天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及微生物的培養方法，具體涉及一種天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法。
【背景技術】
[0002]天麻(Gastrodia elata)有性繁殖，即種子繁殖，可防止連續多代無性繁殖導致的天麻嚴重退化現象的產生。但天麻種子微小，無胚乳，僅由原胚細胞組成，需依靠小菇屬(Mycena)—類真菌菌絲侵染種胚提供營養才能正常發芽，故統稱促進天麻種子萌發的這類真菌為天麻種子萌發菌。到目前為止，文獻報道的萌發菌主要包括紫萁小菇(Mycenaosmundicola)、石角斗小燕(Mycena dendrobii)、開唇蘭小燕(Mycena anoectochili)、蘭小^(Mycena orchidicola)等，又以紫萁小燕、石斛小燕應用最廣。
[0003]以紫萁小菇為例，凡被紫萁小菇菌絲侵染的天麻種胚或原球莖細胞，隨著原生質及細胞器的逐漸消失出現許多不定形的囊狀體，在種胚萌發至原球莖階段，主要靠這種囊狀體對紫萁小菇菌絲進行包圍消化。試驗證明，天麻種子從胚萌動初期，種子發芽階段，再到原球莖生長并分化出營養繁殖莖的整個時期，都需要消化侵入的紫萁小菇等萌發菌以獲得營養，發芽后的原球莖及營養莖，如能和蜜環菌建立起營養關系，才能正常生長，長出粗壯的新生天麻。因此，萌發菌的生命力影響著天麻的生長狀況，要提高天麻栽培的成功率就必須采用優良的萌發菌栽培種。
[0004]萌發菌母種或原種一般可通過商業渠道獲得，對原種進行一次擴培即得到栽培種，可直接用于天麻有性繁殖。傳統的以樹葉為主要原料的萌發菌培養基，因樹葉太薄，營養不足，致使萌發菌菌種先天不足，接種到天麻后生長不良，導致天麻原球莖因營養不足而在接蜜環菌前提前發亡。
[0005]天麻栽培中目前廣泛使用的萌發菌栽培種培養基為:78%的闊葉木肩、20%的麥麩、1%的蔗糖、1%的硫酸鈣或闊葉木肩70%、玉米芯粉20%、麥麩10%、磷酸氫二鉀或磷酸二氫鉀
0.01%。本發明人在實際栽培中發現采用該方法的培養基進行萌發菌菌種的培養時，雖然比傳統的以樹葉為主要原料的培養基效果好，但是卻時常出現菌種生長參差不齊、部分菌種瓶長菌不均勻等情況。研究發現，天麻種子共生萌發菌屬于好氣真菌，在培養過程中，如果培養料裝得太多或太緊，會延緩這類菌的生長，延長培養時間。由于按上述培養基配方配制的培養基過于致密、透氣性差，有的還出現板結現象，在裝料過程中，難以保證裝料量和裝料松緊度一致，導致出現菌種生長狀況差異大、培養周期不一、培養條件不好控制等問題，且樹葉木肩耐腐性差，不利于萌發菌的長期生長及天麻種子的萌發，從而嚴重影響了天麻的產量與質量。
[0006]
【發明內容】
[0007]本發明的目的要解決的技術上存在的問題及克服現有技術的上述缺點，提供一種以棉籽殼為主要原料制作萌發菌生產種的方法，該方法采用棉籽殼為主要培養料，大大降低了生產成本，并且提高了萌發菌生長速度，增強天麻種子共培養時菌種培養料的耐腐性，提高了天麻種子萌發率。
[0008]天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法，包括以下步驟:
(1)稱料:按重量份配比稱取原料:棉籽殼45?55份、玉米面20份、米糠23-33份、石膏I份、鹿糖I份；
(2)拌料:先將組分中的蔗糖和石膏充分混勻溶于水，再轉入米糠、玉米面中，充分混拌至勻，最后加入棉籽殼，混勻后加入水至培養料中含水量達60 %?80 %，拌勻；或者直接將各組分混合攪拌至勻后加入水，加水至培養料中含水量達60%?80%，拌勻；
(3)裝袋:將拌勻后的培養料裝入聚乙烯或聚丙烯材料的料袋中；
(4)滅菌:將料袋置于101kPa 121°C保持1.5小時;或者常壓下溫度100-105°(3下保持10?12小時；
(5)接種:從原種瓶里挖取指甲蓋大小萌發菌菌種塊轉入料袋內；
(6)培養:將接種后的料袋轉移到避光的培養室于22?25°C溫度條件下培養至萌發菌菌絲長滿料袋后即可。
[0009]優選地，步驟(I)中所述棉籽殼、玉米面、米糠均新鮮無霉變。
[0010]優選地，步驟(I)中干原料的重量份配比為:棉籽殼45?55份、米糠23?33份、玉米面20份、鹿糖I份、石膏I份。更優選地，步驟(I)中原料的重量份配比為:棉籽殼50份、米糠28份、玉米面20份、蔗糖I份、石膏I份。
