本發明涉及醫療保健領域,具體地涉及一種增強免疫力的組合物、其制備方法和應用。
背景技術:
從生物學上來講,免疫力是指抵御疾病發生、發展的能力。免疫力是人體自身的防御機制,是人體識別和消滅外來侵入的任何異物(病毒、細菌等),處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞以及識別和處理體內突變細胞和病毒感染細胞的能力。我們時常說,如果免疫力低下,就容易罹患疾病,中醫則認為“正氣存內,邪不可干”,所謂“正氣”即為免疫能力。其實,中醫更注重平衡,現代免疫學研究中經常引用“陰陽”的概念,以說明免疫分子之間相互制約平衡關系;某一方或一種免疫因子表達過多或不足,則打亂免疫平衡,造成機體損害與疾病發生。而中醫認為健康的狀態為“陰平陽秘”,而一方過于亢進,機體內部各系統之間紊亂,則導致疾病,所謂“亢則害,承乃制”。因此,免疫重在調節,中醫重在調理,一個“調”字,均是強調使紊亂狀態歸于平衡。
免疫力低下的主要影響因素:1)年齡因素:人生有兩個免疫能力低下的階段,即兒童階段和老年階段。兒童的免疫系統尚未成熟,功能不健全,免疫力低下;而老年機體器官功能衰退、獲得營養能力下降,再加之免疫器官逐漸萎縮衰退,導致免疫力下降,與此相對應,兒童和老人也是疾病高發的兩個階段。2)不良的生活方式和習慣:精神緊張、營養不良、缺乏運動或睡眠不足,濫用酒精和吸煙等,都可能抑制免疫系統,降低機體免疫力。3)其他因素:環境中的有毒物質、某些藥物、放射治療以及過量的抗生素也會抑制免疫系統。通過對導致免疫力低下的主要原因的分析,不難看出老年人及受社會因素和不良的生活方式影響而處于亞健康狀態的人群是免疫力低下的主要易感人群。
免疫力低下是現代人普遍存在的一種亞健康狀態,是多數感染類疾病的誘因,嚴重影響著人們的身體健康。截至2004年底,中國60歲以上老人有1.4億,占全國總人口的近11%;65歲以上的老人為9680萬,占全國總人口的7.6%。中國老年人口的數量比很多國家的總人口還要多得多。而且,從人口發展趨勢來看,中國老齡化最高峰還沒到來,大約在2030至2040年之間,那時老年人口將有可能占到全國總人口的25~28%。2012年國家人口計生委稱,到2050年我國65歲以上老人將達到3.6億,人口老齡化速度快、規模大,問題嚴重。據統計,美國每年有600萬人被懷疑處于亞健康狀態,年齡多在20~45歲之間,有14%的成年男性和20%的婦女表現有明顯的疲勞,其中1/8發展為cfs(慢性疲勞綜合征)。日本國立公共衛生院做的一次調查研究顯示,在全國5000余名15~65歲人士中,表示真正感到“非常疲勞”的竟高達60%,其中因工作量大、家務重、精神緊張的占44%,還有36%說不出原因。據2002年4月8日“21世紀中國亞健康市場學術成果研討會”提供的有關統計資料顯示,我國約有15%的人是健康的,15%的人非健康,70%的人呈亞健康狀態,亞健康人數超過9億。
綜上所述,免疫力低下人群的數量是相當龐大的,因此開發具有增強免疫力保健功能的產品是非常有必要的。
技術實現要素:
本發明的目的是提供一種增強免疫力的組合物,其中所述組合物由鐵皮石斛凍干粉、黃芪提取物、以及任選的藥學上可接受的輔料組成。
在本發明的組合物中,鐵皮石斛凍干粉與黃芪提取物的重量份數之比優選為500∶50~100,更優選為500∶60~90,進一步優選為500∶70~80,最優選為500∶75。
根據本發明組合物的一個優選實施方案,所述組合物由重量份數之比為500∶75∶425的鐵皮石斛凍干粉、黃芪提取物、藥學上可接受的輔料,再添加適量的潤濕劑制成。
在本發明的組合物中,所述藥學上可接受的輔料選自固體分散載體、異麥芽酮糖醇、三氯蔗糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、預膠化淀粉或羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種。
