一種無公害殺蚜蟲劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及殺蟲劑技術領域，具體涉及一種無公害殺蚜蟲劑。
【背景技術】
[0002] 蚜蟲是危害白菜、油菜、蘿卜、花椰菜、芥蘭等十字花科蔬菜的主要害蟲之一。蚜蟲 在南方地區有的一年可發生數十代，除本身危害蔬菜外，還可傳播病毒病，所造成的危害遠 遠大于蚜蟲本身的危害。蚜蟲的這些寄主植物大多是人直接食用的，在防治這些植物上的 蚜蟲時不能使用對人有害的高毒農藥。目前市場上使用一般的化學藥劑防治蔬菜蚜蟲易引 起農藥殘留的問題，殘留在蔬菜上的農藥進入人體后會對人體健康產生不利影響，缺乏無 公害殺姐蟲劑。
[0003] 由于大多合成農藥在使用中存在多種問題，植物源農藥具有低毒、無殘留、選擇性 高、易分解、害蟲不易產生抗藥性等特點。因此，植物源殺蟲劑已成為國內外研究的重點和 熱點。百里酚又叫麝香草酚，具有特殊香氣和甜的辛香風味。百里酚在唇形科植物百里香 草、麝香草等和傘形科植物粗果芹種子中含量較高。百里香酚毒性很低，是我國《食品添加 劑使用衛生標準》規定允許使用的食品香料之一，目前僅報道了百里香酚具有殺螨、殺菌等 藥理活性，尚無百里酚對蘿卜蚜的毒力及作用機理方面的研究。
【發明內容】
[0004] 發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明提出一種無公害殺蚜蟲劑，其具有 無毒、無殘留、選擇性高、易分解、可食用、害蟲不易產生抗藥性等特點。
[0005]技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：
[0006] -種無公害殺蚜蟲劑：由百里酚1-7%、乙醇10-15%、水78-89%組成，各組分的 質量分數之和為1〇〇%。
[0007]所述的無公害殺蚜蟲劑，優選由百里酚3-5%、乙醇11-13%、水80-85%組成，各 組分的質量分數之和為100%。
[0008] -種制備所述的無公害殺蚜蟲劑的方法，先將百里酚溶于乙醇，后加蒸餾水配成 溶液，得到產品。
[0009] 所述的無公害殺蚜蟲劑的施用方法：將殺蚜蟲劑稀釋20-30倍后，每畝使用 30-35L進行噴霧，噴灑于蔬菜的莖桿、葉面和根部周圍。
[0010] 有益效果：與現有技術相比，本發明所述的無公害殺蚜蟲劑，具有無毒、無殘留、選 擇性高、易分解、害蟲不易產生抗藥性等特點。研究證實用百里酚處理后蘿卜蚜體內的S0D 活力在6h被顯著誘導；處理后12h，POD活力被激活；處理后18h，SOD活力開始被抑制。百 里酚對蘿卜蚜成蟲在24h的致死中濃度為0. 07g/L;在48h的致死中濃度為0. 04g/L;在72h 的致死中濃度為0. 02g/L;隨著處理時間的延長，致死中濃度越來越低，表明百里酚具有持 續毒性。
【附圖說明】
[0011] 圖1是百里酚對谷胱甘肽-S轉移酶活力的影響結果圖；
[0012] 圖2是百里酚對過氧化物酶活力的影響結果圖；
[0013] 圖3是百里酚對超氧化物歧化酶活力的影響結果圖。
【具體實施方式】
[0014] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[0015] 實施例1
[0016] 供試蟲源：在野外未用藥防治過的田里采集蘿卜姐，室內鑒定后，用在室內培養的 蘿卜苗飼喂蘿卜蚜，放在25°C、相對濕度80%的光照培養箱內飼養至第2代后備用。
[0017] 藥液配制：取5g百里酸溶解于無水乙醇，定容至50mL，配制成10%的溶液作為母 液冷藏備用。觸殺活性測定時分別取5、1、0. 2、0. 04、0. 008mL母液，用蒸餾水定容至100mL， 配制成5、1、0. 2、0. 04、0. 008g/L的梯度濃度藥液，對照為5%乙醇溶液。
[0018] 1、觸殺作用
[0019] 觸殺測定采用點滴法：先選取蟲齡及大小一致的無翅蘿卜蚜成蟲作為試蟲，用微 量進樣器將〇. 1μL的不同濃度的藥液點滴在蟲體的前胸背板上，每種處理3次重復，每重 復蟲數30頭。將處理過的試蟲用毛筆接在培養皿（直徑9cm，內墊濾紙，加少量水保濕）中 的新鮮蘿卜葉（大小一致，葉柄用濕棉球包裹）上，每皿接30頭蟲，用保鮮膜封口，昆蟲針 扎洞，然后將培養皿放入溫度25°C，相對濕度80%，光照12h/12h的光照培養箱中，分別在 24h，48h，72h檢查死蟲數，計算死亡率、校正死亡率、毒力回歸方程、致死中濃度（LC5Q)、LC5。 值的95%置信限。蚜蟲死亡判斷以用細毛筆觸碰蚜蟲腹部，其足和觸角等附肢完全不動為 死亡標準。
[0020] 死亡率（％)=死亡蟲數/處理總蟲數X100。
