一種具有抗氧化、延緩衰老作用的當歸多肽在制備食品中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于食品技術領域，進一步屬于保健食品技術領域（也稱之為健康食品或 功能食品），具體涉及一種具有抗氧化、延緩衰老作用的當歸多肽在制備食品或保健食品中 的應用。 技術背景
[0002] 隨著全球人口老齡化趨勢逐年走高，與衰老相關的疾病的發展態勢也日益嚴峻， 成為嚴重危害人類生命健康和生活質量的重大疾病，引起了國際生物醫藥領域的廣泛和深 入關注。盡管衰老及其相關疾病的發生和發展機制較為復雜，但是大量研宄表明，氧化脅迫 損傷是其重要特征之一。根據衰老的自由基理論，當生物體處于氧化脅迫環境時，體內氧化 還原代謝失衡，促使內源性活性氧自由基增加，進而與各類生物大分子反應，引起細胞損傷 和凋亡出現機體老化和器官功能衰退的現象。因此，通過減少體內的自由基聚集，緩解氧化 脅迫是延緩衰老進程的重要策略。
[0003] 我國擁有豐富的中藥材資源，為研宄具有抗氧化、延衰老的作用的生物活性物質 提供了龐大的藥用和保健資源庫。當歸為傘形科多年生草本植物當歸的干燥根莖，傳統藥 效作用包括補血活血；調經止痛；潤燥滑腸等，已體現出寶貴的藥用保健價值。現代研宄表 明，某些植物中提取制備的多肽具有鎮痛、抗炎、抗腫瘤、抗凝血、抗氧化和抗衰老等廣泛的 藥理活性和功能，在保健品領域具有巨大的開發和應用潛力。然而，目前對當歸多肽活性功 能的研宄開發尚較少，缺乏其在抗氧化與延緩衰老方面的相關研宄。因此，積極開發具有抗 氧化與延衰作用的中藥多肽將對衰老相關疾病的預防和治療均具有重大的意義，也將為多 肽類產品的開發應用和中藥新功能的研宄做出貢獻。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種具有抗氧化、延緩衰老作用的當歸多肽在制備食品中 的應用，采用該具有抗氧化、延緩衰老作用的當歸多肽作為唯一或主要活性成分制成的食 品或保健食品，具有抗氧化、延緩衰老功效。
[0005] 本發明的上述目的是通過以下技術方案來實現的：一種具有抗氧化、延緩衰老作 用的當歸多肽在制備食品中的應用。
[0006] 本發明所述的食品優選為保健食品。
[0007] 本發明所述的當歸多肽可以單獨或者與其它活性成分合用。
[0008] 本發明所述的保健食品是以具有抗氧化、延緩衰老作用的當歸多肽作為唯一活性 成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的輔料制備獲得的。
[0009] 本發明所述的保健食品的劑型優選為粉劑、片劑、丸劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、 泡騰劑、合劑、口服液或膏劑。
[0010] 其中所述的抗氧化、延緩衰老作用是指對以病理或生理條件下發生的氧化應激反 應所產生的變化為主要特征的衰老及衰老相關疾病的防治作用。
[0011] 本發明中所述的當歸多肽優選通過以下方法制備獲得：一種當歸多肽的制備方 法，以當歸為原料，經蛋白提取、鹽析、透析和雙酶解制備獲得。
[0012] 采用本發明上述方法獲得的當歸多肽，經試驗驗證，具有抗氧化及延緩衰老的作 用，可用于制備具有抗氧化和延緩衰老作用的食品或保健食品。
[0013] 作為本發明的一種優選的實施方式，本發明中的當歸多肽具體通過以下方法制備 獲得：取當歸，進行蛋白提取，獲得蛋白提取液，將蛋白提取液進行鹽析，鹽析后離心，取蛋 白沉淀，將蛋白沉淀采用透析袋進行透析處理，取透析截留液，將透析截留液干燥獲得沉淀 物，將沉淀物用水溶解后加入雙酶進行酶解，酶解產物干燥后獲得當歸多肽。
[0014] 在上述當歸多肽的制備過程中，各工序的具體參數如下：
[0015] 蛋白提取時，采用Tris-HCl緩沖液提取，其中Tris-HCl緩沖液的濃度為1? 20mmol/L，Tris-HCl緩沖液與當歸的用量關系為5?50mL :lg，Tris-HCl緩沖液的pH值為 7. 0?9. 0,提取時間優選為8?24h。
[0016] 鹽析時采用硫酸銨，在蛋白提取后獲得的蛋白提取液中加入硫酸銨至其飽和度為 50 ?90%。
[0017] 透析時，透析袋的截留分子量為1. 0?5. OkD。
[0018] 雙酶為胰酶和木瓜酶，酶解溫度為37?80°C，酶解時間為2?10h。
[0019] 上述方法獲得的當歸多肽采用超濾法進行截留分段，可得到不同分子量范圍的多 肽組分。
[0020] 所述截留分段為依次使用截留分子量為5kDa和3kDa超濾離心管離心，加入當歸 多肽溶液后于6000?SOOOrpm下離心進行截留分段，按照分子量大小依次分為大于5kDa、 3?5kDa和小于3kDa的三個組分，干燥后獲得相應當歸多肽組分。
