生脈復方提取物及在制備改善記憶藥品或保健品中的應用的制作方法

本發明涉及一種生脈復方提取物及其制備方法，具體涉及該生脈復方提取物在制備改善記憶的藥品或保健品中應用，屬于生物醫藥領域。

技術背景

記憶是人的大腦在對過去的事物進行回憶的一個過程。記憶力就是能夠回憶起事物當時的形態的完整性的一種能力。在進行記憶時頭腦中有數以萬計的神經細胞在不停的進行著繁重的運算活動，需要大量的營養與能量供應。如果不能保證其需求就會造成記憶力迅速下降。記憶力下降可嚴重影響人的生活質量，因此市場急需有效的改善記憶的藥品或保健品，但無奈的是這方面的產品還很少。因此，開發有效的適應于改善記憶的藥品或保健品非常必要。

中藥的多靶點特性在改善記憶方面具有顯著的優勢。本發明使用的生脈復方為重量比為9:9:6的人參、麥冬、五味子，在對生脈復方進行醇提后，不僅保留了生脈復方改善記憶的功效，并且比未經提取的生脈復方原藥效果更好，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種生脈復方提取物，該生脈復方提取物不僅保留了生脈復方改善記憶的功效，并且比未經提取的生脈復方原藥效果更好，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

本發明的一個目的是提供所述生脈復方提取物的制備方法。

本發明的主要目的是提供所述生脈復方提取物的新用途，即在制備改善記憶的藥品或保健品中的應用。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明提供了一種生脈復方提取物，所述生脈復方提取物原料藥為人參、麥冬、五味子，人參、麥冬、五味子的重量比為9:9:6。

其中，所述的生脈復方提取物是無水乙醇提取物。

本發明還提供了一種制備上述生脈復方提取物的制備方法，所述生脈復方提取物的制備方法如下：用無水乙醇浸泡人參、麥冬、五味子，加熱回流，過濾，減壓濃縮后得浸膏，充分揮干無水乙醇，干燥之后即得生脈復方提取物。

其中，無水乙醇浸泡的時間是0.5h。

其中，加熱回流兩次，每次的時間為2.5h。

另外，本發明還提供了所述的生脈復方提取物在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

其中，所述的藥品或保健品適用于改善正常人的記憶。

其中，在應用中所述生脈復方提取物的制備方法如下：用無水乙醇浸泡人參、麥冬、五味子，加熱回流，過濾，減壓濃縮后得浸膏，充分揮干無水乙醇，干燥之后即得生脈復方提取物。

其中，無水乙醇浸泡的時間是0.5h。

其中，加熱回流兩次，每次的時間為2.5h。

本發明的有益效果為：

本發明在對生脈復方進行醇提后，不僅保留了生脈復方改善記憶的功效，而且比未經提取的生脈復方原藥效果更好，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

附圖說明

圖1、2：生脈復方提取物灌胃小鼠的跳臺實驗。圖1中橫坐標是各組別，縱坐標是小鼠跳下平臺的潛伏期。圖2中橫坐標是各組別，縱坐標是小鼠跳下平臺的錯誤次數。

圖3、4、5：生脈復方提取物灌胃小鼠的水迷宮實驗。圖3中橫坐標是定位航行實驗的天數，縱坐標是定位航行實驗中，小鼠找到平臺的潛伏期。圖4中橫坐標為各組別，縱坐標是各組小鼠穿過平臺的次數。圖5中橫坐標為各組別，縱坐標是各組小鼠進入目標象限的次數。