[0011 ]優選地，步驟(3)的料袋在袋口上還套有套環撐開袋口。
[0012]優選地，步驟(2)中的加水量為加入水至培養料中含水量達68%?72%。
[0013]與現有技術相比，本發明的有益效果:有效的縮短了菌種培養時間，增強了培養料的耐腐性，提高了天麻種子萌發率及產品成品率，并且避免了木質材料的大量使用，從而保護了森林和生態環境。
[0014]
【具體實施方式】
[0015]天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法，以下提供本發明的一些具體實施例，以助于進一步理解本發明，但本發明的保護范圍并不僅于這些實施例。
[0016]實施例1天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:棉籽殼45份、玉米面20份、米糠23份、蔗糖I份、石膏I份，所述棉籽殼、玉米面、米糠要新鮮無霉變。
[0017](2)拌料:先將組分中的棉籽殼、玉米面、米糠充分混勻，再澆入蔗糖石膏水，充分混拌至勻，最后加入自來水至培養料中使其含水量達80%，拌勻后悶放2 ho
[0018](3)裝袋:將拌勻并悶放2 h后的培養料裝入12 cmX25 cm聚乙烯或聚丙烯折角袋中，邊裝邊壓，至緊實，松緊需均勻，料裝至菌袋2/3長即可，然后在培養料中插入一根直徑為2 cm的打孔棒，最后在菌袋口部套上套環支撐，并蓋上海綿透氣蓋。
[0019](4)滅菌:將料袋置于高壓滅菌鍋內，121°C 101 kPa下保持1.5小時；滅菌后自然冷卻至室溫。
[0020](5)接種:于超凈工作臺或經殺菌后的接種箱內接種，接種前用75%消毒酒精擦拭手、接種針，再將接種針置于酒精燈火焰上灼燒，冷卻后先用接種針挑出打孔棒，再從原種瓶里挑取指甲蓋大小的萌發菌菌種塊轉入料袋內。
[0021](6)培養:將接種后的料袋轉移到避光的培養室于25°C溫度條件下培養至萌發菌菌絲長滿料袋后即可。
[0022]結果描述:接種后7天可見新生菌絲從原種塊長出，10天左右即能長入培養料內，隨后在菌絲周圍生長出白色菌絲，菌絲密集，初期呈白色，35天以后先期生長的菌絲外表逐漸變為米白色。30天左右萌發菌菌絲即長滿整個料袋。
[0023]實施例2天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法:
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:棉籽殼50份、玉米面20份、米糠28份、蔗糖I份、石膏I份;所述棉籽殼、玉米面、米糠均要新鮮無霉變。
[0024](2)拌料:將各組分轉入攪拌機中，開機攪拌，至勻后加入水，加水量為至培養料中含水量達75%，拌勻。
[0025](3)裝袋:將拌勻后的培養料用手工或裝袋機裝入12 cmX25 cm聚乙烯或聚丙烯折角袋中，手工裝料邊裝邊壓，至緊實，松緊需均勻，料裝至菌袋2/3長即可，然后在培養料中插入一根圓柱形打孔棒，最后在料袋口部套上套環以撐開袋口，并蓋上無棉蓋。
[0026](4)滅菌:將料袋置于高壓滅菌鍋內，121 0C 101 kPa下保持1.5小時;滅菌后自然冷卻至室溫。
[0027](5)接種:于超凈工作臺或經殺菌后的接種箱內接種，接種前用75%消毒酒精擦拭手、接種針，再將接種針置于酒精燈火焰上灼燒，冷卻后挑出打孔棒，并從原種瓶里挖取2塊萌發菌菌種塊轉入料袋內，一塊置于料袋中下部(即料袋1/3部位)，一塊置于料袋中部(即料袋1/2部位)。
[0028](6)培養:將接種后的料袋轉移到避光的培養室于24?26°C溫度條件下培養至萌發菌菌絲長滿料袋后即可。
[0029]結果描述:接種7天后，新生萌發菌菌絲長入培養料內，菌絲長至料內后迅速多級分叉，致密，色白，后期呈米白色。32天左右菌絲即長滿料袋。
[0030]實施例3，天麻有性繁殖用棉籽殼為主料制作萌發菌生產種的方法:
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:棉籽殼53份、米糠25份、玉米面20份、蔗糖I份、石膏I份;所述棉籽殼和米糠新鮮無霉變。
[0031](2)拌料:將各組分轉入攪拌機中，開機攪拌，至勻后加入水，加水量為至培養料中含水量達72%，拌勻。
[0032](3)