一種柿果實脫澀保鮮方法【
技術領域：
】[0001]本發明屬于植物分子生物技術和基因工程領域，設及一種柿果實脫澀保鮮的方法及其應用。【
背景技術：
】[0002]柿，原產中國，味道鮮美，營養價值高，是東亞地區（日本，中國，韓國等)最受歡迎的水果之一。柿的獨特之處在于其果實在發育期間累積大量高分子的單寧，呈現不同程度的澀味，即可溶性單寧含量越高，柿果實澀味越嚴重，而當可溶性單寧含量低于0.2%時，果實澀味則不可被感知。[0003]柿根據其脫澀類型W及種子是否影響果實的澀味及顏色可W分為四類：完全甜柿、完全澀柿、非完全甜柿和不完全澀柿。完全甜柿果實發育早期喪失合成單寧的能力，故其在樹上能自然脫澀，成熟采收的果實不呈澀味，可直接食用。然而澀柿果實由于積累了大量的單寧，澀味嚴重，采后需經脫澀處理后方可食用。[0004]澀柿品種抗性強、易豐產，而且果實晚熟、耐膽運，是世界范圍內栽培數量最大的類型。中國是柿的原產國，也是世界上柿樹栽培面積最大和柿果產量最多的國家，據統計，2011年我國柿樹種植面積為72萬公頃，產量為305萬噸。栽培品種多為澀柿，因此柿果實采后脫澀是限制柿果實產業發展的最大問題。[0005]柿果實采后脫澀的方法多有報道，例如樹上乙醇蒸汽包裹果實，高濃度的二氧化碳或氮氣處理，溫水浸泡或者交替凍融等。然而運些脫澀處理方法，或者操作手續繁雜，或者處理的柿果實快速軟化、不耐儲運。因此，針對采后柿果實脫澀的產業問題，急需一套既能使果實脫澀又能有效保持果實硬度的脫澀保鮮方法。[0006]I-MCP是一種高效、無殘留的乙締效應抑制劑，可與細胞膜上的乙締受體結合，抑制乙締受體復合物的形成，阻斷乙締所誘導的信號傳遞，進而可與延長園藝產品采后的保鮮膽藏期。因此通過低氧結合I-MCP來進行柿果實的脫澀保鮮研究，具有一定的可行性。【
發明內容】[0007]本發明的目的是公布一種柿果實采后快速脫澀并能保持其硬度的方法，使柿果實采后的快速脫澀和保鮮成為可能。W澀柿品種"鏡面柿"和"金瓶柿"脫澀保鮮為實例，對該發明方法進行具體闡述。本發明方法同樣適用于其他澀柿品種的采后脫澀保鮮。[000引本發明的具體實施步驟如下：[0009]1、柿果實的放置:首先準備所需的塑料桶，要求是塑料桶的桶壁上方和蓋子上分別有人為安裝的排氣管和通氣管，均用軟橡膠管連接，其中蓋子內側還有安裝的小風扇，接通電源后可起到混勻桶內氣體的功能。然后將從樹上采下的柿果實24h內進行田間熱去除和挑選處理，剔除壞果、病果等，盡量保證處理的柿果實無病蟲害，大小一致。挑選完畢，將柿果實按照圓柱中空形狀的擺放方式放置于帶有排氣管的塑料桶中，每個桶中放置40個柿果實，在桶底中空位置放置用信封包裹的0.化g用水拌好的高儘酸鐘的稠劑，避免接觸到柿果實。其中柿果實的放置方法按照圓柱形中空排列，W利于氣體的混勻和保證果實和氣體的充分接觸。高儘酸鐘水稠劑是為了吸收乙締，去除果實釋放的乙締對其保鮮的影響。[0010]2、柿果實的處理:根據柿果實重量和桶的體積（2化)算出化1/L處理所需的I-MCP粉末的質量，稱好后放入干燥的50ml離屯、管的底部，離屯、管粘貼于桶壁，且離屯、管口正對塑料桶壁上的排氣管口；然后用帶有通氣管的蓋子密封塑料桶后，[0011]經桶蓋的通氣管通入高純C〇2氣體，同時打開桶壁的排氣管W及桶蓋內側自帶的小風扇，進行氣體的混勻，直至檢測到化濃度含1%時結束并密封通氣管和排氣管，此時桶內氣體成分約為95%C〇2,4%化和1%〇2;最后通過桶壁的排氣管口往桶壁上的離屯、管內注入6ml40°C-5(rC的溫水，讓I-MCP通過吸收水分緩慢釋放，此時桶內氣體成分約為95%0)2,4%化，1%化和化1/L的1-MCP;應用運種低氧結合I-MCP環境處理柿果實2地，期間在處理柿果實的第30min、化和16h時各打開桶蓋內側小風扇進行一次氣體的混勻，每次持續時間為IOmin。[0012]低氧環境的維持方式為:塑料桶密封后，經桶蓋的通氣管通入高純C〇2氣體，同時打開桶壁的排氣管W及桶蓋內側自帶的小風扇，進行氣體的混勻，直至檢測到化濃度<1%時結束并密封通氣管和排氣管，此時桶內氣體成分約為95%C〇2，4%化和1%化。