一種抗草胺膦棉花的快速鑒定方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及農業技術領域，具體地說，設及一種抗草胺麟棉花的快速鑒定方法。
【背景技術】
[0002] 棉花是我國重要的經濟作物，常年種植面積500萬hm2,占經濟作物總面積的 26%，是國民經濟的重要支柱產業。然而，我國棉田雜草危害較重，常年造成損失在14%~ 16%，嚴重制約了棉花的優質、高效生產。草錠麟（glu化sinate-ammonium)由赫斯特公司 (現歸屬于拜耳公司）開發生產，化學名稱為4-[徑基（甲基）麟酷基]-〇心高丙氨酸，屬 于麟酸類除草劑，是谷氨酷胺合成抑制劑，非選擇性（滅生性）觸殺型除草劑。草錠麟開發 于二十世紀80年代，是世界上第二大轉基因作物耐受除草劑。草錠麟對耐受草甘麟的部分 惡性雜草去除效果非常好，施藥后短時間內，植物體內錠代謝陷于素亂，細胞毒劑錠離子在 植物體內累積，與此同時，光合作用被嚴重抑制，達到除草目的。草錠麟毒性低，較為安全， 在±壤中易于降解，對作物安全，不易飄移，除草譜廣，活性高，用量少，環境壓力小，殺草迅 速，能快速殺死100種W上的禾本科和闊葉雜草，可用水做基劑，使用安全方便，在棉田雜 草的防除中發揮著重要作用。但是，由于草胺麟不具有在雜草和棉花之間的選擇性，在使用 草胺麟時，往往容易對常規棉花品種造成藥害，甚至死亡。
[0003] 轉基因技術發展的速度驚人，轉基因作物對農業的巨大貢獻已經得到廣泛的認 可，其種植近年來也呈愈演愈烈之勢。轉基因抗草胺麟棉花的應用不僅可W避免藥害的產 生，還可W擴大草胺麟的使用范圍和靈活性。草錠麟作為一種優良的滅生性除草劑，非常適 合作為抗性基因，赫斯特公司積極發展轉基因作物，W草錠麟為目標，進行抗性基因轉移、 選育抗性作物品種，目前，赫斯特公司已經成功將草錠麟的抗性基因應用于棉花等20多種 作物中，運些轉基因作物不僅在W美國為主的廣大北美地區普遍種植，近年來開始在亞洲、 澳洲、歐洲部分國家及地區推廣種植。高劑量使用草錠麟對轉基因作物具有一定的傷害，但 藥害輕，對產量影響不大。抗草錠麟作物安全劑量可高達2. 0kg/hm2W上，而0. 5~1. 0kg/ hm2的草錠麟即可防除大部分雜草。
[0004] 目前，我國正在實施轉基因抗草胺麟棉花新品種培育計劃，已獲得一批穩定表達 的轉基因棉花新材料。隨著農業現代化水平的提高，農村勞動力大量城市化轉移，棉花生產 者對抗除草劑品種的需求越來越強烈。轉基因抗草胺麟棉花勢必將成為我國繼抗草甘麟棉 花之后有望推廣的另一類轉基因抗除草劑棉花產業化品種。在抗草胺麟棉花品種選育過程 中，對棉花材料進行草胺麟抗性評價不僅是棉花育種和產業化推廣的基礎，也是進行轉基 因棉花環境安全性評價的內容之一，因此，開發一種抗草胺麟棉花的檢測和鑒定方法就顯 得尤為重要。 陽〇化]目前，抗草胺麟棉花的鑒定方法主要為田間或溫室植株抗性鑒定法，即在田間或 溫室種植待測棉花，當棉花長到一定葉齡后噴施一定濃度的草胺麟，根據施藥后棉花植株 的死亡程度對其是否為抗草甘麟棉花做出判斷。此方法直觀準確，但是耗時長、占用空間 大、季節性強。因此，建立一種快速、簡便、低成本且準確有效的抗草胺麟棉花鑒定方法對于 我國抗草胺麟棉花的推廣和檢測具有重要意義。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種抗草胺麟棉花的快速鑒定方法。
[0007] 為了實現本發明目的，本發明的一種抗草胺麟棉花的快速鑒定方法，所述方法包 括：將已露白的待測棉花種子用草胺麟溶液浸泡；清水沖洗后，將所浸泡過的種子置于光 照培養箱中進行砂培；分別統計出苗數及培根長，計算出苗率和胚根生長抑制率；根據出 苗率和胚根生長抑制率判斷待測棉花是否為抗草胺麟棉花，其中出苗率>80%或胚根生長 抑制率《40%的為抗草甘麟棉花，而出苗率《40%或胚根生長抑制率> 80%的為非抗草 胺麟棉花。