圖6、7：生脈散復方提取物灌胃小鼠的避暗實驗。圖6是各組別，縱坐標時候各組小鼠進入暗箱的錯誤次數。圖7中橫坐標是各實驗的組別，縱坐標是各組小鼠進入暗箱的潛伏期。

具體實施方式

下面結合具體實施例進一步詳細描述本發明的技術方案，但本發明的保護范圍不局限于所述實施例。

實施例一生脈復方提取物的制備

材料：人參、麥冬、五味子購買于甘肅省蘭州市惠仁堂藥業連鎖有限責任公司。

生脈復方提取物原料藥包括人參、麥冬、五味子，人參、麥冬、五味子的重量比為9:9:6。

稱取人參90g、麥冬90g、五味子60g，用2400ml無水乙醇浸泡0.5h，加熱回流兩次，每次回流2.5h，過濾，減壓濃縮得到生脈復方浸膏。蒸干乙醇制得浸膏產率為13.6％。充分揮干無水乙醇，干燥之后即得生脈復方提取物。

實施例二生脈復方提取物改善正常小鼠記憶的跳臺實驗

1、實驗藥品與試劑

低濃度和高濃度生脈復方提取物(SM L、H)的配制：按照實施例一所述的制備方法制備得到生脈復方提取物，稱量300mg的生脈復方提取物溶于20ml蒸餾水中，制備成高濃度生 脈復方提取物(SM H)，濃度為15mg/ml。稱量150mg的生脈復方提取物溶于20ml的蒸餾水中，制備成低濃度生脈復方提取物(SM L)，濃度為7.50mg/ml。

生脈復方原藥(SM P)的制備：將粉碎后的人參、麥冬、五味子粉末分別過20目篩，分別稱量過篩后的人參粉末0.375g，麥冬粉末0.375g，五味子粉末0.250g，溶于20ml的蒸餾水中，制備成生脈復方原藥。

陽性藥物(P)的配制：稱取奧拉西坦膠囊內容物150mg溶于20ml蒸餾水中，配制成15mg/ml的溶液。

2、實驗動物

雌性清潔級昆明小鼠，購自蘭州大學GLP實驗動物中心，體重20.0±2.0g；其中從120只小鼠中篩選出81只動物用于跳臺實驗。

3、主要儀器：電子天平(0.0001g)、YLS-3TB跳臺儀(成都泰盟科技有限公司)。

4、實施步驟

(1)昆明小鼠的飼養

將體重基本一致的健康成年雌性小鼠飼養在溫度在18～22℃,濕度50％～60％。同時給予12h日照和12h夜照。

(2)實驗動物的篩選

實驗動物適應實驗室環境3d后，用跳臺儀進行跳臺篩選。先將小鼠進行隨機分組，分組后用酚紅進行標記并稱量其體重。將各組每只小鼠放在跳臺暗箱中適應3分鐘后接通電源開始測試，跳臺儀自動記錄各小鼠跳下平臺的次數和跳下平臺的時間。每只小鼠測試5分鐘。

跳臺儀自動記錄每只小鼠跳下平臺的錯誤次數和跳下平臺的時間，第一次跳下平臺的時間記為其潛伏期，并記錄錯誤小鼠的只數和錯誤次數，通過跳臺實驗篩選出實驗智力和體力基本一致的小鼠作為生脈復方提取物功效實驗的模型小鼠。

(3)生脈復方提取物改善正常小鼠記憶的作用

跳臺實驗篩選出智力和體力基本一致的小鼠后，將小鼠進行分組，平均分成5組，使得每組的小鼠智力基本一致。分組后的小鼠每天20:00-21:00進行灌胃，每只小鼠灌胃0.2ml以上各組藥液與蒸餾水。共灌胃30天。30天后進行跳臺測試，先將小鼠進行隨機分組，分組后用酚紅進行標記并稱量其體重。將各組每只小鼠放在跳臺暗箱中適應3分鐘后接通電源開始測試，跳臺儀自動記錄各小鼠跳下平臺的次數和跳下平臺的時間。每只小鼠測試5分鐘。

跳臺儀自動記錄每只小鼠跳下平臺的錯誤次數和跳下平臺的時間，第一次跳下平臺的時間記為其潛伏期，并記錄錯誤小鼠的只數和錯誤次數。

圖1中橫坐標表示藥物處理組別，縱坐標表示小鼠跳下平臺的潛伏期，縱坐標數值越大， 表示小鼠的記憶越好，其中，###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05。