優選地,本發明的組合物通過將鐵皮石斛凍干粉、黃芪提取物、固體分散載體混合,經固體分散工藝制備而得。更優選地,所述固體分散載體選自pvpk30、peg-6000、泊洛沙姆-188、右旋糖酐、山梨醇、去氧膽酸或乙基纖維素中的一種或多種。
進一步優選,鐵皮石斛凍干粉和黃芪提取物的總質量與固體分散載體的質量百分比為80~99%∶1~20%,優選為85~95%∶5~15%,進一步優選為90%∶10%。
可以在本發明的組合物中添加藥學上可接受的輔料,制成膠囊劑、片劑、顆粒劑、微丸劑等固體口服制劑。
在本發明所述的藥學上可接受的輔料中,為了改善口感,可以選擇異麥芽糖醇和三氯蔗糖作為甜味劑。異麥芽酮糖醇為無氣味、白色、結晶狀糖醇,不吸濕,甜味純正,甜度為蔗糖的50~60%,有遮蔽苦味的作用,低熱卡,熱值僅為蔗糖的50%,熱穩定性好,對酸、堿穩定,各種微生物很難利用,不致齲齒。異麥芽酮糖醇又稱帕拉金糖醇,國外稱益壽糖,是近年來國際上新興的功能性食用糖醇,是一種理想的代糖品。三氯蔗糖是我國批準使用的甜味劑。其甜度約為蔗糖的600倍,甜味純正,甜味特性與甜味質量和蔗糖十分相似。在一般食品加工和儲存過程中都非常穩定,水溶性很好。gb2760規定三氯蔗糖的最大使用劑量為1.5g/kg。因此,選擇異麥芽酮糖醇和三氯蔗糖為甜味劑。
本發明還提供一種如上所述的組合物在制備增強免疫力的產品例如具有提高免疫力功能的保健食品、功能性普通食品或特殊醫學食品或特殊膳食食品中的用途。
本發明還提供一種增強免疫力的產品,其特征在于,所述產品包括如本發明所述的組合物。
鐵皮石斛、黃芪均為傳統提高免疫力的藥食同源物質,本發明采用鐵皮石斛凍干粉和黃芪提取物,按特定比例配伍,保留了全營養及功能成分,使生物利用度得以提高,保健功能協同,從而達到提高免疫力技術效果。
本發明還提供一種制備本發明所述的組合物的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:
(1)將干凈新鮮的鐵皮石斛切成小段,然后在-80℃~-70℃的溫度下冷凍干燥至水分含量≤10%,得到凍干品;將凍干品超微粉碎至800~1000目,即得鐵皮石斛凍干粉;
(2)將干黃芪粉碎,然后將得到的黃芪粉用體積百分比濃度為70~80%的乙醇水溶液滲漉,得到乙醇提取液;藥渣用80℃~95℃的水提取,得到水提取液;將乙醇提取液和水提取液合并,濃縮、干燥得到黃芪提取物;
(3)將鐵皮石斛凍干粉、黃芪提取物以及任選的藥學上可接受的輔料混合,得到所述組合物。
優選地,在本發明方法的步驟(2)中,所述水提取的條件為:料液比為按質量體積(kg/l)計1∶10,共提取三次,每次提取1.5~2小時。
優選地,在本發明方法的步驟(3)中,所述藥學上可接受的輔料選自固體分散載體、異麥芽酮糖醇、三氯蔗糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、預膠化淀粉或羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種;更優選地,所述固體分散載體選自pvpk30、peg-6000、泊洛沙姆-188、右旋糖酐、山梨醇、去氧膽酸、乙基纖維素中的一種或多種。
根據本發明的方法,步驟(3)的操作過程如下:用體積百分比濃度為70%的乙醇水溶液溶解固體分散載體,然后加入鐵皮石斛凍干粉和黃芪提取物,充分研磨后蒸去溶劑,干燥即得。
根據本發明的方法,所述方法還包括將所述組合物制成片劑、顆粒劑、膠囊劑或微丸劑的步驟。
