇搽劑的制備
取(+)-2-莰醇1g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例4 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(16:1)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮8g，(+)-2-莰醇0.5g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例5 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(8:1)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮4g，(+)-2-莰醇0.5g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例6 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(4:1)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(+)-2-莰醇0.5g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例7 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(2:1)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(+)-2-莰醇1g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例8 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(1:1)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮1g，(+)-2-莰醇1g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例9 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(1:2)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮1g，(+)-2-莰醇2g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例10 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(1:4)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮0.5g，(+)-2-莰醇2g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例11 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(1:8)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮0.5g，(+)-2-莰醇4g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使 之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例12 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮和(+)-2-莰醇(1:16)搽劑的制備
取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮0.5g，(+)-2-莰醇8g，加入200g的甘油溶液中，攪拌使之完全溶解，緩緩加入注射用水使之溶劑并至500ml，即得。
實施例13 對大鼠嚴重燙傷延遲復蘇模型的保護的作用
1、依達拉奉/(+)-2-莰醇(1:4，1:1，4:1)對大鼠嚴重燙傷延遲復蘇模型的保護作用
1.1材料與方法
1.1.1實驗動物
Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清潔級，體重180-200g。
來源：上海斯萊克實驗動物有限責任公司，許可證號：SCXK(滬)2007-0005
1.1.2受試藥品
實施例1、實施例2、實施例6、實施例8、實施例10所配置處方。
1.1.3方法
1.1.3.1燙傷模型的制備
大鼠以戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，背部刮毛后浸入100℃沸水持續20s，造成30％TBSA Ⅲ度燙傷。大鼠傷后7h、9h、17h分別腹腔給于相當于總補液量體積1/2、1/4、1/4體積的生理鹽水，補液總量按4ml*kg-1*％TBSA-1(Parkland公式)計算。
1.1.3.2動物分組與給藥
實驗動物分為5個組方比例組(依達拉奉/(+)-2-莰醇重量比例分別為1:4、1:1、4:1，各組的給藥劑量均為3mg/kg)，模型組及正常對照組，共7組。制備大鼠30％TBSA Ⅲ度燙傷后，將大鼠機率均等單盲分配至各組，每組12只。大鼠于燙傷后立即涂搽給藥1次，之后每間隔3h給藥1次，共給藥3次，模型組大鼠及正常對照組大鼠給于等體積的生理鹽水。于燙傷后24h取主要臟器(肝、腎、肺)進行臟器水腫學檢測；腹主動脈取血測相關血生化學指標(ALT、AST、BUN、CREA、MDA和SOD)。
