一種孟魯司特鈉泡騰制劑及其制備方法與流程
本發明涉及一種孟魯司特鈉泡騰制劑，特別涉及一種孟魯司特鈉泡騰片和泡騰顆粒及其制備方法，屬于藥物制劑領域。
背景技術：
孟魯司特鈉是一種白三烯拮抗劑，用于治療成人和6個月以上兒童的哮喘和過敏性鼻炎(包括季節性和頑固性)，也可以治療運動誘發的支氣管收縮。目前，兒童呼吸道疾病發病率一直處于高端之勢，居高不下。
文獻1(孟魯司特鈉對輕度持續哮喘患兒療效和安全性的隨機雙盲安慰劑對照試驗，《中國循證兒科雜志》，2011年04期)研究了孟魯司特鈉單用于治療5～14歲輕度持續哮喘患兒的療效和安全性，結果顯示孟魯司特鈉單獨用于輕度持續性哮喘患兒具有良好的療效，不良反應少，患兒依從性高。
文獻2(孟魯司特鈉治療小兒咳嗽變異性哮喘的療效觀察，《中國臨床醫學》，2009年02期)研究了口服孟魯司特鈉方法治療兒童咳嗽變異性哮喘(cough variant asthma,CVA)的療效，結果顯示口服孟魯司特鈉治療方便，更適用于兒童。
文獻3(孟魯司特鈉治療小兒咳嗽變異性哮喘的臨床療效及安全性研究，《現代生物醫學進展》，2012年17期)研究了孟魯司特鈉治療小兒咳嗽變異性哮喘的臨床療效及安全性，結果顯示孟魯司特鈉治療小兒咳嗽變異性哮喘可有效改善患者的肺通氣功能和緩解臨床癥狀,是治療該病的可靠方法。
文獻4(白三烯受體拮抗劑孟魯司特鈉治療過敏性鼻炎的臨床觀察，《中國醫藥科學》，2012年08期)研究了孟魯司特鈉治療過敏性鼻炎的臨床療效，結果顯示孟魯司特鈉治療過敏性鼻炎療效好，值得臨床中廣泛應用。
文獻5(孟魯司特鈉減輕哮喘兒童鼻炎癥狀的臨床觀察，《數理醫藥學雜志》，2014年01期)研究觀察6～14歲輕中度持續性哮喘伴過敏性鼻炎(AR)兒童服用孟魯司特鈉咀嚼片(順爾寧)治療后對減輕鼻炎癥狀的療效，結果顯示孟魯司特鈉可以顯著減輕6～14歲輕中度哮喘伴AR兒童的鼻炎癥狀和眼部癥狀，癥狀評分改善明顯，提示孟魯司特鈉對哮喘伴過敏性鼻炎的兒童在減輕過敏性鼻炎癥狀 方面有明顯的療效。
目前，已上市的孟魯司特鈉制劑包括：片劑、咀嚼片、顆粒劑等。在我國授權的專利中，CN201310466746、CN201310389274、CN201010003886公開了孟魯司特鈉咀嚼片及其制備方法，CN201310264875公開了孟魯司特鈉膜狀制劑，CN201210026670公開了孟魯司特鈉口服固體制劑及其制備方法，CN201010003871公開了孟魯司特鈉片劑及其制備方法，CN200410057366公開了孟魯司特鈉的分散片劑型，CN02821212公開了孟魯司特顆粒制劑。
但是，當前關于孟魯司特鈉泡騰制劑的研究還沒有見過報道。藥物的泡騰片或泡騰顆粒是一種放入水中后能夠迅速產生氣泡而迅速崩解的供內服或外用的固體制劑。泡騰片劑或泡騰顆粒具有以下優點：崩解快速、服用方便、起效迅速；生物利用度高，能提高臨床療效；特別適用于兒童、老年人以及吞服藥丸困難的患者。
有鑒于此，本發明對孟魯司特鈉泡騰制劑，具體包括孟魯司特鈉泡騰片和泡騰顆粒的配方和制備方法進行了研究，形成新的制劑，從而提高用藥靈活性，特別適用于兒童。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種用于治療哮喘和過敏性鼻炎的便于服用、吸收快、生物利用度高、特別適合兒童的孟魯司特鈉泡騰制劑及其制備方法。
本發明的目的是通過以下途徑來實現的：
一種孟魯司特鈉泡騰制劑，包括孟魯司特鈉泡騰片和孟魯司特鈉泡騰顆粒。
上述的孟魯司特鈉泡騰制劑，包含以下各組分：孟魯司特鈉、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、填充劑。
此外，上述孟魯司特鈉泡騰制劑的組分中還可以選擇添加氯化鈉，然而氯化鈉的添加與否并不影響最終制劑的藥效。
其中，所述的崩解劑是由酸和鹽組成的，其中，所述酸選自下列物質中的一種或幾種：枸櫞酸、丙二酸、丁二酸、己二酸、酒石酸、水楊酸、馬來酸、富馬酸、苯甲酸、山梨酸、蘋果酸，優選的酸為枸櫞酸；所述的鹽選自下列物質中的一種或幾種：碳酸鉀、碳酸氫鉀、碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫銨，優選的鹽為碳酸氫鈉和碳酸鈉。
其中，所述的粘合劑選自下列物質中的一種或幾種：聚乙烯吡咯烷酮、甲 基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、微晶纖維素、預膠化淀粉。
其中，所述的潤滑劑選自下列物質中的一種或幾種：硬脂酸鎂、聚乙二醇、亮氨酸、硬脂酰富馬酸鈉、二氧化硅、硬脂酸。