從圖1中可知，生脈復方提取物的中濃度和高濃度組(SM L、H)及陽性藥組(P)均有改善記憶的功效，且生脈復方提取物的中濃度和高濃度組(SM L、H)與陽性藥組(P)相比，無顯著性差異,與生脈復方原藥組(SM P)相比表現出有明顯改善記憶的作用。

圖2的橫坐標表示藥物處理組，縱坐標表示小鼠跳下平臺的錯誤次數，縱坐標數值越小，表示小鼠的記憶越好，其中，###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05。

從圖2中可知，生脈提取物的低濃度和高濃度(SM L、H)及陽性藥組(P)均有改善記憶的功效，且生脈提取物的中濃度和高濃度(SM L、H)與陽性藥相比，無顯著性差異。

綜上所述，生脈復方提取物能夠極顯著地改善小鼠的記憶，而且與生脈散原料藥相比，生脈復方提取物顯示出顯著改善小鼠的記憶的作用，實驗結果呈陽性。

因此，本發明提供生脈復方提取物具有改善小鼠記憶的潛力，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

實施例三生脈復方提取物改善正常小鼠記憶的水迷宮實驗

1、實驗藥品與試劑

同實施例二所示方法配制各組藥物，圖中，C為空白對照組，灌胃蒸餾水；P為陽性藥奧拉西坦，SM L，SM H的配制方法如實施例二所述。

2、實驗動物

雌性清潔級昆明小鼠，購自蘭州大學GLP實驗動物中心，體重20.0±2.0g；其中從120只小鼠中篩選出75只動物用于水迷宮實驗。

3、主要儀器

電子天平(0.0001g)、morris水迷宮(成都泰盟科技有限公司)。

4、實施步驟

(1)昆明小鼠的飼養

將體重基本一致的健康成年雌性小鼠飼養在溫度在18～22℃,濕度50％～60％。同時給予12h日照和12h夜照。

(2)實驗動物的篩選

實驗動物適應實驗室環境3d后，用Morris水迷宮進行定位航行室驗和空間搜索實驗篩選。先將小鼠進行隨機分組，分組后用酚紅進行標記。苦味酸進行標記頭部并稱量其體重。將各組小鼠分別適應水環境1天后進行為期2天的水迷宮定位航行實驗，通過水迷宮實驗篩選出智力和體力基本一致的小鼠作為評估生脈復方提取物功效的模型小鼠。

水迷宮實驗儀自動記錄各組小鼠的潛伏期及運動距離。

(3)生脈復方改善小鼠記憶的作用

通過水迷宮實驗篩選出智力和體力基本一致的小鼠后，將小鼠進行分組，平均分成5組，使得每組的小鼠智力和體力和數量基本一致。分組后的小鼠每天20:00-21:00進行灌胃，每只小鼠灌胃0.2ml的各組藥液與蒸餾水。共灌胃30天。30天后用Morris水迷宮進行定位航行室驗和空間搜索實驗測試。將小鼠進行用苦味酸進行標記。同時用苦味酸標記頭部并稱量其體重。將各組小鼠分別適應水環境1天后進行為期5天的水迷宮定位航行實驗，每天分別讓每組小鼠從水迷宮的四個象限入水，記錄每組小鼠每天的逃避潛伏期，同時記錄每組小鼠每天的運動距離和運動的平均速度。第七天進行空間搜索實驗，撤去平臺，記錄每組小鼠分別從目標象限的鄰位象限和對位象限入水，記錄每組小鼠進入目標象限的次數和穿過平臺的次數。