[0013]3、柿果實的脫澀效果檢測：將直徑12.5。111的濾紙浸泡于5%。日(：12溶液中1〇111111，至其呈現均勻的淡黃色后，置于60°C烘箱中烘干;隨機選取經過處理的柿果實，沿縱切面切開后蓋章到濾紙上(濾紙置于果實下5s)，依據濾紙上的印跡面積來檢測柿果實的脫澀效果。[0014]4、柿果實的保鮮效果檢測:選用質構儀(stableMicroSystem,UK)分析柿果實的硬度變化，各個參數設定為探頭7.5mm、穿透深度5mm、穿透速度Imm/s，每個果實檢測削去果皮的兩個垂直面的赤道部位。[0015]5、分子機制分析:應用實時定量PCR技術，分析柿果實軟化相關的基因表達變化，其中參數為：SsohstEvaGreenSupermix10山，IOuM上下游引物各化l，5ng/]ilcDNA模板化1，DEPC水化1，終體積為20iU。反應條件為：50°C2min;95°C2min;95°C15sec，55°C30sec，721：3〇36(3,40個熱循環;烙解曲線分析65°(：到95°(：，每536(3升高1°(：;結束。結果顯示，低氧結合I-MCP處理可減弱軟化相關基因的表達，進而延遲柿果實膽藏期間的軟化，達到保鮮的效果。[0016]本發明應用低氧結合I-MCP的處理來進行澀柿品種"鏡面柿"和"金瓶柿"柿果實的脫澀保鮮，通過處理后柿果實的單寧印跡和柿果實硬度的變化來檢測脫澀保鮮效果，并應用實時定量PCR技術分析了該方法使柿果實脫澀保鮮的分子機制。本發明公布的柿果實采后快速脫澀保鮮的方法，適用范圍廣泛，并能保持膽藏期間柿果實的硬度，具有重要的應用價值。[0017]本發明W澀柿品種"鏡面柿"和"金瓶柿"果實為試材，W低氧結合I-MCP的方法進行果實的脫澀保鮮處理，結果顯示該方法可使果實有效脫澀又能延緩果實膽藏期間軟化速度，是一種適用范圍廣泛的澀柿果實采后脫澀保鮮的方法。【附圖說明】[0018]圖r鏡面柿"（A)和"金瓶柿"（B)可溶性單寧印跡分析。[0019]圖2"鏡面柿"（A)和"金瓶柿"（B)果實膽藏期間硬度分析。[0020]圖3"鏡面柿"軟化相關基因的定量表達分析。[0021]圖4"金瓶柿"軟化相關基因的定量表達分析。【具體實施方式】[0022]下面結合附圖和具體實施例對本發明做進一步闡述，但實施例不限制本發明的保護范圍。在下述實施例中常規的基因操作方法參照《分子克隆實驗指南》(第=版）。[0023]實施例1:"鏡面柿"果實的脫澀保鮮處理[0024](-)實驗方法[00巧]1.塑料桶的準備[0026]塑料桶的桶壁上方和蓋子上分別有人為安裝的排氣管和通氣管，均用軟橡膠管連接，其中蓋子內側還有安裝的小風扇，接通電源后可起到混勻桶內氣體的功能。塑料桶用前需進行清洗、消毒和驚干。[0027]2.柿果實的挑選[00%]將從樹上采下的"鏡面柿"果實于2地內進行田間熱去除和挑選處理，剔除壞果、病果等，盡量保證處理的柿果實無病蟲害，大小一致。[0029]3.柿果實的放置[0030]挑選完畢，將柿果實按照圓柱中空形狀的擺放方式放置于帶有排氣管的塑料桶中，每個桶中放置40個柿果實，在中空位置放置用信封包裹的0.化g用水拌好的高儘酸鐘的稠劑，避免接觸到柿果實。[0031]4.低氧環境的創建[0032]塑料桶用帶有通氣管的蓋子密封后，經桶蓋的通氣管通入高純C〇2氣體，同時打開桶壁的排氣管W及桶蓋內側自帶的小風扇，進行氣體的混勻，直至檢測到化濃度時結束并密封通氣管和排氣管，此時桶內氣體成分約為95%C〇2，4%化和1%化。[0033]5.1-MCP的準備[0034]根據柿果實重量和桶的體積（2化)算出化1/L處理所需的I-MCP粉末的質量，稱好后放入50ml離屯、管的底部，離屯、管粘貼于桶壁，且離屯、管口正對塑料桶壁上的排氣管口；通過桶壁的排氣管口往桶壁上的離屯、管內注入6ml40°C-50°C的溫水，讓I-MCP通過吸收水分緩慢釋放。[0035]6.柿果實處理組和對照組的設置[0036]處理組的柿果實:應用低氧(95%0)2,4%化和1%〇2)結合I-MCP(化1/L)環境處理"鏡面柿"果實2地。[0037]對照組的柿果實：包括兩組，一組為應用低氧（95%C02,4%化當前第1頁1 2