本發明采用了冷凍干燥技術,確保鐵皮石斛的營養、功能成分的最大限度地保留,采用超微破壁粉碎至800~1200目,可以改善營養及功能成分溶解性能,提高溶出速率,確保營養及功能成分充分暴露,從而達到提高生物利用度的目的。黃芪采用不同溶劑分層提取,可以針對黃芪中的氨基酸、皂苷、黃酮、多糖等成分的理化性質,確保全營養及功能成分的全面轉移、保留;黃芪提取物可以發揮多組分、多靶點的協同作用,達到全面提高人體免疫力的目的。本發明通過將特定的鐵皮石斛凍干粉與黃芪提取物按特定的比例制備成相應的組合物,可以顯著增強人體免疫力。
本發明還使用了固體分散技術,與現有技術相比具有如下優勢:(1)混合均勻、計量準確;(2)顯著提高石斛、黃芪營養及功能成分穩定性和生物利用度;(3)掩蓋黃芪提取物不良口感;(4)利于制劑成型。
本發明的保健食品以鐵皮石斛和黃芪提取物為主要原料,這兩種原料不在“十八反”、“十九畏”之列,無配伍禁忌。鐵皮石斛自古以來就有“藥中黃金”之美譽,民間稱其為“救命仙草”。其味甘,性微寒。歸胃、腎經。具有益胃生津,滋陰清熱的功效。黃芪古代寫作黃耆,李時珍在《本草綱目》中釋其名曰:“耆,長也。黃耆色黃,為補藥之長,故名。”其味甘,性微溫。歸肺、脾經。具有補氣升陽,固表止汗,利水消腫,生津養血,形滯痛痹,托毒排膿,斂瘡生肌的功效。兩者配伍,相輔相成,達到扶正祛邪、增強免疫力之功效。
經保健食品安全性毒理學評價試驗證實,本發明的組合物安全、無毒,可長期服用。經動物功能試驗證明,本發明的組合物具有增強免疫力的保健功能;經衛生學、穩定性、功效成分試驗證實,本發明的組合物質量穩定、可控,劑型合理。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明的技術方案進行詳細的說明。
實施例1
鐵皮石斛凍干粉的制備
(1)選取新鮮鐵皮石斛,除雜,切成小段,然后在冷凍器中、-80℃~-70℃的溫度下冷凍干燥8~15小時,水分含量降至≦10%,得到凍干品;將凍干品超微粉碎,過800目篩,即得鐵皮石斛凍干粉,備用。
實施例2
黃芪提取物的制備
將干黃芪粉碎,然后將黃芪粉用體積百分比濃度為70%的乙醇水溶液滲漉,得到乙醇提取液;藥渣用80℃的水提取,料液比(質量體積比,kg/l)為1∶10,共提取三次,每次提取1.5~2小時,得水提取液;將乙醇提取液和水提取液混合,在85℃~95℃的溫度下減壓濃縮、干燥得到黃芪提取物。
實施例3
鐵皮石斛凍干粉、黃芪提取物組合物的制備
(1)配料:按質量份數比500∶75分別稱取鐵皮石斛凍干粉和黃芪提取物;按鐵皮石斛凍干粉和黃芪提取物總重量的10%稱取固體分散載體pvpk30。
(2)混合:將鐵皮石斛凍干粉、黃芪提取物和固體分散載體混合均勻。
(3)固體分散:向步驟(2)所得的混合物中加入適量的潤濕劑,使其分散完全,即得組合物。
實施例4
鐵皮石斛咀嚼片的制備
片劑選擇濕法制粒的工藝路線,主要工序包括粉碎、過篩、稱量、混合、制軟材、制粒、干燥、整粒、壓片、內包裝、外包裝、檢驗入庫等。
輔料種類及用量篩選
由于是咀嚼片,口感是篩選輔料時的一個重要因素。在本實施例中,選擇異麥芽酮糖醇和三氯蔗糖為甜味劑。
在原料種類及用量已確定的基礎上,鐵皮石斛日服用2g,黃芪提取物日服用0.3g,通過對原料口感的判斷及工藝的要求,設計片的規格的為1.0g/片,每天服用4片,則活性原料占配方總質量的比例為57.5%(其中鐵皮石斛占50%,黃芪占7.5%),輔料占42.5%(其中異麥芽酮糖醇:38.44%,三氯蔗糖:0.06%,聚維酮k30:3.0%,硬脂酸鎂:1.0%)。本實施例以體積百分比濃度為50%的乙醇水溶液為潤濕劑進行制粒,考察顆粒的成型性等指標,結果如下表1所示。
表1
結果顯示,顆粒成型性較好,口感適宜,休止角符合要求,因此輔料用量定為異麥芽酮糖醇38.44%、三氯蔗糖0.06%,聚維酮k303.0%,硬脂酸鎂1.0%,并以體積百分比濃度為50%的乙醇水溶液為潤濕劑,制粒時將聚維酮k30、三氯蔗糖溶解于乙醇中,每100g混合粉加入體積百分比濃度為50%乙醇水溶液30ml。
三批中試數據見下表2。
表2