其中，所述的填充劑選自下列物質中的一種或幾種：甘露醇、淀粉、糖粉、糊精、乳糖、蔗糖、葡萄糖、麥芽糖。
上述的孟魯司特鈉泡騰制劑，所述各組分按照重量份數的配比為：
其中，所述的崩解劑中的酸和鹽的質量比例為3:5-8:7，優選的質量比為2:3。
一種制備上述孟魯司特鈉泡騰片的方法，可采用下述三種方法中的任一種：
A.濕法制粒，步驟如下：
1)將粘合劑配制成溶液；
2)將崩解劑中的酸和填充劑混合均勻后投入到制粒機中，先干混，再與粘合劑溶液濕混，制粒，作為酸顆粒；
3)將孟魯司特鈉、崩解劑中的鹽和剩余的填充劑混合均勻后投入到制粒機中，先干混，再與剩余的粘合劑溶液濕混，制粒，作為堿顆粒；
4)將上述酸顆粒、上述堿顆粒、潤滑劑混合均勻，按計算的片重進行壓片，收集素片。
5)將上述素片用鋁塑板包裝，再裝盒。
優選的，
步驟1)中所述的粘合劑溶液是用水或無水乙醇配置而成的，粘合劑溶液的質量/體積百分比濃度為6％～20％(g/ml)；
其中，當粘合劑溶液是由水配置而成的時候，所述的濕法制粒稱為水法制粒；當粘合劑溶液是由無水乙醇配置而成的時候，所述的濕法制粒稱為非水法制粒。
步驟2)中所述的填充劑和崩解劑中的酸的質量比為1：1-4：1，優選的質量比為2:1；
步驟2)中所述的粘合劑溶液的加量是占步驟1)粘合劑溶液體積的20％-50％；
步驟3)中所述的填充劑和崩解劑中的鹽的質量比是1：1-3：1，優選的質量比是1:1；
步驟3)中所述的粘合劑溶液的加量是占步驟1)粘合劑溶液體積的50％-80％。
B.干法制粒，步驟如下：
1)將崩解劑中的酸和填充劑混合均勻后，再與粘合劑混合，將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，作為酸顆粒；
2)將孟魯司特鈉、崩解劑中的鹽和填充劑混合均勻后，再與剩余的粘合劑混合，將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，作為堿顆粒；
3)將上述酸顆粒、上述堿顆粒、潤滑劑混合均勻，按計算的片重進行壓片，收集素片。
4)將上述素片用鋁塑板包裝，再裝盒。
步驟1)中所述的粘合劑的加量是總粘合劑質量的20％-50％；
步驟1)中所述的填充劑和崩解劑中的酸的質量比為1：1-4：1，優選的質量比為2:1；
步驟2)中所述的填充劑和崩解劑中的鹽的質量比是1：1-3：1，優選的質量比是1:1；
步驟2)中所述的粘合劑的加量是總粘合劑質量的50％-80％。
C.粉末壓片法，步驟如下：
將孟魯司特鈉、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、填充劑混合均勻，按計算的片重壓片，收集素片，然后用鋁塑板包裝，再裝盒。
一種制備上述孟魯司特鈉泡騰顆粒的方法，可采用下述兩種方法中的任一種：
A.濕法制粒，步驟如下：
1)將粘合劑配制成溶液；
2)將崩解劑中的酸和填充劑混合均勻后投入到制粒機中，先干混，再與粘合劑溶液濕混，制粒，作為酸顆粒；
3)將孟魯司特鈉、崩解劑中的鹽和剩余的填充劑混合均勻后投入到制粒機中，先干混，再與剩余的粘合劑溶液濕混，制粒，作為堿顆粒；
4)將上述酸顆粒、上述堿顆粒、潤滑劑混合均勻，按計算的袋重裝袋，再裝盒。優選的，
步驟1)中所述的粘合劑溶液是用水或無水乙醇配置而成的，粘合劑溶液的質量/體積百分比濃度為6％～20％(g/ml)；
其中，當粘合劑溶液是由水配置而成的時候，所述的濕法制粒稱為水法制粒；當粘合劑溶液是由無水乙醇配置而成的時候，所述的濕法制粒稱為非水法制粒。
步驟2)中所述的填充劑和崩解劑中的酸的質量比為1：1-5：1，優選的質量比為2:1；
步驟2)中所述的粘合劑溶液的加量是占步驟1)粘合劑溶液體積的20％-50％；
步驟3)中所述的填充劑和崩解劑中的鹽的質量比是1：1-5：1，優選的質量比是1:1；
步驟3)中所述的粘合劑溶液的加量是占步驟1)粘合劑溶液體積的50％-80％。
B.干法制粒，步驟如下：
1)將崩解劑中的酸和填充劑混合均勻后，再與粘合劑混合，將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，作為酸顆粒；
2)將孟魯司特鈉、崩解劑中的鹽和填充劑混合均勻后，再與剩余的粘合劑混合，將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，作為堿顆粒；
3)將上述酸顆粒、上述堿顆粒、潤滑劑混合均勻，按計算的袋重裝袋，再裝盒。
步驟1)中所述的粘合劑的加量是總粘合劑質量的20％-50％；
步驟1)中所述的填充劑和崩解劑中的酸的質量比為1：1-4：1，優選的質量比為2:1；
