魚鰾膠原蛋白肽的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種從水生生物提取的多膚的用途，尤其設及一種魚饌膠原蛋白膚的 用途。
[0002]
【背景技術】
[0003] 自由基是機體許多生化反應的中間產物，正常情況下，其產生和清除處于平衡狀 態。但是，當運一平衡被打破時，自由基會使機體處于氧化壓力之下，通過攻擊生命大分子 物質及各種細胞器，造成機體在分子、細胞及組織器官水平的各種損傷，加速機體的衰老、 疲勞并誘發各種疾病。
[0004] 根據自由基理論，人體疲勞的產生和體內自由基生成相關，因而具有抗氧化活性 的物質存在潛在的抗疲勞活性。
[0005] 天然的生物活性物質相對于市售的合成劑，具有健康安全的優勢，因此，開發海洋 生物活性物質具有重要意義。
[0006] 膠原蛋白主要存在于動物的骨、腫、軟骨和皮膚等結締組織中，是結締組織中膠原 蛋白纖維的蛋白質。膠原蛋白在發展歷史過程中，其重要的材料來源一直是陸生動物豬和 牛，因為它們具有來源豐富的皮和骨。雖然，人們早已了解了魚膠原蛋白，但遺憾的是，未能 將其作為工業上應用的重要材料，運主要是由于水產捕拱來源不穩定，缺乏規模。近年來， 環境等諸多因素引發了陸生動物疾病的產生，如瘋牛病等，陸生動物蛋白質的安全性受到 質疑;而水產養殖和水產品加工業有了很大的發展，魚皮、魚鱗、魚骨和魚內臟等魚類加工 下腳料的來源日趨穩定，且具有安全性。因而，對魚類膠原蛋白的應用與開發已經成為人們 關注的熱點。然而，膠原蛋白獨特的Ξ螺旋結構是非常穩定的，加熱時間短和加熱溫度一般 時都難W使其分解，因而不容易被消化吸收。而膠原蛋白水解而得的膠原蛋白膚卻能彌補 運一缺陷，其分子量小，易于身體吸收。國內外的研究已經表明，水產膠原蛋白膚具有多種 功能，包括抗氧化、抗疲勞、抑制血管緊張素轉化酶、提高免疫力、抗衰老和抗腫瘤等，并且 W其具有的高度生物安全性，可廣泛應用于食品、化妝品及醫藥制備等領域，開發前景非常 廣闊。
[0007] 魚饌作為漁業加工下腳料，常被廢棄或作為簡單的加工材料而得不到充分的利 用。目前，對于魚饌蛋白膚的制備及其活性的相關研究甚少，因此，W養殖大黃魚魚饌為原 料制備多膚并研究其抗氧化與抗疲勞活性，為海洋藥物和保健食品開發提供理論和實驗依 據。
[000引
【發明內容】
[0009] 本發明的目的在于提供一種魚饌膠原蛋白膚的用途。
[0010] 本發明為解決上述技術問題所采取的技術方案為：一種魚饌膠原蛋白膚的用途， 該蛋白膚的氨基酸序列為： Gly-Glu-Pr〇-Gly-Pr〇-Met-Gly-Leu-Ala-Gly-Pr〇-Leu-Gly-Pr〇-Ala-Gly-Gly-Ser-Tyr-Glu-Ser-Lys-Pro-Asn-HiS化EPGPMGLAGPLGPAGGSYESKPNH)，其分子量為6719.5718Da，具有安全無毒副作用和活性強等優點，可用于制備抗氧化保健食品或添加劑、也可用于制 備抗疲勞保健食品或添加劑。
[0011] 本發明魚饌膠原蛋白膚的制備方法，其包括W下步驟： 1)清洗步驟:選取魚饌用流動水徹底清洗，剪成小塊兒(0.5X0.5cm。用0.1ΜNaOH Wl: 10 (w/v)，每4h更換一次溶劑，然后用冷蒸饋水洗至中性，可除去非膠原蛋白等雜蛋 白；為了脫脂，接著用10%正下醇W1:10 (w/v)的比例浸泡12h，每3h更換一次溶劑，然后 用10倍體積的冷蒸饋水沖洗;在浸泡于85%左右的乙醇中12h，每3h更換一次溶劑，最后用 冷蒸饋水沖洗。將預處理好的魚饌進行勻漿，備用。