[0021] 校正死亡率（％) =(處理死亡率一對照死亡率V(1 -對照死亡率）X100。
[0022] 將藥液濃度換算成對數，為X值；根據校正死亡率查幾率值表，所得結果為y值，求 得毒力回歸方程和相關系數，并計算出致死中濃度LC5。及其95%置信限。
[0023] 中毒后的蘿卜蚜停止取食，不停地爬動，大約半小時后靜止不動，隨著中毒時間的 延長體色漸漸變暗，最后死亡。百里酚對蘿卜蚜的觸殺活性結果見表1、2。蘿卜蚜各個濃 度梯度下所表現出的癥狀基本一致，癥狀隨著濃度降低而表現緩慢。在處理48h后觀察，校 正死亡率可高達96. 56%。這說明百里酚對蘿卜蚜有很好的觸殺作用。隨著處理時間的延 長，蘿卜蚜的校正死亡率不斷升高；隨著質量濃度提高，校正死亡率逐漸提高。在質量濃度 為0. 008g/L時，校正死亡率只有29. 89%，說明此濃度對蘿卜蚜的觸殺活性微弱。處理24h、 48h、72h后的致死中濃度分別為 0· 07g/L、0. 04g/L、0. 02g/L。
[0024] 表1百里酚對蘿卜蚜的觸殺活性
[0025]
[0026] 注：數據為3次重復的平均值土標準差。同列數據后標有相同字母者表示在5% 水平上差異不顯著（LSD)。
[0027] 表2百里酚對蘿卜蚜的致死中濃度
[0028]
[0029] 2、GSTs活力
[0030] 酶活測定方法：
[0031] 1)樣本的制備：用0.02g/L藥液點滴處理作為處理組，和1個空白對照組。分別 于611、1211、1811、2411、3011每組各取30頭蘿卜蚜（3個重復）放于0.51^的離心管中，置其 于-80 °C超低溫冰箱中冷凍備用。
[0032] 2)組織勻漿的制備：稱取樣本蟲重量，加0. 4mL生理鹽水冰浴中研磨制成約10% 的組織勾衆，在3500r/min，4°C下離心lOmin后取其上清液置于冰箱中冷藏待測。在測定 POD活力時，將組織勻漿在2500轉/分離心10分鐘，其他同上。
[0033] 3)GSTs活力測定：GST具有催化還原谷光甘肽（GSH)與1-氯_2,4_二硝基苯 (CDNB底物）結合的能力，在一定反應時間內，其活性高低與反應前后底物濃度的變化呈線 性關系。本實施例通過檢測GSH濃度的高低來反應GST活力的大小，GSH(底物）濃度降低 越多則GST活力越大。測定方法為分光光度法：反應體系為0. 066mol/L，pH7. 0磷酸緩沖液 (含0. 002mol/L乙二胺四乙酸）2. 5mL，0. 05mol/L還原型谷胱甘肽底物液0. 3mL，0. 03mol/ L2, 4-二硝基氯苯丙酮底物液0.lmL，Imol/mL酶源0.lmL，總體積3mL。在25°C下用分光光 度計測反應5min的340nm處光密度值。
[0034] 酶的比活力表達為0D值。
[0035]計算公式：組織中GST活力（U/mgprot) =(0DC- 0DuV(0Ds- 0DB)XCsXN/T/ (AXCprot);式中：0De為對照管吸光度；ODu為測定管吸光度；0DS為標準管吸光度；0DbS 空白管吸光度；Cs為標準濃度（20μηιο1/υ;N為反應體系稀釋倍數（6) ;T為反應時間（10 分鐘）；A為取樣量（0·lmL) ;Cprot為待測樣本蛋白濃度（mgprot/mL)。
[0036] 由圖1可以看出，6-18h處理組GSTs活力明顯低于對照組，用LSD法進行方差分 析，差異達到顯著（P〈〇. 05)水平，谷胱甘肽-S轉移酶被抑制；24h-30h處理組GSTs活力與 對照組幾乎一致，經過方差分析，差異未達到顯著（P〈〇. 05)水平。
[0037] 3、P0D活力
[0038] P0D活力測定：測定方法為比色法：取光徑1cm比色杯3個，向其中之一加入酶液 0. 8mL，再加入反應混合液2. 4mL;向另一個比色杯加入0. 8mLTris-HCl緩沖液，再加入反 應混合液2. 4mL，作為在沒有酶液參與反應下的對照；而向最后一個比色杯中加入0. 2mol/ L的磷酸緩沖液（pH6. 0)，作為零對照。立即用分光光度計在470nm波長下測定反應光密度 值，記下每一組被測定液體的吸光值。
[0039] 計算公式：
[0040]
[0041] 式中，ODi為空白對照的光吸收值，0D2為實驗組的吸收值，Vi為反應液的總體積， V2為樣品液的體積，N為稀釋倍數，L為比色光徑，T為反應溫度，V。為總勻漿蛋白的量（mg/ mL)〇
[0042] 由圖2可以看出，6h處理組POD活力與對照組基本一樣，12h后處理組過氧化物酶 活力明顯高于對照組，而且P0D活力越來越高。其中處理30h時，百里酚對過氧化物酶的 激活作用最強，為同期對照組的1. 602倍。經過方差分析，6h酶活力數