步驟2)中所述的填充劑和崩解劑中的鹽的質量比是1：1-3：1，優選的質量比是1:1；
步驟2)中所述的粘合劑的加量是總粘合劑質量的50％-80％。
需要指出的是，上述制備方法中涉及到的為了混合均勻所采用的混合方法，可以采用本領域常用的等量遞增法混合，但并不限定此種方法，所有能達到混合均勻的方法均可適用于本發明的制備方法中。
本發明所述的孟魯司特鈉泡騰制劑在制備治療哮喘和過敏性鼻炎的藥物中的應用。
本發明采用上述技術方案，具有以下優點：
本發明具有便于服用、吸收快、生物利用度高、適合兒童等特殊人群服用等優點。
附圖說明
圖1是Cyclin D1和β-actin mRNA各組的表達情況。
具體實施方式
以下用具體的實施例對本發明作進一步的說明，將有助于對本發明的優點有更好的了解。但實施例不限定本發明的保護范圍。
一、孟魯司特鈉泡騰片
實施例1(非水法制粒)
1、泡騰片的配方
每1000片重量配比
2、泡騰片的制備方法
1)粘合劑溶液的配制
將50ml無水乙醇置于大燒杯中，然后加入4g聚乙烯吡咯烷酮K30，靜置一晚使高分子材料溶脹，配制成濃度為8％(g/ml)的溶液50ml；
2)酸顆粒制備
將40g甘露醇、40g乳糖、40g無水枸櫞酸在SYH-10L三維運動混合機中 混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將20ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后過40目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度60±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過40目篩。
3)堿顆粒制備
將5g孟魯司特鈉、30g碳酸鈉、30g碳酸氫鈉、60g甘露醇放入SYH-10L三維運動混合機中，混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將剩余的30ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中，進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后，過40目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度50±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過40目篩。
4)總混壓片
將上述酸顆粒120g、上述堿顆粒125g、PEG6000為15g、亮氨酸10g、在三維混合運動機中混合均勻；將混合好的物料投入到壓片機中進行壓片，根據理論片重274mg/片調整壓片機，收集素片。
5)包裝
將上述素片在平板式自動泡罩包裝機進行連續包裝，采用鋁塑板包裝，包裝規格：6片/板；然后將每板裝入白胚小盒中，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗長期試驗：將實施例1的樣品放置在長期留樣箱中，溫度為25℃，濕度為60％。分別在零時、3個月、6個月、9個月取樣，檢測樣品的孟魯司特鈉含量、干燥失重、崩解時限、PH、脆碎度、有關物質。
加速試驗：將樣品放置在長期留樣箱中，溫度為30℃，濕度為65％。分別在零時、1個月、2個月、3個月、6個月取樣，檢測樣品的孟魯司特鈉含量、干燥失重、崩解時限、PH、脆碎度、有關物質。
有關物質：避光操作。照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄ⅤD)測定。
含量：照有關物質項下的方法，取供試品溶液及對照品溶液分別進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
PH值：取本品1片(理論片重274mg/片，按總重/1000片計算)，加20℃的水100ml使崩解，待崩解完全無氣泡后，依法測定(附錄VI H)，pH應為6.0～8.0。
崩解時限：取本品6片，分別加20℃的水200ml，應在5分鐘內崩解。
干燥失重：取本品，60攝氏度減壓干燥3小時，減失重量不得過1.5％。
脆碎度：照中國藥典2010年版二部附錄ⅠA測定。
表1實施例1的長期試驗結果
表2實施例1的加速試驗結果
從實施例1可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例2(水法制粒)
1、泡騰片的配方
每1000片重量配比
2、泡騰片的制備方法