由中試數據可以看出,工藝切實可行;從成品率來看,工藝重現性較好。證明了工藝的穩定性,適合工業化大生產。
實施例5
鐵皮石斛咀嚼片的免疫學實驗
1.材料與方法
1.1樣品
本實驗設以實例1至4制備得到的鐵皮石斛凍干粉,黃芪提取物,鐵皮石斛黃芪組合物及鐵皮石斛咀嚼片分設以下試驗樣品。
試驗樣品1:鐵皮石斛、黃芪組合物
試驗樣品2:鐵皮石斛咀嚼片
對照樣品1:鐵皮石斛凍干粉
對照樣品2:黃芪提取物
本試驗樣品依據受試樣品的人體推薦劑量為4.0g/人/日(以60kg體重計),按人體推薦劑量的10倍每天給予小鼠0.67g/kg·bw/d的上述四個試驗樣品持續一個月,進行小鼠細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能及nk細胞活性測定。
1.2實驗動物
選用spf級ci/f1代健康雌性小鼠200只,體重為18.0~21.9g。
小鼠按體重隨機分為i、ii、iii、iv、v五個大組,每大組40只小鼠,分成4個樣品組,每個樣品組10只。其中i組小鼠進行cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化、nk細胞活性試驗;ii組小鼠進行耳廓腫脹試驗;iii組小鼠進行抗體生成細胞檢測和半數溶血值hc50的測定;iv組小鼠進行小鼠碳廓清試驗;v組小鼠進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。
試驗動物在溫度為20~25℃、相對濕度為40%~70%的屏障系統中飼養。
1.3受試物給予方式
受試樣品用無菌水配制,每組樣品的配制濃度都為67mg/ml,經口每日一次給予小鼠相應受試物,小鼠灌胃量為0.1ml/10g·bw。連續灌胃一個月后測定各項增強免疫力功能指標。
2.試驗方法
2.1cona誘導小鼠脾淋巴細胞轉化試驗——mtt法
各劑量組動物連續灌胃一個月后,頸推脫臼法處死動物,無菌取脾,置于盛有適量無菌hank's液的小平皿中,研磨脾臟,制成單個細胞懸液,經200目篩網過濾,用hank's液洗2次,每次離心10min(1000r/min),然后將細胞懸浮于1mlrpmi1640完全培養液中,臺酚蘭染色計數活細胞數(均在95%以上),用rpmi1640完全培養液調整細胞濃度為3×l06個/ml。將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中,每孔1ml,一孔加75μlcona液(100μg/ml),另一孔作為對照,置37℃、5%co2培養箱中培養72h。培養結束前4h,每孔輕輕吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培養液,同時加入mtt(5mg/ml)50μl/孔,繼續培養4h。培養結束后,每孔加入1ml酸性異丙醇,吹打混勻,使紫色結晶完全溶解。將溶解液移入96孔培養板中,每孔做三個平行孔,用酶標儀在波長570nm下測定各孔吸光度值。
淋巴細胞增殖能力=加cona的光密度值-不加cona的光密度值
用加cona孔的光密度值減去不加cona孔的光密度值代表淋巴細胞的增殖能力,如受試樣品組的光密度差值顯著高于對照組的光密度差值,則可判定該項試驗結果為陽性。反之則反。
2.2dnfb誘導小鼠遲發型變態反應(dth)——耳腫脹法
各劑量組動物連續灌胃一個月后,每鼠用剃毛機將腹部毛剃去,范圍約3cm×3cm,用10mg/mldnfb溶液50μl均勻涂抹致敏。5日后用10mg/mldnfb溶液l0μl均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進行攻擊,攻擊后24h頸推脫臼處死小鼠,剪下左右耳殼,用打孔器取下直徑8mm耳片,稱重。
耳重差(mg)=右耳重(mg)-左耳重(mg)
