一種燕子掌種苗的組培方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及組培領域，具體涉及一種燕子掌種苗的組培方法。
【背景技術】
[0002]燕子掌，屬景天科植物，植株呈多分枝的亞灌木狀，莖明顯，圓形，表皮綠色或者黃褐色，葉片上有小點點。肉質(zhì)葉對生，在莖或分枝頂端密生長，肉質(zhì)葉長卵形，稍內(nèi)彎，輕微有葉尖，葉色綠色至紅綠色，有光澤，溫差大的時候葉片的邊緣呈紅色，葉心綠色，非常美麗，控水和強光照下整個植株呈現(xiàn)非常漂亮的紅綠色，一般養(yǎng)殖的顏色為綠色帶點紅邊，缺光狀態(tài)下植株呈現(xiàn)綠色，花開簇狀，小花白色或白粉色。燕子掌原產(chǎn)非洲南部，喜溫暖、干燥、通風的環(huán)境，耐寒力差，喜陽光，稍耐半陰。宜于盆栽，可陳設于陽臺上或在室內(nèi)幾桌上點綴，顯得十分清秀典雅。且有研究報道，燕子掌提取物制藥能有效的治療糖尿病，也可提高免疫力。
[0003]燕子掌常通過扦插法和水插法繁殖。但扦插法和水插法繁殖速度較慢，對母本材料要求高，用量大，還受到季節(jié)的限制，難以進行規(guī)?；?、標準化生產(chǎn)和優(yōu)良品種的大面積推廣。此外，目前應用的繁殖方法生產(chǎn)成本較高、培養(yǎng)周期長，難于將篩選的優(yōu)良性狀固定下來。因此，需要尋找一種新的成本低、時間短、成活率高，且能夠?qū)?yōu)良性狀固定下來的無性繁殖方法來擴大燕子掌繁殖量，進行燕子掌種苗的工廠化生產(chǎn)，以滿足市場需求。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的發(fā)明目的在于:針對上述存在的問題，提供一種燕子掌種苗的組培方法，以提高燕子掌的繁殖速度和成活率，擴大繁殖量，降低成本，同時將優(yōu)良性狀的種苗固定下來，滿足優(yōu)質(zhì)種苗的大規(guī)模生產(chǎn)需要。
[0005]本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案如下:
一種燕子掌種苗的組培方法，包括以下步驟:
(1)外植體的選擇:采集當年新發(fā)的，健康、飽滿的葉片作為外植體；
當年新發(fā)的葉片，組織細胞幼嫩，分化能力強，因此采用上述技術方案，可以提高繁殖速度，擴大繁殖量。
[0006](2)消毒:在超凈工作臺上用70%的乙醇處理5s，再用0.1%的氯化汞溶液消毒5?8分鐘，無菌水清洗5?8次，用濾水紙吸干水分備用；
由于采用上述技術方案，外植體經(jīng)消毒后既可達到無菌狀態(tài)，又不受到消毒溶液的破壞；用濾水紙吸干水分的目的是防止細菌滋生。
[0007](3)誘導培養(yǎng):將步驟(2)所得的外植體接種在裝有誘導培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25?28°C，光照強度2000?3000LX，光照時間10-12小時/天；所述誘導培養(yǎng)基為改良WPM+TDZ 2.0?2.5mg/L+IBA 0.4?0.5mg/L+瓊脂7?8g/L+白糖25g/L，pH值為5.8?6.0 ;誘導培養(yǎng)10?15天，更新相同培養(yǎng)基，并在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)至外植體萌發(fā)分化出0.5?1cm的不定芽；所述改良WPM的成分及其含量為:K2S041900mg/L，NH4N03 300mg/L，MgS04.7H20 350mg/L，CaC12.2H20 90mg/L，KH2P04 170mg/L，F(xiàn)eS04.7H2027.8mg/L，CuS04.5H20 0.25mg/L，ZnS04.7H20 8.6mg/L，Ca(N03)2.4H20278mg/L，Na2Mo04.2H20 0.25mg/L，肌醇 100mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，維生素 B1 0.5mg/L，甘氨酸 2mg/L。
[0008]根據(jù)燕子掌喜溫暖、喜陽光的特性，采用上述技術方案，燕子掌外植體在上述培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基成分及比例下，誘導周期短，分化出的不定芽數(shù)量多。