1)粘合劑配制
將40ml水置于大燒杯中，然后加入3.2g甲基纖維素，靜置一晚使高分子材料溶脹，配制成濃度為8％(g/ml)的溶液40ml；
2)酸顆粒制備
將16g蔗糖、16g淀粉、32g丙二酸在SYH-10L三維混合機中混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將15ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后過40目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度60±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過40目篩。
3)堿顆粒制備
將4g孟魯司特鈉、24g碳酸鉀、24g碳酸氫鉀、144g淀粉放入SYH-10L三維運動混合機中，混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后將剩余的25ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中，進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后，過40目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度50±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過40目篩。
4)總混壓片
將上述酸顆粒96g、上述堿顆粒100g、硬脂酸鎂12g、硬脂酰富馬酸鈉8g在三維混合運動機中混合均勻；將混合好的物料投入到壓片機中進行壓片，根 據理論片重283mg/片調整壓片機，收集素片。
5)包裝
將上述素片在平板式自動泡罩包裝機進行連續包裝，采用鋁塑板包裝，包裝規格：6片/板；然后將每板裝入白胚小盒中，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例1。
表3實施例2的長期試驗結果
表4實施例2的加速試驗結果
從實施例2可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求； 干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例3(干法制粒)
1、泡騰片的配方
每1000片重量配比
2、泡騰片的制備方法
1)酸顆粒制備
將45g酒石酸、10g糖粉、50g糊精、6g微晶纖維素在SYH-10L三維混合機中混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完成后進行干整粒，過40目篩。
2)堿顆粒制備
將5g孟魯司特鈉、25g碳酸鈣、35g碳酸氫銨、70g糊精、6g微晶纖維素放入SYH-10L三維運動混合機中，混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完成后進行干整粒，過40目篩。
3)總混壓片
將上述酸顆粒111g、上述堿顆粒141g、二氧化硅5g、硬脂酸5g、在三維混合運動機中混合均勻；將混合好的物料投入到壓片機中進行壓片，根據理論片重262mg/片調整壓片機，收集素片。
4)包裝
將上述素片在平板式自動泡罩包裝機進行連續包裝，采用鋁塑板包裝，包 裝規格：6片/板；然后將每板裝入白胚小盒中，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例1。
表5實施例3的長期試驗結果
表6實施例3的加速試驗結果
從實施例3可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例4(干法制粒)
1、泡騰片的配方
每1000片重量配比
2、泡騰片的制備方法
1)酸顆粒制備
將40g蘋果酸、20g乳糖、60g甘露醇、5g預膠化淀粉在SYH-10L三維混合機中混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完成后進行干整粒，過40目篩。
2)堿顆粒制備
將5g孟魯司特鈉、15g碳酸氫鉀、20g碳酸鈣、105g甘露醇、5g預膠化淀粉放入SYH-10L三維運動混合機中，混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完成后進行干整粒，過40目篩。
3)總混壓片
