細葉石斛的組培快繁方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種細葉石斛的組培快繁方法。
【背景技術】
[0002]細葉石斛Dendrobium hancockii Rolfe為蘭科石斛屬的多年生草本植物，在我國主要分布于陜西秦嶺以南、四川、甘肅、河南及廣西等地，附生在密林中樹干上或山谷巖石上。該種是我國傳統的名貴中藥材，全草藥用，其莖干可加工成楓斗，是石斛類藥材來源之一，具有生津養胃、止咳潤肺等功效，用于治療病后虛熱、口干燥咳、食欲不振等病癥，在中藥材市場上深受歡迎。近年來，由于石斛價格昂貴，供不應求，藥民無節制地采挖細葉石斛野生資源，致使其采集量大于生長量，造成其野生資源稀缺，已被列于《中國稀有瀕危保護植物名錄Π》中。
[0003]細葉石斛亦是我國名貴的觀賞類石斛蘭，該植物兼具竹子的秀麗和蘭花的幽香。雖為草本植物，但其莖質地較硬，紫紅色，小枝披散，植株具備似竹的秀美;盛開金黃色的花朵，花質地厚，具有微香。雖然細葉石斛具有很高的觀賞價值，且為陰性濕生植物中耐寒冷和稍耐干旱的種類，較其他石斛類植物更易管理和栽培，但目前在我國細葉石斛的觀賞價值并未得到開發利用，花卉市場中難覓其的蹤跡。
[0004]石斛屬植物對自然生態環境要求苛刻，其種子細如微塵，在自然條件下萌發率極低。目前我國關于細葉石斛方面的研究甚少，且無系統全面的關于其快速繁殖方面的研究。
【發明內容】
[0005]針對現有技術中缺乏系統、快速的細葉石斛快速培育方法，本發明的發明目的在于提供一種細葉石斛的組培快繁方法。該方法通過以細葉石斛種子為外植體進行組培，建立快繁技術體系，實現了細葉石斛的大量人工繁育，為該植物以后的工廠化生產打下基礎，并對于保護其野生資源，擴大其種植面積，以實現其種質資源的可持續利用，具有重要的現實意義和經濟效益。
[0006]本發明要解決的技術問題是提供一種細葉石斛的組培快繁方法，包括以下步驟:
[0007]a、外植體處理
[0008]采摘細葉石斛蒴果作為外植體材料，進行消毒處理；
[0009]b、誘導培養
[0010]剪開消毒后蒴果，將種子分散于誘導培養基上培養至長出原球莖；
[0011]C、增殖分化培養
[0012]將步驟b中原球莖接種到增殖分化培養基上進行增殖分化培養至具2?4個葉片、高3?4cm的無根苗；
[0013]d、生根培養
[0014]將步驟c中無根苗移植到生根培養基上培養為高7?8cm、有5?10條根的幼苗；
[0015]e、煉苗培養
[0016]將步驟d中幼苗進行煉苗，煉苗后移栽大棚培養。
[0017]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟a中所述消毒處理為:用73?75wt%的酒精浸泡15?30s后，再用0.09?0.1wt%氯化萊溶液或0.9?Iwt %次氯酸鈉溶液浸泡10?20min，無菌水沖洗，再用無菌濾紙吸干。
[0018]優選的，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟a中所述消毒處理在酒精浸泡前，先用0.2?0.3wt %的洗衣粉水浸泡15?30min，用水沖洗10?30min ；
[0019]更優選的，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟a中所述消毒處理在酒精浸泡后，先用無菌水沖洗干凈，再用0.09?0.1wt %氯化萊溶液或0.9?Iwt %次氯酸鈉溶液浸泡。
[0020]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟b中所述誘導培養基組成為:VW基礎培養基+蔗糖19?21g/l+瓊脂5.3?5.5g/l+香蕉100?150g/l，PH為5.4?5.6。
[0021]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟b中所述培養溫度為22±2°C，光照強度為1500?2000Lux，光照時間為11?13h/d，培養時間45?55天。
[0022]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟c中所述增殖分化培養基組成為:VW基礎培養基+萘乙酸0.05?0.1511^/1+鹿糖19?2]^/1+瓊脂5.3?5.58/1+香蕉100?15(^/1，PH為5.4?5.6。
