一種抗氧化的組合物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及保健品技術領域，尤其涉及一種抗氧化的組合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 人體衰老是一個生物學變化過程，由遺傳基因和復雜的內外環境等多種因素相互 作用引起，是生命周期中按照自然發展的規律發生在人體內、器官、組織細胞的形態和功能 的變化過程，表現為一系列隨時間增齡而顯示的全身整體性、漸進性、衰退性和不可逆的集 體變化和功能紊亂。研宄認為，機體的衰老是生理性的，是機體生理學和解剖學方面出現衰 退變化以及對體內外環境的適應能力下降和代償力減退。
[0003] 自由基學說認為：機體氧化衰老的原理之一，機體抗氧化防御系統中的各種抗氧 化酶和小分子非酶抗氧化劑與自由基的產生在正常情況下處于動態平衡狀態，研宄發現機 體隨年齡的增長，自由基過剩或抗氧化劑缺乏時細胞膜中的不飽和脂肪酸被產生的自由基 損害，引起脂質過氧化反應并對生物膜造成極大的破壞，使生物膜不飽和脂肪酸過氧化和 膜功能受損雙層結構得到破壞以及細胞器功能產生障礙，繼而損傷蛋白質、脂質等生物大 分子。在衰老有氧代謝過程中，由于自由基水平不斷增加使機體的抗氧化能力下降，細胞毒 性不同程度增加造成結構瞬間的不可逆改變損傷，環境外界刺激及線粒體、脂肪酸均可產 生超氧陰離子、過氧化氫、羥自由基等各種過氧化因子，可以觸發生理性信號通路，誘導細 胞內過氧化和細胞凋亡，加速推進衰老進程。最終，氧化衰老和細胞凋亡共同導致機體產生 衰老相關的退行性疾病。
[0004] 越來越多的研宄顯示抗氧化是預防衰老的重要步驟，因為自由基或氧化劑會將細 胞和組織分解，影響代謝功能，并會引起不同的健康問題。如果能夠消除過多的氧化自由 基，對于許多自由基引起的及老化相關疾病都能夠預防。例如：醫學研宄已經發現氧化應激 與臨床上許多疾病的發生、發展相關而與年齡無關的漸進性退變。例如：常見的癌癥、動脈 硬化、糖尿病、白內障、心血管病、老年癡呆、關節炎等，這些疾病都被認為與自由基相關。
[0005] 現有的抗氧化劑主要有SOD、原花青素等，其中：超氧化物歧化酶 Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，別名肝蛋白，是一種源于生命體的活性物質，能消 除生物體在新陳代謝過程中產生的有害物質。對人體不斷地補充SOD具有抗衰老的特殊效 果。葡萄籽提取物的主要功效成分為"原花青素0PC"，具有良好的抗氧化效果，是維生素C 和維生素E的50~70倍。超強的抗氧化效率具有清除自由基、提高人體免疫力的強力效 果。但是，這些抗氧化劑作為保健品服用后效果卻不甚顯著。
【發明內容】
[0006] 有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種抗氧化的組合物及其制備方 法。本發明提供的組合物具有顯著的抗氧化功能。
[0007] 本發明提供了一種抗氧化組合物，包括蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡 萄籽提取物。
[0008] 其中，蘋果干細胞具有良好的抗氧化功能，本發明將蘋果干細胞凍干粉、超氧化物 歧化酶與葡萄籽提取進行復配后能夠具有顯著的抗氧化功能，實驗表明，本發明提供的組 合物的抗氧化效果顯著優于單獨使用超氧化物歧化酶或葡萄籽提取物，經為期3個月的人 體試食試驗研宄，使用本發明組合物的人體內過氧化脂質下降4. 96%、谷胱甘肽過氧化物 酶升高12. 97%，其效果顯著優于單獨使用SOD或葡萄籽提取物。
[0009] 在本發明實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量 比為（10 ~20) : (8 ~15) : (8 ~15)。
[0010] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 5 :4 :4〇
[0011] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 10 :8 :15〇
[0012] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 10 :15 :8〇
[0013] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 2 :3 :3〇
[0014] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 5 :2 :2〇
[0015] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 20 :8 :15。
[0016] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 20 :15 :8。