將上述酸顆粒125g、上述堿顆粒150g、硬脂酸鎂8g、硬脂酸6g、在三維混合運動機中混合均勻；將混合好的物料投入到壓片機中進行壓片，根據理論片重289mg/片調整壓片機，收集素片。
4)包裝
將上述素片在平板式自動泡罩包裝機進行連續包裝，采用鋁塑板包裝，包裝規格：6片/板；然后將每板裝入白胚小盒中，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例1。
表7實施例4的長期試驗結果
表8實施例4的加速試驗結果
從實施例4可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例5(粉末壓片法)
1、泡騰片的配方
每1000片重量配比
2、泡騰片的制備方法
將4g孟魯司特鈉和4g甘露醇放入到三維運動混合機中，混合20分鐘；再加入8g甘露醇，混合20分鐘；再加入16g甘露醇，混合20分鐘；再加入12g甘露醇和20g碳酸鈉，混合20分鐘；再加入20g碳酸鈉、40g糊精，混合20分鐘；再加入60g碳酸氫鈉和60g水楊酸，混合20分鐘；再加入8g預膠化淀粉、4g的PEG6000、8g亮氨酸，混合20分鐘；將混合好的物料投入到壓片機中進行壓片，根據理論片重264mg/片調整壓片機，收集素片。
將上述素片在平板式自動泡罩包裝機進行連續包裝，采用鋁塑板包裝，包裝規格：6片/板；然后將每板裝入白胚小盒中，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例1。
表9實施例5的長期試驗結果
表10實施例5的加速試驗結果
從實施例5可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
二、孟魯司特鈉泡騰顆粒
實施例6(非水法制粒)
1、泡騰顆粒的配方
每1000袋重量配比
2、泡騰顆粒制備方法
1)粘合劑溶液的配制
將50ml無水乙醇置于大燒杯中，然后加入8g聚乙烯吡咯烷酮K30，靜置一晚使高分子材料溶脹，配制成濃度為16％(g/ml)的溶液50ml；
2)酸顆粒制備
將20g麥芽糖、20g淀粉在SYH-10L三維混合機中混合20分鐘后，再加入40g無水枸櫞酸，混合20分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將20ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后過30目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度60±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
3)堿顆粒制備
將5g孟魯司特鈉、5g碳酸鈉放入SYH-10L三維運動混合機中，混合30分鐘后，再加入10g碳酸鈉混合30分鐘后，再加入15g碳酸鈉和5g碳酸氫鈉混合30分鐘后，再加入25g碳酸氫鈉和15g淀粉，混合30分鐘后，再加入45g淀粉，混合30分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將剩余的30ml粘合劑緩慢分次加入到制粒機中，進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后，過30目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度50±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
4)總混
將上述酸顆粒80g、上述堿顆粒125g、PEG60005g、亮氨酸2g，在三維混合運動機中混合均勻。
5)包裝
將上述混合好的物料投入到自動包裝機中進行包裝，采用鋁塑復合袋包裝，根據理論袋重212mg/袋裝袋，然后裝入白胚小盒中，每盒6袋，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
長期試驗：將樣品放置在長期留樣箱中，溫度為25℃，濕度為60％。分別在零時、3個月、6個月、9個月取樣，檢測樣品的孟魯司特鈉含量、干燥失重、崩解時限、PH、脆碎度、有關物質。
加速試驗：將樣品放置在長期留樣箱中，溫度為30℃，濕度為65％。分別在零時、1個月、2個月、3個月、6個月取樣，檢測樣品的孟魯司特鈉含量、干燥失重、崩解時限、PH、脆碎度、有關物質。
有關物質：避光操作。照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄ⅤD)測定。
含量：照有關物質項下的方法，取供試品溶液及對照品溶液分別進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
PH值：取本品1袋，加20℃的水100ml使崩解，待崩解完全無氣泡后，依法測定(附錄VI H)，pH應為6.0～8.0。
崩解時限：取本品6袋，分別加20℃的水200ml，應在5分鐘內崩解。
干燥失重：取本品，60攝氏度減壓干燥3小時，減失重量不得過1.5％。
脆碎度：照中國藥典2010年版二部附錄ⅠA測定。
表11實施例6的長期試驗結果
表12實施例6的加速試驗結果
從實施例6可知，含量均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例7(水法制粒)
1、泡騰顆粒的配方
每1000袋重量配比：
2、泡騰顆粒制備方法
1)粘合劑溶液的配制
將50ml水置于大燒杯中，然后加入5g乙基纖維素，配制成濃度為12.5％(g/ml)的溶液50ml；
2)酸顆粒制備
將20g富馬酸、40g甘露醇、60g蔗糖在SYH-10L三維混合機中混合60分鐘后，將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將20ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后過30目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度60±2℃，干燥時間1小時；干 燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
3)堿顆粒制備
將4g孟魯司特鈉、10g碳酸鉀、10g碳酸氫鉀和100g甘露醇放入SYH-10L三維運動混合機中，混合60分鐘將混合好的物料投入到制粒機中，干混1-2分鐘后，將剩余的30ml粘合劑溶液緩慢分次加入到制粒機中，進行濕混，濕混3-5分鐘，濕混完畢后，過30目篩，收集顆粒；將濕顆粒用流化床進行干燥，進風溫度50±2℃，干燥時間1小時；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
4)總混
將上述酸顆粒120g、上述堿顆粒124g、PEG6000為3g、亮氨酸2g，在三維混合運動機中混合均勻。
5)包裝
將上述混合好的物料投入到自動包裝機中進行包裝，采用鋁塑復合袋包裝，根據理論袋重249mg/袋裝袋，然后裝入白胚小盒中，每盒6袋，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例6
表13實施例7的長期試驗結果
表14實施例7的加速試驗結果
從實施例7可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例8(干法制粒)
泡騰顆粒的配方
每1000袋重量配比
2、泡騰顆粒制備方法
1)酸顆粒制備
將50g糖粉、50g乳糖在SYH-10L三維混合機中混合20分鐘后，再加入60g山梨酸和10g微晶纖維素，混合20分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中， 進行干法制粒，制粒完畢后用流化床進行干燥，進風溫度60±2℃，干燥時間20分鐘；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
3)堿顆粒制備
將5g孟魯司特鈉、5g碳酸鈣放入SYH-10L三維運動混合機中，混合30分鐘后，再加入10g碳酸鈣，混合30分鐘后，再加入20g碳酸鈣，混合30分鐘后，再加入10g碳酸鈣和30g碳酸氫銨，混合30分鐘后，再加入15g碳酸氫銨和65g糊精，混合30分鐘；再加入35g糊精和10g微晶纖維素，混合30分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完畢后用流化床進行干燥，進風溫度50±2℃，干燥時間20分鐘；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
4)總混
將上述酸顆粒170g、上述堿顆粒205g、硬脂酸鎂10g、二氧化硅5g，在三維混合運動機中混合均勻。
5)包裝
將上述混合好的物料投入到自動包裝機中進行包裝，采用鋁塑復合袋包裝，根據理論袋重387mg/袋裝袋，然后裝入白胚小盒中，每盒6袋，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例6
表15實施例8的長期試驗結果
表16實施例8的加速試驗結果