用左右耳重量之差表示dth的程度。若受試樣品組的重量差值顯著高于對照組的重量差值,則可判定該項試驗結果陽性。反之則反。
2.3抗體生成細胞檢測——jerne改良玻片法
各劑量組動物連續灌胃一個月后,每只鼠腹腔注射2%(v/v)的srbc懸液0.2ml進行免疫,4d后小鼠頸推脫臼處死,取出脾臟,放在盛有適量無菌hank's液的小平皿中,研磨脾臟,制成細胞懸液,經200目篩網過濾,離心(1000r/min)10min,用hank's液洗2遍,最后將細胞懸浮于5mlrpmi1640培養液中,計數細胞數,用rpmi1640培養液調整細胞濃度為5×l06個/ml。將表層培養基加熱溶解后,放45℃水浴保溫,與等量ph7.2~7.4兩倍濃度的hank's液混合,分裝小試管,每管0.5ml,再向管內加10%srbc(v/v,用sa緩沖液配制)50μl,20μl脾細胞懸液(5×l06個/ml),迅速混勻,傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上,做兩個平行片,待瓊脂凝固后,將玻片水平扣放在片架上,放入37℃、5%co2培養箱中孵育1.5h,然后將制備好的補體1∶8稀釋后加入到玻片架凹槽內,繼續孵育1.5h后,計數溶血空斑數。
溶血空斑數=溶血空斑計數×10
用空斑數/106脾細胞來表示,如果受試樣品組的空斑數顯著高于對照組的空斑數,則可判定該項試驗結果陽性。反之則反。
2.4血清溶血素測定——半數溶血值(hc50)
各劑量組動物連續灌胃一個月后,制備2%(v/v)的srbc懸液,每只鼠腹腔注射0.2ml進行免疫,4d后小鼠眼底靜脈叢取血于離心管內,放置lh,2000r/min離心l0min,分離并收集血清。血清200倍稀釋后,按檢驗方法測定樣品管及srbc半數溶血時的光密度值。溶血素的量以半數溶血值(hc50)表示。
溶血素的量以半數溶血值(hc50)表示,如果受試樣品組的hc50顯著高于對照組的hc50,則可判定該項試驗結果陽性。反之則反。
2.5小鼠碳廓清試驗
各劑量組動物連續灌胃一個月后,每鼠尾靜脈注入4倍稀釋的印度墨汁(0.1ml/10g·bw),待墨汁注入,立即計時。注入墨汁后2min及10min分別從眼內眥靜脈叢取血20μl,并將其加到2ml0.1%na2co3溶液中,用酶標儀在600nm波長處測光密度值,并取胸腺、肝、脾稱重,利用光密度值、肝重和脾重計算吞噬指數a。另計算胸腺/體比、脾/體比。
以吞噬指數a表示小鼠碳廓清的能力。如果受試樣品組的吞噬指數a顯著高于對照組的吞噬指數a,則可判定該項試驗結果陽性。反之則反。
2.6小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗——半體內法
各劑量組動物連續灌胃一個月后,制備20%(v/v)的雞紅細胞懸液,每只鼠腹腔注射1ml,間隔30min,頸推脫臼處死小鼠,將其仰位固定于鼠板上,正中剪開腹壁皮膚,經腹腔注入生理鹽水2ml,轉動鼠板1min,然后吸出腹腔洗液1ml,平均分滴于2片載玻片上,放入墊有濕紗布的搪瓷盒內,移置37℃恒溫培養箱孵育30min,然后,于生理鹽水中漂洗,晾干,以1∶1丙酮甲醇溶液固定,4%(v/v)giemsa-磷酸緩沖液染色3min,再用蒸餾水漂洗晾干,封片,光鏡下觀察。
如果受試樣品組的吞噬百分率或吞噬指數與對照組比較,差異均有統計學意義,則可判定該項試驗結果陽性。反之則反。
2.7nk細胞活性測定——乳酸脫氫酶測定法
各劑量組動物連續灌胃一個月后,頸推脫白處死小鼠,無菌取脾,置于盛有適量無菌hank's液的小平皿中,研磨脾臟,制成單細胞懸液,經200目篩網過濾,用hank's液洗2次,每次離心10min(1000r/min),棄上清將細胞漿彈起,加入0.5ml滅菌水20秒,裂解紅細胞后再加入0.5ml2倍hank's液及8mlhank's液,離心10min(1000r/min),用含10%小牛血清rpmi1640完全培養液重懸,1%冰乙酸稀釋后計數,臺酚蘭染色計數活細胞數(均在95%以上),用rpmi1640完全培養液調整細胞濃度為2×l07個/ml。