[0017] 在一些實施例中，蘋果干細胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質量比 為 4 :3 :3〇
[0018] 本發明采用的葡萄籽提取物可為自制也可為市場直接購得，本發明對其不做限 定，其實施皆在本發明的保護范圍之內。
[0019] 作為優選，葡萄籽提取物中原花青素的含量不低于95%。
[0020] 本發明采用的蘋果干細胞凍干粉可為市場購得也可采用本發明提供的方法制備， 其實施皆在本發明的保護范圍之內。作為優選，蘋果干細胞凍干粉以本發明提供的方法制 得，該方法以蘋果新生枝條為原料，經誘導形成愈傷組織后增殖培養并擴大培養獲得蘋果 干細胞，再凍干后制得。該蘋果干細胞凍干后直接用于本發明提供組合物的制備，該凍干粉 中黃酮和多酚類物質含量豐富。
[0021] 蘋果干細胞凍干粉的制備方法包括以下步驟：
[0022] 步驟1 :蘋果新生枝條殺菌、去除木質部和髓后，接種于誘導培養基，誘導培養獲 得形成層細胞；
[0023] 步驟2 :所述形成層細胞經繼代培養，接入增殖培養基，搖床培養獲得單細胞；
[0024] 步驟3 :將所述單細胞接種于增殖培養基經擴大培養，獲得蘋果干細胞；
[0025] 步驟4 :將所述蘋果干細胞反復凍融后凍干、粉碎，獲得蘋果干細胞凍干粉；
[0026] 所述誘導培養基為含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固體培養基；
[0027] 所述增殖培養基為含有2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液體培養基。
[0028] 在本發明的實施例中，殺菌包括以下步驟：
[0029] 步驟1 :將蘋果新生枝條以水沖洗后，以濃度為10~1000mg/L的L-抗壞血酸溶 液浸泡；
[0030] 步驟2 :以體積分數為60 %~95 %的乙醇水溶液浸泡后以無菌水沖洗；
[0031 ] 步驟3 :以體積分數為10%~100%的過氧化氫水溶液浸泡后以無菌水沖洗。
[0032] 作為優選，蘋果新生枝條的長度為10cm。
[0033] 作為優選，L-抗壞血酸的濃度為120mg/L。
[0034] 優選的，步驟1中所述浸泡的時間為Imin。
[0035] 作為優選，乙醇水溶液中乙醇的體積分數為75%。
[0036] 優選的，步驟2中所述浸泡的時間為Imin。
[0037] 作為優選，步驟2中無菌水的體積為2L。
[0038] 作為優選，過氧化氫水溶液中過氧化氫的體積分數為30%。
[0039] 優選的，步驟3中所述浸泡的時間為20min。
[0040] 優選的，步驟3中所述沖洗的時間為IOmin。
[0041] 以本發明提供的殺菌方法對蘋果新生枝條進行殺菌能夠充分的殺除蘋果新生枝 條上所攜帶的真菌、細菌或病毒。以便保證蘋果新生枝條在培養過程中不被干擾，從而保證 蘋果新生枝條上的細胞更加快速的去分化。而實驗表明，本發明提供的方法能夠有效將蘋 果新生枝條細胞去分化，經誘導和擴大培養，48天左右即可獲得大量的蘋果干細胞。
[0042] 在本發明實施例中，NAA、BA和水解酪蛋白的質量比為0.5 :2 :1。
[0043] 優選的，誘導培養基中NAA的濃度為0. 5mg/L。
[0044] 優選的，誘導培養基中BA的濃度為2. Omg/L。
[0045] 優選的，誘導培養基中水解酪蛋白的濃度為1.0 mg/L。
[0046] 作為優選，誘導培養基為固體培養基，其中瓊脂的質量分數為1%。
[0047] 作為優選，誘導培養基的pH值為6. 0。
[0048] 在本發明的實施例中，步驟1中所述的接種為，每g去除木質部和髓的蘋果新生枝 條接種于IOcm 2的誘導培養基。
[0049] 在一些實施例中，誘導培養為暗培養；溫度為25°C ;時間為10天。
[0050] 經誘導培養后，形成層組織為均一生長的平板狀組織，而其他組織則為不規則的 聚集生長物。
[0051] 在一些實施例中，繼代培養為暗培養；溫度為25°C ;時間為10天。
[0052] 在本發明的實施例中，繼代培養采用遇到培養基，每g形成層細胞接種于IOcm2的 誘導培養基。
[0053] 經10天的繼代培養，形成層細胞形成愈傷組織，每IOcm2的誘導培養基上約有愈 傷組織20. 8g。
[0054] -些實施例中，增殖培養基中，2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的質量比為 2:1:1:1〇
[0055] 優選的，增殖培養基中2, 4-D的濃度為2. 0mg/L。
[0056] 優選的，增殖培養基中BA的濃度為I. 0mg/L。
[0057] 優選的，增殖培養基中水解酪蛋白的濃度為I. 0mg/L。
[0058] 優選的，增殖培養基中活性炭的濃度為I.Omg/L。
[0059] 作為優選，增殖培養基的pH值為6. 0。
[0060] 在本發明的實施例中，每g愈傷組織接入20mL增殖培養基。
[0061] 作為優選，搖床培養時，增殖培養基中還添加經滅菌