用于制造癌癥組合物的方法
【專利說明】用于制造癌癥組合物的方法
[00011 優先權
[0002] 本申請要求2013年3月15日提交的美國臨時申請第61/791,909號的優先權，該臨 時申請在此通過引用以其整體并入。 發明領域
[0003] 本發明涉及制造對癌癥有用的前藥化合物的方法。在一個實例中，本發明涉及制 造前藥的方法以及制造其某些中間體的方法，所述前藥包括連接至具有序列Asp-Glu*Glu* Glu*Glu(其中用*指示的鍵中的至少一個是γ羧基鍵合)的肽的天冬氨酸的毒胡蘿卜素衍生 物8-0-( 12-氨基十二烷酰基)-8-0-去丁酰基毒胡蘿卜素（12ADT)，并且具有式1的式：
[0004]
[0005] 本發明還涉及通過本文闡明的工藝獲得的化合物和中間體。
[0006] 發明背景
[0007] 一種肽前藥化合物，其被鑒定為G-202并且包括被連接至具有序列Asp-Glu*Glu* Glu*Glu(其中用*指示的鍵中的至少一個是γ羧基鍵合)的肽的天冬氨酸的毒胡蘿卜素衍生 物8-0-(12-氨基十二烷酰基)-8-0-去丁酰基毒胡蘿卜素(12ADT)，并且具有以下結構式：
[0008]
[0009](式1)已經在美國專利第7，767，648號和第7，468，354號中闡明并描述，該美國專 利以其整體并入本文。包含G-202的可注射的癌癥組合物和用于使用G-202治療肝細胞癌的 方法和組合物也在美國臨時申請第61/714,662號和第61/693,273號中公開，該臨時申請以 其整體并入本文。
[0010]對于產生G-202的工藝的主要挑戰是由于缺乏任何中間體或最終的活性藥物成分 (API)的結晶性。這阻止了在合成中的任何位置使用結晶來除去雜質。此限制使反應應當是 高效的且產生很少至沒有雜質成為必要。此外，結晶性的缺乏增加了諸如以下的交替的純 化工藝的價值:水溶液萃取、極性/非極性有機分配、沉淀、研碎和有效的色譜純化。本文公 開的此工藝成功地并入了有效的合成策略和所有的這些純化技術以生成純的G-202。
[0011] 發明概述
[0012] 在一個方面中，本發明提供用于制造具有化學名稱8-0-(12-氨基十二烷酰基)-8_ 〇-去丁酰基-毒胡蘿卜素)天冬氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸0H的式I的化 合物的方法：
[0013]
[0014] 所述方法包括：
[0015] (a)對毒胡蘿卜素(Tg)(式2)進行改性
[0016]
[0017]以得到化合物8-0-去丁酰基-毒胡蘿卜素(DBTg)(式3):
[0018]
[0019] 和(b)在二甲基氨基吡啶(DMAP)、二異丙基碳二亞胺(DIC)和CH2CI2的存在下添加 化合物 Boc-12-AD (式4):
[0020]
[0021] 以得到 Boc-12ADT(式 5):
[0022]
[0023] 和（c)使Boc-12ADT脫保護以得到12ADT(式6):
[0024]
I 1 ? IVI W = JSVZ.UU;
[0025] 和(d)在乙基-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)、二異丙基乙胺（iPr2NEt)、羥基 苯并三唑（HOBt)和二甲基甲酰胺（DMF)的存在下將12-ADT與Boc-Asp-Glu(OtBu)-Glu (0tBu)-Glu(0tBu)_0tBu(式7):
[0026]
[0027] 組合以得到PG_202(式8):
[0028]
[0029] 和(e)使PG-202發生反應以得到化合物，粗制的G-202(式9):
[0030]
[0031]和(f)然后將粗制的G-202轉化為式1的化合物。
[0032]
[0033]在本發明的另一個實施方案中，提供了制造化合物B0C-12-AD(式4)的方法：
[0034]
[0035] 所述方法包括：
[0036] (i)在乙酰氯(AcCl)的存在下使化合物12-AD(式10):
[0037]
[0038] 與甲醇(MeOH)發生反應以得到式11的化合物：
[0039]