1.1.3.3統計學分析
定量資料表示為均值±標準差(X±SD)。采用Stutent t-test檢驗測定兩組間的差異顯著性。將差異P<0.05定義為差異顯著。
1.2實驗結果
1.2.1對臟器水腫的影響
各主要臟器水腫情況見表1。與正常組大鼠相比，模型組大鼠燙傷后，臟器(肝、肺、 腎)均表現出明顯的水腫(p<0.001)；與模型組、依達拉奉組和(+)-2-莰醇組相比，依達拉奉/(+)-2-莰醇的三種重量比例1:4、1:1、4:1均能顯著改善燙傷后大鼠主要臟器(肝、肺、腎)的水腫情況(p<0.01，p<0.001)，復方組合物取得了協同作用。
表1.依達拉奉與(+)-2-莰醇復方用藥對燙傷動物臟器水腫情況的影響
X±SD，###p<0.001，##p<0.01與正常組相比；***p<0.001，**p<0.01，與模型組相比。
1.2.2對相關生化指標的影響
對相關生化指標的影響見表2，與正常組大鼠相比，模型組大鼠燙傷后，各主要生化指標(ALT、AST、BUN、CREA)均表現出顯著性變化(p<0.001)；與模型組、依達拉奉組和(+)-2-莰醇組相比，依達拉奉/(+)-2-莰醇的三種重量比例1:4、1:1、4:1均能顯著改善燙傷后大鼠各生化指標的改變情況(p<0.01，p<0.001)，復方組合物取得了協同作用。
表2.依達拉奉與(+)-2-莰醇復方用藥對相關生化指標的影響
X±SD，###p<0.001，與正常組相比；***p<0.001，**p<0.01，與模型組相比。
2、依達拉奉/(+)-2-莰醇(4:1，8:1，16:1)對大鼠嚴重燙傷延遲復蘇模型的保護作用
2.1材料與方法
2.1.1實驗動物
Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清潔級，體重180-200g。
來源：上海斯萊克實驗動物有限責任公司，許可證號：SCXK(滬)2007-0005
2.1.2受試藥品
實施例1、實施例2、實施例4、實施例5、實施例6所配置處方。
2.1.3方法
實驗方法及分析評價方法同1.1.3。
2.2實驗結果
2.2.1對臟器水腫的影響
各主要臟器水腫情況見表3。與正常組大鼠相比，模型組大鼠燙傷后，臟器(肝、肺、腎)均表現出明顯的水腫(p<0.001)；與模型組、依達拉奉組和(+)-2-莰醇組相比，依達拉奉/(+)-2-莰醇的三種重量比例4:1、8:1、16:1均能顯著改善燙傷后大鼠主要臟器(肝、肺、腎)的水腫情況(p<0.01,p<0.001)。
表3.依達拉奉與(+)-2-莰醇復方用藥對燙傷動物臟器水腫情況的影響
X±SD，###p<0.001，與正常組相比；***p<0.001，**p<0.01，與模型組相比。
2.2.2對相關生化指標的影響
對相關生化指標的影響見表4，與正常組大鼠相比，模型組大鼠燙傷后，各主要生化指標(ALT、AST、BUN、CREA)均表現出顯著性變化(p<0.001)；與模型組、依達拉奉組和(+)-2-莰醇組相比，依達拉奉/(+)-2-莰醇的三種重量比例4:1、8:1、16:1均能顯著改善燙傷后大鼠各生化指標的改變情況(p<0.01，p<0.001)。
表4.依達拉奉與(+)-2-莰醇復方用藥對相關生化指標的影響
X±SD，###p<0.001，與正常組相比；***p<0.001，**p<0.01，與模型組相比。
3、依達拉奉/(+)-2-莰醇(1:4，1:8，1:16)對大鼠嚴重燙傷延遲復蘇模型的保護作用
3.1材料與方法
3.1.1實驗動物
Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清潔級，體重180-200g。
來源：上海斯萊克實驗動物有限責任公司，許可證號：SCXK(滬)2007-0005
3.1.2受試藥品
實施例1、實施例2、實施例10、實施例11、實施例12所配置處方。
3.1.3方法
實驗方法及分析評價方法同1.1.3。
3.2實驗結果
3.2.1對臟器水腫的影響
各主要臟器水腫情況見表5。與正常組大鼠相比，模型組大鼠燙傷后，臟器(肝、肺、腎)均表現出明顯的水腫(p<0.001)；與模型組、依達拉奉組和(+)-2-莰醇組相比，依達拉奉/(+)-2-莰醇的三種重量比例1:4、1:8、1:16均能顯著改善燙傷后大鼠主要臟器(肝、肺、腎)的水腫情況(p<0.01，p<0.05)。
表5.依達拉奉與(+)-2-莰醇復方用藥對燙傷動物臟器水腫情況的影響
X±SD，###p<0.01，與正常組相比；**p<0.01，*p<0.05，與模型組相比。
3.2.2對相關生化指標的影響
對相關生化指標的影響見表6，與正常組大鼠相比，模型組大鼠燙傷后，各主要生化指標(ALT、AST、BUN、CREA)均表現出顯著性變化(p<0.001)；與模型組、依達拉奉組和(+)-2-莰醇組相比，依達拉奉/(+)-2-莰醇的三種重量比例1:4、1:8、1:16均能顯著改善燙傷后大鼠各生化指標的改變情況(p<0.01，p<0.05)。
表6.依達拉奉與(+)-2-莰醇復方用藥對相關生化指標的影響
X±SD，###p<0.001，與正常組相比；**p<0.001，*p<0.05，與模型組相比。
結論：綜合以上試驗結果，依達拉奉與(+)-2-莰醇組合物在16:1～1:16范圍內可有效改善嚴重燙傷后延遲復蘇所造成的臟器損傷，并相對單方均取得了協同效果，并對相關生化指標的改變具有改善作用。
盡管通過公開的實施方案描述了本發明，本領域技術人員應當容易理解，具體的實施例 和上文詳述的研究只是對本發明的舉例說明。應當理解在不脫離本發明精神的情況下，可作出各種修改。因此，本發明只受所附權利要求的限制。