[0021] 截留分段的當歸多肽組分經過凝膠層析再純化，利用氨基酸測序技術和數據庫比 對法測定可得到多肽組成和氨基酸序列。
[0022] 上述小于3kDa的當歸多肽組分經過凝膠層析再純化，利用氨基酸測序技術和數 據庫比對法測定已得到多肽組成和氨基酸序列。具體如下：
[0023] AGLQFPVGR、AMPVEVVQF、AGFAGDDAPR、AVFPSIVGRPR、AAPFPGQKSLQR、DLTDFL、 ESTAKQVIR、EGGDGGYGGGGGGSRW、EGGGGGYGGGGGGYGGR、GGVLPNINPVL、GTIAGGGVIPH、 GGGGYGGGGGGYGGGGGGY、 IGGIGTVPVGR、 IKGTIAGGGVIPH、 IIGATNPAESAPGTIR、 KKVGYNPDKIPFVPISGFE⑶NMIER、LTADILPR、LASSGIDHEGRLPR、MIAFNKEQDTDLQSK、PSIVGRP、 QTVAVGVIK、REGGGGGYGGGGGGYGGR、TTAGILLPEK、TKMDEGWTKK、VWNIPPTLK、VETGVIKPGM、 VLVSGSIHYPR、YGVSGYPTLK(即如序列表中 SEQ ID NO. 1 ?SEQ ID N0. 28 所示）。
[0024] 所述的凝膠層析柱的填充材料優選為葡聚糖凝膠、修飾葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺 凝膠、瓊脂糖類凝膠或多孔玻璃微球。
[0025] 本發明提供的當歸多肽具有抗氧化、延緩衰老作用，主要表現在能夠在整體動物 水平上緩解由氧化應激引發的早衰和正常衰老，并延長壽命，因此可用于延緩衰老和防治 氧化、衰老有關的疾病方面產品的開發和應用。
[0026] 本發明具有如下優點：
[0027](1)本發明中的當歸多肽在體外，以一定的羥自由基清除率為特征顯示其具有清 除活性氧的能力；在整體動物水平上，以氧化應激模型和衰老相關的模型進行試驗，揭示 其能夠顯著延長氧化脅迫條件下秀麗線蟲的存活時間，減少衰老線蟲體內的脂褐素水平， 延長其平均壽命等表征，并證實當歸多肽在氧化應激和衰老條件下是通過降低體內活性氧 自由基（ROS)水平，降低脂質過氧化物的含量來實現其顯著的抗氧化和延緩衰老作用的； 其中分子量小于3kDa的當歸多肽組分具備更為顯著的體內外抗氧化活性和延緩衰老的作 用，如可顯著地提高秀麗線蟲氧化脅迫條件下的生存率、延長壽命、減少衰老相關代謝產物 的沉積、降低體內外氧化自由基的水平等；
[0028] (2)本發明經研宄發現，當歸多肽在動物整體水平上對氧化應激誘發的早衰具有 抑制作用，并能延長正常衰老狀況下生物群體的平均壽命、延緩衰老，表明其可應用于具有 抗氧化、延緩衰老功效的保健食品中，從而為中藥現代化和多肽產品深入應用提供了新方 向，也可為延緩衰老和防治衰老相關疾病做出貢獻；
[0029] (3)本發明中當歸多肽的制備方法具有周期短，試劑消耗少，工藝簡單，安全無毒， 穩定高效等特點，適合工業化生產。
【附圖說明】
[0030] 下面通過具體的實施方式及藥效學研宄結果對本發明作進一步說明。
[0031] 圖1為實施例4中當歸多肽一定梯度的濃度下呈劑量依賴型地延長氧化脅迫條 件下秀麗線蟲的生存時間，提高存活率，說明當歸多肽能夠緩解由氧化脅迫引起的早衰現 象；
[0032] 圖2為實施例5中當歸多肽在一定梯度的濃度下隨著濃度增加而增強對羥自由基 的清除能力，說明當歸多肽具有能夠清除以羥自由基為代表的活性氧的作用；
[0033] 圖3為實施例6中當歸多肽在一定梯度濃度下隨著濃度增加而增強對羥自由基的 清除能力，說明濃度當歸多肽具有能夠清除以羥自由基為代表的活性氧的作用；
[0034] 圖4為實施例8中當歸多肽各組分在體外對羥自由基具有一定清除率，說明經超 濾截留分段后得到的當歸多肽各組分均具有清除羥自由基的能力；
[0035] 圖5為實施例9中當歸多肽各組分能延長氧化脅迫條件下秀麗線蟲的生存時間， 提高存活率，說明經超濾截留分段后得到的當歸多肽三個組分均能緩解氧化脅迫引起的早 衰現象，且小于3kDa的多肽組分效果最優；
[0036] 圖6為實施例10中小于3kDa的當歸多肽組分在一定梯度濃度下成呈劑量依賴型 地延長氧化脅迫條件下秀麗線蟲的生存時間，提高存活率，說明當歸多肽能夠緩解由氧化 脅迫引起的早衰現象；
[0037] 圖7為實施例11中小于3kDa的當歸多肽組分在各濃度時能夠延長秀麗線蟲壽命 的作用；
[0038] 圖8為實施例12中小于3kDa的當歸多肽組分在各濃度下可減少衰老相關的體內 自發熒光標記物脂褐素的沉積量；
[0039] 圖9為實施例13中小于3kDa的當歸多肽組分相應濃度下對降低衰老早期（圖 9A)和外界氧化脅迫條件（