一種鐵皮石斛壯苗生根培養基及制備方法和培養方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于植物生物工程技術領域，具體涉及一種鐵皮石斛壯苗生根培養基及制備方法和培養方法。
【背景技術】
[0002]鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，在《道藏》中被列為“中華九大仙草”之首，具有強陰益精、養胃生津、降三高、提高人體免疫力、抗衰老、抗腫瘤等功效。因其具有獨特的功效，鐵皮石斛自古以來一直為廣大養生之士所青睞。野生鐵皮石斛主要分布在浙江、安徽、貴州、江西、云南等地，鐵皮石斛種子因其獨特的構造，無法獨自萌發，只有在碰到合適的共生菌的情況下才有可能自然萌發，加之人們對野生資源的瘋狂采挖，現在野生鐵皮石斛資源已經瀕臨滅絕。隨著現代生物組培技術的發展，目前鐵皮石斛種苗的人工繁育技術已經逐漸形成。
[0003]傳統的鐵皮石斛組織培養中，壯苗生根一般是在基礎培養基的基礎上通過添加激素如NAA、6-BA等促進鐵皮石斛種苗的生長和增值。但激素添加的合理種類、添加量很難掌握，往往需要花費許多的時間和精力進行大量的基礎研究。不當或者過量的添加會導致組培苗生長緩慢、弱小、葉片黃化斑駁、整體失綠、變異率升高等情況，加之部分表征往往有表現滯后性，這些不利因素均嚴重影響種苗的高效生產和大田栽培的成活率。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的第一個技術問題是提供一種無激素、無有害化學成分添加、快速促進壯苗生根的鐵皮石斛壯苗生根培養基。
[0005]本發明所要解決的第二個技術問題是提供一種可操作性強的鐵皮石斛壯苗生根培養基的制備方法。
[0006]本發明所要解決的第三個技術問題是提供一種利用上述培養基培養鐵皮石斛壯苗的方法。
[0007]本發明解決上述第一個技術問題所采用的技術方案為:一種鐵皮石斛壯苗生根培養基，該培養基由基礎培養基和額外添加于基礎培養基中的添加物組成，該培養基的pH值為6.0-6.4，以所述的基礎培養基的重量計，所述的添加物在所述的基礎培養基中的添加量分別為:椰子汁1~3 %、去皮馬鈴薯1~3 %、去皮香蕉3~5 %、干大_&3~5 %、粉狀活性炭
0.05-0.10 %、蔗糖 2-3 %、瓊脂 0.55-0.75 %。
[0008]所述的基礎培養基為l/3~2/3MS基礎培養基。MS基礎培養基是目前使用最普遍的培養基，其組成包括大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分、肌醇等等，可以自制或者選擇市售產品。1/3MS基礎培養基即大量元素變為原來的1/3的培養基，同理2/3MS基礎培養基即大量元素變為原來的2/3的培養基。本申請選用l/3~2/3MS基礎培養基，可更好地促進鐵皮石斛苗的生長。
[0009]本發明解決上述第二個技術問題所采用的技術方案為:一種鐵皮石斛壯苗生根培養基的制備方法，包括以下步驟:
1)添加物的預處理:將新鮮椰子榨汁得到椰子汁，將馬鈴薯和香蕉去皮，將干大豆于20-28 °(:水中泡發8~12小時，并準備好粉狀活性炭、蔗糖、瓊脂，備用；
2)基礎培養基的配制:配制基礎培養基；
3)添加物的添加:以基礎培養基的重量計，稱取各添加物，各添加物在基礎培養基中的添加量分別為:椰子汁1~3 %、去皮馬鈴薯1~3 %、去皮香蕉3~5 %、干大顯3~5 %、粉狀活性炭0.05~0.10 %、蔗糖2~3 %、瓊脂0.55~0.75 %，將椰子汁、去皮馬鈴薯、去皮香蕉、大豆、粉狀活性炭、蔗糖和瓊脂依次添加至基礎培養基中，得到鐵皮石斛壯苗生根培養基，用NaOH溶液將鐵皮石斛壯苗生根培養基的pH值調至6.0-6.4 ;
4)分裝與滅菌:將鐵皮石斛壯苗生根培養基加熱到85~90°C，保溫5~8 min后分裝，然后在121 °C的高壓蒸汽中滅菌20~25 min，最后將滅完菌的培養基冷卻備用。
[0010]本發明解決上述第三個技術問題所采用的技術方案為:一種利用上述培養基培養鐵皮石斛壯苗的方法，培養過程為:在培養基中接種高度為1~1.5 cm的鐵皮石斛母苗，在24-28 °C下每天光照11~13小時，光照強度為2500~3000 Lux，直至壯苗生根。
[0011]與現有技術相比，本發明的優點在于:本發明鐵皮石斛壯苗生根培養基，采用天然添加物代替傳統激素，無有害化學成分添加，有效避免了傳統培養基添加激素調試時間長、工作量大、培養出的種苗穩定性差、變異率高的問題；本發明鐵皮石斛壯苗生根培養基的制備方法簡便、易操作，原料來源廣、成本低；利用本發明培養基培養的鐵皮石斛壯苗生根時間短，一般在11~12周，且培養的種苗苗體粗壯，形狀穩定，品質優良，根系發達，移栽成活率可達99.2 %以上，無變異情況出現，因此本發明培養基可大幅提高鐵皮石斛種植的效率、成活率和質量。
【具體實施方式】
[0012]以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0013]實施例一的鐵皮石斛壯苗生根培養基，由1/3MS基礎培養基和額外添加于基礎培養基中的添加物組成，該培養基的pH值為6.0，以1/3MS基礎培養基的重量計，添加物在1/3MS基礎培養基中的添加量分別為:椰子汁1 %、去皮馬鈴薯1 %、去皮香蕉3 %、干大顯3%、粉狀活性炭0.05 %、蔗糖2 %、瓊脂0.55 %，該鐵皮石斛壯苗生根培養基的制備方法包括以下步驟:
1)添加物的預處理:將新鮮椰子榨汁得到椰子汁，將馬鈴薯和香蕉去皮，將干大豆于25 °(:水中泡發10小時，并準備好粉狀活性炭、蔗糖、瓊脂，備用；
2)基礎培養基的配制:配制1/3MS基礎培養基；
3)添加物的添加:以1/3MS基礎培養基的重量計，稱取各添加物并依次添加至1/3MS基礎培養基中，得到鐵皮石斛壯苗生根培養基，用NaOH溶液將鐵皮石斛壯苗生根培養基的pH值調至6.0 ；
4)分裝與滅菌:將鐵皮石斛壯苗生根培養基加熱到85°C，保溫5 min后分裝，然后在121 °C的高壓蒸汽中滅菌20 min，最后將滅完菌的培養基冷卻，即制得實施例一的培養基。
[0014]利用實施例一的培養基培養鐵皮石斛壯苗的方法，培養過程為:在培養基中接種高度為1~1.5 cm的鐵皮石斛母苗，在24 °C下每天光照13小時，光照強