[0008] 前述的方法，待測棉花種子預先進行硫酸脫絨處理，然后將種子于清水中浸泡24 小時，獲得已露白的種子。
[0009] 前述的方法，將已露白的待測棉花種子用有效成分濃度0. 5~2. Og/L的草胺麟溶 液浸泡0. 5~2小時，隨后用水沖洗，即草胺麟處理組；同時，設清水對照處理組，即用清水 浸泡待測樣本。
[0010] 前述的方法，砂培的具體操作為：將細砂過篩后置于干燥箱中，180°C干熱滅菌4 小時，驚涼后將細砂和水按照25:4的重量比混勻，裝入規格為13cmX19cmX12cm的發芽盒 中，至約2/3高度；將浸泡過的棉花種子均勻擺放于發芽盒中，約50粒種子/盒，重復4次； 然后在種子上覆蓋約1. 5cm厚的松散砂，蓋上蓋子后置于光照培養箱中培養。
[0011] 其中，光照培養箱的溫度設定為30°C，濕度60%~80%，光照8小時/黑暗16小 時，光照強度為60001X。
[0012] 砂培7天后，分別統計清水對照處理組和草胺麟處理組的棉花種子的出苗數，計 算出苗率，統計胚根長，并計算胚根生長抑制率；其中種子出苗的判斷標準為子葉破上。胚 根生長抑制率的計算公式為：
[0013] 胚根生長抑制率％=(清水對照處理組的胚根長-草甘麟處理組的胚根 長）X 100/清水對照處理組的胚根長
[0014] 在上述抗草胺麟棉花的快速鑒定方法中，在所述統計和計算步驟中，還可觀察胚 根生長情況；在所述判斷步驟中，還可根據胚根生長情況判斷待測棉花是否為抗草胺麟棉 花，其中胚根生長正常的為抗草胺麟棉花，而胚根生長受抑制、無側根的為非抗草胺麟棉 花。
[0015] 本發明具有W下優點：
[0016](一）周期短。一般8天左右即可獲得鑒定結果。與田間或溫室抗性鑒定方法相 比，鑒定周期縮短了 10天左右。
[0017](二）用藥量少。用少量藥劑浸泡種子就可W鑒定，與田間或溫室抗性鑒定方法相 比，省去大量噴灑的用藥量，本發明的鑒定方法可W重復進行，結果一致性較好。
[0018] (Ξ)工作量小。本發明的鑒定方法在室內完成，無需進行整地、播種、施藥等操 作，一人便可完成整個鑒定過程。并且占用空間小，可W同時對多個材料進行鑒定。
[0019](四）不受季節限制。本發明的鑒定方法在室內操作，種子在光照培養箱中培養。 與田間或溫室抗性鑒定方法相比，本發明的鑒定方法避免了不良氣候的影響。
【具體實施方式】
[0020] W下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。若未特別指明，實施例 中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。
[002UW下實施例中使用的試驗材料：抗草胺麟棉花材料共6種，分別為ZYA1、ZYA2、 ZYA3、ZYA4、ZYA5、ZYA6 ;非抗草胺麟棉花材料共3種，分別為中棉所52、中棉所65、中棉所 83。上述材料均由中國農業科學院棉花研究所育種室提供。所用草胺麟為紫電青霜，其為 濃度200g/L的草胺麟水劑，由河北石家莊市龍匯精細化工有限責任公司生產。實施例中的 定量試驗，均設置4次重復實驗，結果取平均值。
[0022] 實施例1抗草胺麟棉花的快速鑒定方法 陽〇2引試驗方法：
[0024] 1、催芽
[00巧]將所有棉花種子進行硫酸脫絨，光子處理備用。然后取每種待測材料的種子于清 水中浸泡24小時，取已露白的種子備用。
[0026] 2、浸泡
[0027] 每個待測樣本挑選已催芽露白的、飽滿的棉花種子，用草胺麟溶液浸泡，隨后用水 沖洗。同時，設清水對照處理組：用清水浸泡待測樣本。
[0028] 3、砂培
[0029] 將細砂過篩后置于干燥箱中，180°C干熱滅菌4小時，驚涼后將細砂和水按照25:4 的重量比混勻，裝入規格為13cm