圖3橫坐標為實驗天數，縱坐標為定位航行實驗中，測試五天的各組小鼠的逃避潛伏期，潛伏期越短，說明小鼠的記憶越好。

圖4橫坐標為組別，縱坐標為各組小鼠穿過平臺的次數，穿過平臺的次數越多，表明小鼠的記憶越好。

圖5橫坐標為組別，縱坐標為各組小鼠進入目標象限的次數，進入目標象限的次數越多，表明小鼠的記憶越好。

其中，***表示P<0.001，**表示P<0.01，*表示P<0.05。

實驗結果顯示，生脈復方提取物高濃度組極顯著改善小鼠的記憶，與空白對照組相比，生脈復方提取物高濃度組合陽性藥均顯示出顯著改善小鼠的記憶的作用，實驗結果呈陽性。

綜上所述，本發明提供生脈復方提取物具有改善小鼠記憶的潛力，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

實施例四生脈復方提取物改善正常小鼠記憶的避暗實驗

1、實驗藥品與試劑

同實施例二所示方法配制各組溶液，圖中，C為空白對照組；P為陽性藥奧拉西坦組；SM L為生脈低濃度組；SM H為生脈高濃度組；SM P為生脈生藥組。

2、實驗動物

雌性清潔級昆明小鼠，購自蘭州大學GLP實驗動物中心，體重20.0±2.0g；其中從120只小鼠中篩選出75只動物用于避暗實驗。

3、主要儀器

電子天平(0.0001g)、YLS-17避暗穿梭儀(成都泰盟科技有限公司)。

4、實施步驟

(1)昆明小鼠的飼養

將體重基本一致的健康成年雌性小鼠飼養在溫度在18～22℃，濕度50％～60％。同時給予12h日照和12h夜照。

(2)實驗動物的篩選

實驗動物適應實驗室環境3d后，用避暗穿梭儀進行智力篩選。先將小鼠進行隨機分組，分組后用酚紅進行標記并稱量其體重。將各組小鼠分別適應避暗環境3分鐘后進行為期1天的避暗篩選實驗，通過避暗實驗選出智力和體力基本一致的小鼠作為評估生脈復方提取物功效的模型小鼠。

避暗儀自動記錄各組小鼠進入暗箱的潛伏期及錯誤次數。

(3)生脈復方改善小鼠記憶的作用

通過避暗實驗選出智力和體力基本一致的小鼠后，將小鼠進行分組，平均分成5組，使得每組的小鼠智力基本一致。分組后的小鼠每天20:00-21:00進行灌胃，每只小鼠灌胃0.2ml的各組藥液與蒸餾水，共灌胃30天。30天后用避暗穿梭儀進行智力測試。先將小鼠用苦味酸進行標記并稱量其體重。將各組小鼠分別適應避暗環境3分鐘后進行為期1天的避暗測試實驗，第二天將各組小鼠放進避暗箱中的明處，實驗小鼠進入暗箱避暗儀自動記錄各組小鼠進入暗箱的潛伏期和進入暗箱的錯誤次數，此為記錄指標。

圖4橫坐標為組別，縱坐標為各組小鼠進入暗箱的潛伏期，潛伏期越長，表明小鼠的記憶越好。

圖5橫坐標為組別，縱坐標為各組小鼠進入暗箱的錯誤次數，進入暗箱的錯誤次數越少，表明小鼠的記憶越好。

其中，***表示P<0.001，**表示P<0.01，*表示P<0.05。

實驗結果表明，生脈復方提取物高濃度組能顯著改善小鼠的記憶，而且生脈復方提取物組(SM L、H)與對照組相比，顯示出顯著改善小鼠的記憶的作用與陽性藥相比，比陽性藥的效果還要好一些，實驗結果呈陽性。

綜上所述，本發明提供生脈復方提取物具有改善小鼠記憶的潛力，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應用。

實施例五改善正常小鼠記憶的生脈復方提取物標志性成分檢測

本實施例測定了生脈復方提取物中總皂苷和總黃酮的含量。總皂苷含量的測定方法參照《中國藥典》2010版一部中人參總皂苷的含量測定方法；總黃酮含量的測定方法參照《中國藥典》2010版一部中山楂葉提取物中總黃酮的含量測定方法。

結果表明，改善正常小鼠記憶的生脈復方提取物中總皂苷的含量為3.12±0.050 (g/100g)，總黃酮的含量為25.9±1.25(g/100g)。