[0023]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟c中所述培養溫度為22±2°C，光照強度為1500?2000Lux，光照時間為11?13h/d，培養時間為45?60天。
[0024]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟c中所述接種時每瓶接種2?4個團，每團約20?30個原球莖。
[0025]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟d中所述生根培養基組成為:1/2VW基礎培養基+吲哚丁酸0.1?0.3mg/l+蔗糖19?21g/l+瓊脂5.3?5.5g/l+香蕉100?150g/l+土豆90?110g/l+活性炭2?2.5g/l ,PH 5.4?5.6。
[0026]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟d中所述生根培養溫度為22±2°C，光照強度為1500?2000Lux，光照時間11?13h/d，培養時間35?45天。
[0027]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟e中所述煉苗是于培養室中煉苗5?7天、自然光下煉苗2?4天。
[0028]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟e中所述移栽大棚培養時，培養基質為7?1cm厚的松樹皮上層覆蓋一層I?2cm厚的水苔，基質濕度60?70%;移栽前10?15天內每I?2天灑一次水，之后每2?3天灑一次水，移栽培養時間為30?35天;待組培苗成活后，轉移到大棚常規管理。
[0029]其中，上述細葉石斛的組培快繁方法中，步驟c、d、e中的高不包含根的長度。
[0030]本發明技術方案為細葉石斛的育苗開辟了新的途徑，采用本發明的組培快繁技術，能將細葉石斛種子染菌率控制在10%以內，染菌弱苗少，培育的細葉石斛幼苗質量好；同時，本發明技術方案能有效促進細葉石斛種子的萌發，誘導的種子萌發率幾近100%;還能促進萌發的幼苗快速增殖、分化和生根，增殖系數10?25，分化率和生根率均在95%左右;此外，采用本發明技術方案，由于染菌少，幼苗質量好，移栽成活率高，基本達到95%以上。本發明技術方案能快速得到優良的細葉石斛幼苗，對推動細葉石斛的產業發展具有重大的意義。
【具體實施方式】
[0031 ]本發明提供一種細葉石斛的組培快繁方法，具體操作過程如下:
[0032]a、采摘細葉石斛未開裂的蒴果，用0.2?0.3被％的洗衣粉水浸泡15?30min后，于自來水沖洗10?30min后放入超凈工作臺上備用;在無菌條件下，用73?75wt%的酒精處理15?30s、無菌水沖洗4?6次;0.09?0.1wt %氯化萊溶液或0.9?1.0wt %次氯酸鈉溶液滅菌10?20min，無菌水沖洗4?6次，再用無菌濾紙吸干蒴果表面的水分；
[0033]b、用滅菌剪刀剪開無菌蒴果一端，輕輕晃動蒴果，把種子接入誘導培養基上;誘導培養基以VW為基礎培養基，每L中添加19?21g蔗糖，5.3?5.5g瓊脂，100?150g香蕉，PH在5.4?5.6之間，培養溫度為22 ± 2°C，光照時間為11?13h/d，光照強度為1500?2000Lux2間，培養45?55天至誘導出原球莖；
[0034]c、選取原球莖團，接種到增殖與分化培養基上;接種時每瓶接種2?4個團，每團約20?30個原球莖;增殖和分化培養基以VW為基礎培養基，每L中添加0.05?0.15mg NAA ,19?21g蔗糖，5.3?5.5g瓊脂，100?150g香蕉，PH在5.4?5.6之間，培養溫度為22±2°(:，光照時間為11?13h/d，光照強度為1500?2000Lux之間，培養45?60天后原球莖得到大量增殖，分化生長為具2?4個葉片、高3?4cm的無根苗；
[0035]d、將步驟c中無根苗移植到生根培養基上培養;生根培養基以1/2VW為基礎培養基，每L中添加0.I?0.3mg IBA，19?21g鹿糖，5.3?5.5g瓊月旨，100?150g香蕉，90?I 1g土豆，2?2.5g活性炭，PH在5.4?5.6之間，培養溫度