從實施例7可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
實施例9(干法制粒)
1、泡騰顆粒的配方
每1000袋重量配比
2、泡騰顆粒制備方法
1)酸顆粒制備
將50g苯甲酸、30g糖粉、20g乳糖、5g微晶纖維素在SYH-10L三維混合 機中混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完畢后用流化床進行干燥，進風溫度60±2℃，干燥時間20分鐘；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
3)堿顆粒制備
將5g孟魯司特鈉、30g碳酸鉀、30g碳酸鈉、120g乳糖、5g微晶纖維素在SYH-10L三維混合機中混合60分鐘；將混合好的物料投入到制粒機中，進行干法制粒，制粒完畢后用流化床進行干燥，進風溫度50±2℃，干燥時間20分鐘；干燥完畢后進行干整粒，過30目篩。
4)總混
將上述酸顆粒105g、上述堿顆粒190g、硬脂酰富馬酸鈉7g、二氧化硅3g，在三維混合運動機中混合均勻。
5)包裝
將上述混合好的物料投入到自動包裝機中進行包裝，采用鋁塑復合袋包裝，根據理論袋重305mg/袋裝袋，然后裝入白胚小盒中，每盒6袋，貼上標簽，注明批號、數量、品名、日期。
3、長期試驗和加速試驗
實驗方法同實施例6
表17實施例9的長期試驗結果
表18實施例9的加速試驗結果
從實施例9可知，含量(以孟魯司特計)均在92％-105％之間，符合要求；干燥失重均小于1％，符合要求；PH值均在6-8之間，符合要求；崩解時限均在5分鐘之內，符合要求；脆碎度均在1％內，符合要求；有關物質中，亞砜含量均在2.5％之內，其它單雜均小于0.1％，總雜含量均小于2.8％，符合要求。
三、動物試驗
目的：研究孟魯司特鈉泡騰制劑(包括孟魯司特鈉泡騰片和孟魯司特鈉泡騰顆粒)對哮喘小鼠肺組織中細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表達影響及對支氣管哮喘氣道重塑的作用。
實驗步驟：
1、將BALB/c小鼠隨機分為正常對照組、哮喘組、孟魯司特鈉泡騰片組(實施例1)、孟魯司特鈉泡騰顆粒組(實施例5)4組,每組10只；
2、卵蛋白致敏和激發建立哮喘小鼠模型：哮喘組小鼠分別于第1天腹腔注射卵清蛋白氫氧化鋁混懸液0.2ml(內含卵蛋白10μg及氫氧化鋁20μg),第15天重復致敏1次。自第22天開始予以1％卵蛋白生理鹽水溶液霧化吸入,每天1次,每次30min,持續4周。治療組在每次霧化吸入前半小時分別予以孟魯司特鈉泡騰片、孟魯司特鈉泡騰顆粒的生理鹽水混懸液(10mg/kg)灌胃給藥。對照組用生理鹽水代替卵蛋白進行腹腔注射和霧化吸入。
3、各組小鼠在末次霧化吸入24h后離斷頸椎處死并獲取肺組織。取右肺置于1.8ml凍存管中液氮凍存，抽提總RNA和蛋白；RT-PCR檢測：測定RNA濃度,將總RNA逆轉錄進行PCR擴增，進行灰度測定,計算目的基因/內參的灰度 相對比值；Western-blot檢測：蛋白處理后，進行蛋白定量。取左肺中葉置于4％多聚甲醛中；組織塊經多聚甲醛固定后,酒精梯度脫水,常規石蠟包埋,切片厚度4μm，做HE染色，顯微鏡觀察和進行圖像分析；切片進行Cyclin D1免疫組化染色，測量并計算陽性信號所占百分比。使用統計學方法統計，所有數據均用均數±標準差(x±s)表示，使用軟件進行方差分析，各組間差異的顯著性采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有顯著性。
實驗結果：HE染色提示哮喘組與對照組相比出現嗜酸性粒細胞浸潤增多、纖毛脫失、平滑肌細胞層增厚等改變，而兩個治療組的上述改變較哮喘組為輕；免疫組化顯示Cyclin D1在哮喘小鼠氣道平滑肌細胞、內皮細胞、成纖維細胞中皆有表達而在對照組中表達減弱(P<0.05)，而治療組表達量較哮喘組低(P<0.05)(見表19)；RT-PCR及Western blot檢測發現Cyclin D1在哮喘組表達較對照組為高(P<0.01)，而治療組表達量低于哮喘組(P<0.01)(見圖1)。
結論：哮喘小鼠肺組織中Cyclin D1表達量較正常組為高；孟魯司特鈉泡騰片和孟魯司特鈉泡騰顆粒均能夠抑制Cyclin D1表達，減輕氣道炎癥反應、延緩氣道重塑進程。
表19各組小鼠肺組織Cyclin D1的表達情況
兩個治療組與正常對照組相比，均P<0.05；與哮喘組相比，均P<0.05。
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