[0012] 2)酶解步驟：W包含動物、植物及微生物蛋白酶在內的4種商業化蛋白酶(木瓜 酶、膜蛋白酶、胃蛋白酶及堿性蛋白酶），分別在其最適條件下酶解勻漿后的魚饌，酶解時間 均為6h，加酶量均為魚饌勻漿質量的2%，料液比為1:3; 3)純化步驟:上述步驟處理得到的組分濃縮、冷凍干燥后，通過S邱hadexG-25層析柱 (2.6cmX60cm)進一步分離純化，樣品濃度為25mg/mL，上樣量為2mL，用去離子水洗脫，洗脫 速度為1.5mL/min，于紫外分光光度計280nm下檢測，收集各洗脫峰，濃縮后冷凍干燥，檢測 各洗脫組分的抗氧化活并收集活性較高的洗脫峰進行濃縮，冷凍干燥，W〇.l%TFA去離子水 配制ImgAiL樣品溶液，過0.22μπι微孔濾膜，利用RP-HPLC進一步分離純化，色譜分析條件為： 進樣量，色譜柱類型，C18HypersilBDS(250mmX4.6mm，5ym);柱溫，30°C;流動相 為乙臘-水溶液(含有0.1mL/100mL的Ξ氣乙酸），采用梯度洗脫，在50min洗脫時間內乙臘 濃度由0%線性遞增至100%;洗脫流速，1.OmL/min;紫外檢測波長設定280nm。同樣收集各洗 脫峰后，濃縮并冷凍干燥，經活性篩選出抗氧化活性最強的組分作為目標膚氨基酸序列為： Gly-Glu-Pr〇-Gly-Pr〇-Met-Gly-Leu-Ala-Gly-Pr〇-Leu-Gly-Pr〇-Ala-Gly-Gly-Ser-Tyr-Glu-Ser-Lys-Pr〇-Asn-His(GEPGPMGLAG 化 GPAGGSYESKPNH)。本發明具有操作方便、最終產 品純度高、具有抗氧化抗疲勞功效的優點。
[0013]
【附圖說明】
[0014]圖1是本發明的蛋白膚分子量測定質譜圖； 圖2是本發明的蛋白膚高效液相色譜C18柱洗脫峰整體洗脫圖； 圖3是本發明的蛋白膚高效液相色譜C18柱洗脫峰局部洗脫圖。
[0015]
【具體實施方式】
[0016]W下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0017]實施例:養殖大黃魚魚饌為原料制備多膚并研究其抗氧化與抗疲勞活性，為海洋 藥物和保健食品開發提供理論和實驗依據。魚饌膠原蛋白多功能膚的制備方法，其包括W 下步驟： 1)清洗步驟:選取魚饌用流動水徹底清洗，剪成小塊兒(0.5X0.5cm。用0.1ΜNaOH Wl: 10 (w/v)，每4h更換一次溶劑，然后用冷蒸饋水洗至中性，可除去非膠原蛋白等雜蛋 白；為了脫脂，接著用10%正下醇W1:10 (w/v)的比例浸泡12h，每3h更換一次溶劑，然后 用10倍體積的冷蒸饋水沖洗;在浸泡于85%左右的乙醇中12h，每3h更換一次溶劑，最后用 冷蒸饋水沖洗。將預處理好的魚饌進行勻漿，備用。
[0018] 2)酶解步驟：W包含動物、植物及微生物蛋白酶在內的4種商業化蛋白酶(木瓜 酶、膜蛋白酶、胃蛋白酶及堿性蛋白酶），分別在其最適條件下酶解勻漿后的魚饌，酶解時間 均為6h，加酶量均為魚饌勻漿質量的2%，料液比為1:3; 3)純化步驟:上述步