試驗前24h將靶細胞(yac-1細胞)傳代培養,應用前以hank's液洗3次,用rpmi1640完全培養液調整細胞濃度為4×l05個/ml。取yac-1細胞和脾細胞各100μl(效靶比50∶1)加入u型96孔培養板中,yac-1細胞自然釋放孔加yac-1細胞和培養液各100μl,yac-1細胞最大釋放孔加yac-1細胞和2.5%triton各100μl,上述各項均設三個平行孔,于37℃、5%co2培養箱中培養4h,然后將96孔培養板以1500r/min離心5min,每孔吸取上清液100μl置平底96孔培養板中,同時加入ldh基質液100μl,反應10min,每孔加入1mol/l的hcl30μl,在酶標儀490nm處測定光密度值。
如果受試樣品組的nk細胞活性顯著高于對照組的nk細胞活性,則可判定該項試驗結果陽性。反之則反。
2.8試驗數據統計:用spss10.0軟件對各試驗原始數據進行方差齊性檢驗,滿足方差齊要求的數據資料,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理;對非正態分布或方差不齊的數據資料進行適當的變量轉換,待滿足正態或方差齊要求后,用轉換所得的數據進行統計處理。
2.9結果判定:在細胞免疫功能(cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化,dnfb誘導小鼠dth)、體液免疫功能(抗體生成細胞檢測,血清溶血素測定)、單核-巨噬細胞功能(小鼠碳廓清,小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞)、nk細胞活性四個方面只需任兩個方面結果陽性,可判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。
3.結果
試驗過程中動物飲水攝食正常,外觀無異常。各試驗樣品小鼠的初始體重之間無顯著差異。經灌胃飼養一月后,各個試驗樣品組小鼠的終末體重也無明顯差異。
3.1受試品對cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化的影響
經口給予小鼠相同劑量的不同受試樣品一個月后,用mtt法進行cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗,計算加cona孔與不加cona孔吸光度的差值,并對其進行方差齊性檢驗,滿足方差齊性要求,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表3結果可見,試驗品與對照品比較,試驗品加cona孔與不加cona孔吸光度的差值明顯高于對照品,差異有統計學意義。試驗樣品1與試驗樣品2之間比較,加cona孔與不加cona孔吸光度的差值無明顯差異。
表3
3.2受試品對dnfb誘導小鼠dth的影響
經口給予小鼠同劑量的不同受試樣品一個月后,用耳腫脹法進行dnfb誘導小鼠dth實驗,計算耳殼增重,并對其進行方差齊性檢驗,不滿足方差齊性要求,用秩和檢驗進行統計處理。由表4結果可見,試驗品耳殼增重高于對照品,差異有統計學意義。試驗樣品1與試驗樣品2之間比較,耳殼增重無顯著差異。
表4
3.3受試品對小鼠抗體生成細胞(溶血空斑數)的影響
經口給予小鼠同劑量的不同受試樣品一個月后,用jerne改良玻片法進行小鼠抗體生成細胞實驗,計算溶血空斑數,并對其進行方差齊性檢驗,滿足方差齊性要求,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表5結果可見,試驗品小鼠溶血空斑數高于對照品,差異有統計學意義。試驗品1與試驗品2比較,小鼠溶血空斑數無顯著差異。