[0040] 和（ii)在4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和叔胺堿R3N的存在下使式11的化合物與二-(叔丁基)二碳酸酯(B 〇C20)發生反應以得到式12的化合物：
[0041]
[0042] 其中所述叔胺可以是但不限于三乙胺(Et3N)、二異丙基乙胺（iPnNEt)或N-甲基吡 啶，和(iii)使式12的化合物發生反應以產生式4的化合物(Boc-12-AD)。
[0043]本發明還涉及新穎的式1至式12的化合物(包括其變型和衍生物）、通過本文公開 的方法產生的式1至式12的化合物(包括其變型和衍生物）、以及可以使用本文提供的方法 產生或生成的其他化合物。
[0044] 本發明涉及這些以及下文描述的其他重要的目標。
[0045] 附圖簡述
[0046]圖1示出產生G-202的總反應的示意圖。
【具體實施方式】
[0047] 按照長期存在的專利法公約，術語"一個(a)"、"一個(an)"和"所述(the)"當在本 申請(包括權利要求書）中使用時是指"一個或更多個"。因此，例如，提及"一個受試者"包括 多個受試者，除非上下文清楚地是相反的(例如，多個受試者），等等。
[0048] 為了此說明書和所附權利要求書的目的，除非另外說明，否則表達量、大小、尺寸、 比例、形狀、制劑、參數、百分比、參數、數量、特性的所有的數和在說明書和權利要求書中使 用的其他數值，應當被理解為在所有情況下都被術語"約"修飾，即便術語"約"可能沒有清 楚地與這些值、量或范圍一起出現。
[0049] 除非另外定義，否則本文中使用的所有的技術和科學術語都具有與本發明所屬領 域的普通技術人員所一般理解的一樣的含義。雖然與本文描述的那些相似的或等同的任何 機械、材料和方法可以被用于實踐或測試本發明，但現在描述優選的機械、材料和方法。本 文提及的所有出版物被引用的目的是用于描述和公開在出版物中報道的并且可能關于本 發明的各種實施方案被使用的細胞系、方案、試劑和媒介物。本文決不應當被解釋為承認本 發明沒有根據現有的發明先于這樣的公開內容的權利。
[0050] 如本文使用的術語"G-202"是指具有式1的化學結構的8-0-(12-氨基十二烷酰 基)-8-0-去丁酰基-毒胡蘿卜素)天冬氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸0H。
[0051] G-202是毒胡蘿卜素前藥，其含有偶聯于抑制其生物活性直至在腫瘤位點處的蛋白 水解性裂解的掩蔽肽(masking peptide)的毒胡蘿卜素的細胞毒性類似物。毒胡蘿卜素自身 是天然產物，其被化學改性為8-0-( 12-氨基十二烷酰基）-8-0-去丁酰基-毒胡蘿卜素） (12ADT)。此毒胡蘿卜素類似物在掩蔽肽Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -GluGlu的N末端處被偶聯于 Asp的辟愛基，以產生前藥（12ADT)-Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -GluGlu0H(G-202)。
[0052] G-202的化學名稱是(8-〇-( 12-氛基十二燒醜基)-8-〇-去丁醜基-毒胡蘿卜素)天冬 氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸oh。其有時以如下縮寫形式被提及： (12ADT)Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -Glu-GluOH，其中12ADT代表毒胡蘿卜素衍生物并且厶8?-丫-Glu- γ -Glu- γ -Glu-GluOH代表PSMA可裂解的掩蔽肽。G-202是具有1409.52的分子量的棕 褐色至白色的固體。
[0053] G-202由偶聯于天然產物毒胡蘿卜素的高細胞毒性類似物的PSMA選擇性的5氨基酸 肽底物組成。參見，例如，Denmeade，S · R·，等人，J ·Nat 1 · Cancer Inst · 2003; 9:990-1000;和 美國專利第7，767，648號和第7，468，354號。毒胡蘿卜素從作為遍及地中海盆地的野草生長 的植物毒胡蘿KThapsia garganica