表5
3.4受試品對小鼠血清半數溶血值(hc50)的影響
經口給予小鼠同劑量的不同受試樣品一個月后,用半數溶血值法測定小鼠的血清半數溶血值(hc50),并對其進行方差齊性檢驗,滿足方差齊性要求,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表6結果可見,試驗品小鼠血清半數溶血值(hc50)明顯高于對照品,差異有統計學意義(p<0.05)。試驗品1與試驗品2比較,小鼠血清半數溶血值無顯著差異。
表6
3.5受試品對小鼠碳廓清能力的影響
經口給予小鼠同劑量的不同受試樣品一個月后,進行小鼠碳廓清實驗,計算吞噬指數a,并對其進行方差齊性檢驗,滿足方差齊性要求,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表7結果可見,試驗品小鼠吞噬指數a與對照品比較,差異均無統計學意義。試驗樣品1與試驗樣品2比較,小鼠吞噬指數a無顯著差異。
表7
3.6受試品對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率及吞噬指數的影響
經口給予小鼠同劑量的不同受試樣品一個月后,用半體內法進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗,計算吞噬指數及吞噬百分率,并將吞噬百分率經sin-1p1/2(p為吞噬百分率,用小數表示)轉化后進行方差齊性檢驗,吞噬百分率和吞噬指數滿足方差齊性要求,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表8結果可見,試驗品吞噬百分率及吞噬指數與對照品比較,差異均無統計學意義。試驗品1與試驗品2比較吞噬百分率及吞噬指數無顯著差異。
表8
3.7受試品對小鼠nk細胞活性的影響
經口給予小鼠同劑量的不同受試品一個月后,用乳酸脫氫酶測定法進行小鼠nk細胞活性測定,將nk細胞活性經sin-1p1/2(p為nk細胞活性,用小數表示)轉化后進行方差齊性檢驗,滿足方差齊性要求,用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表9結果可見,試驗品nk細胞活性高于對照品,差異有統計學意義。試驗品1與試驗品2比較無顯著差異。
表9
通過以上試驗研究,結果顯示鐵皮石斛咀嚼片及鐵皮石斛、黃芪組合物具有以下功能優越性:
(1)細胞免疫功能:cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗中,試驗品加cona孔與不加cona孔吸光度的差值高于對照品,差異有統計學意義(p<0.05);dnfb誘導小鼠dth試驗中,試驗品耳殼增重高于對照品,差異有統計學意義(p<0.05)。此項為陽性。
(2)體液免疫功能:抗體生成細胞檢測試驗中,試驗品小鼠溶血空斑數高于對照品,差異有統計學意義(p<0.05);小鼠血清半數溶血值試驗中,試驗品小鼠血清半數溶血值(hc50)高于對照品,差異有統計學意義(p<0.05)。此項為陽性。
(3)單核-巨噬細胞功能:碳廓清試驗中,試驗品小鼠吞噬指數a與對照品比較,差異均無統計學意義(p>0.05);雞紅細胞吞噬試驗中,試驗品吞噬百分率及吞噬指數與對照品比較,差異均無統計學意義(p>0.05)。此項為陰性。
(4)nk細胞活性:小鼠nk細胞活性測定試驗中,試驗品nk細胞活性高于對照品,差異有統計學意義(p<0.05)。此項為陽性。
根據《保健食品檢驗與評價技術規范》之增強免疫力功能試驗的結果判定,在本試驗條件下鐵皮石斛、黃芪組合物及鐵皮石斛咀嚼片具有比單純的鐵皮石斛凍干粉或黃芪提取物更好的增強免疫力功能。
(5)通過兩個試驗樣品的數據對比可知,鐵皮石斛、黃芪組合物與其制劑鐵皮石斛咀嚼片在增強免疫力功能的作用上無明顯差異。