[0009](4)繼代增殖培養(yǎng):將步驟(3)誘導培養(yǎng)獲得的不定芽切成具1?3個不定芽的小塊，接種在繼代增殖培養(yǎng)基中繼代擴繁，產(chǎn)生新叢芽，繼代增殖培養(yǎng)條件為:溫度25?28°C，光照強度2000?3000LX，光照時間10-12小時/天，繼代周期為30-35天/次，所述繼代增殖培養(yǎng)基配方為:改良 WPM+TDZ 1.5 ?2.0mg/L+KT0.3 ?0.5mg/L+IAA 0.2 ?0.25mg/L+瓊脂7?8g/L+白糖25g/L，pH值為5.8?6.0 ;所述改良WPM的成分及其含量為:K2S041900mg/L，NH4N03 300mg/L，MgS04.7H20 350mg/L，CaC12.2H20 90mg/L，KH2P04 170mg/L，F(xiàn)eS04.7H2027.8mg/L，CuS04.5H20 0.25mg/L，ZnS04.7H20 8.6mg/L，Ca(N03)2.4H20278mg/L，Na2Mo04.2H20 0.25mg/L，肌醇 100mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，維生素 B1 0.5mg/L，甘氨酸 2mg/L。
[0010]根據(jù)燕子掌喜溫暖、喜陽光的特性，采用上述技術方案，燕子掌不定芽在上述培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基成分及比例下，繼代周期短，產(chǎn)生新叢芽的數(shù)量多。
[0011](5)生根培養(yǎng):在步驟(4)繼代增殖培養(yǎng)獲得的新叢芽中，選擇高度在2cm以上的小芽轉入生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，15-20天后得到生根的幼苗，生根培養(yǎng)條件為:溫度25?28°C，光照強度2000?3000LX，光照時間10-12小時/天，所述生根培養(yǎng)基配方為:MS+IAA 0.1 ?0.2g/L+NAA0.3 ?0.4g/L+ 瓊脂 7 ?8g/L+ 白糖 20_30g/L，pH 值為 5.8 ?6.0 ；
根據(jù)燕子掌喜溫暖、喜陽光的特性，由于采用上述技術方案，燕子掌新叢芽在上述培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基成分及比例下，生根周期短，生根數(shù)量多。
[0012](6)煉苗:將步驟(5)生根培養(yǎng)所得的幼苗從組培室取出后置于溫棚中，放置3-5天，溫棚條件為:溫度白天25?28°C，夜間15-20°C，濕度白天60%_70%，夜間80%_90%。
[0013]燕子掌喜溫暖、干燥的環(huán)境，由于采用上述技術方案，既適合燕子掌幼苗的生長，又可增強其適應性和抗逆性。
[0014](7)移植:將步驟(6)煉苗后的幼苗從培養(yǎng)基中取出，洗凈培養(yǎng)基后，移植到裝有育苗基質(zhì)的育苗杯，每一育苗杯內(nèi)移入一株生根苗，移栽后澆少量水，之后每兩天澆一次水，每7?10天噴施一次薄肥水，20天后，長出5-7個葉片，苗高達到5-lOcm，即可得到組培商品苗。所述育苗杯內(nèi)的育苗基質(zhì)按如下方法配制而成:將腐葉土、園土、河砂、鋸末，按腐葉土:園土:河砂:鋸末的體積比為4:3:1:2的比例混合而成；所述育苗杯內(nèi)育苗基質(zhì)下有少量蹄片；所述薄肥水由豆餅、菜籽餅、棉籽餅、芝麻餅中的一種或多種兌水慪制，充分腐熟后兌水稀釋而成。
[0015]根據(jù)燕子掌適合通透性好的土壤特性，采用上述育苗基質(zhì)，有利用燕子掌幼苗的根系生長；育苗基質(zhì)下放的少量蹄片，可提供長效基肥。根據(jù)燕子掌對肥水要求不多，甚至要控肥控水的特性，采用上述澆水和施肥方案，使燕子掌幼苗迅速長成茁壯的商品苗。
[0016]本發(fā)明采用組織培養(yǎng)的方法，通過消毒外植體，得到無菌系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進行誘導發(fā)芽、繼代增殖、生長及生根，并對溫度、光照、培養(yǎng)基、育苗基質(zhì)的配比進行篩選、調(diào)控、最后確定最佳培養(yǎng)條件，使其能應用于工廠化生產(chǎn)。植物通過組培方法進行快速繁殖較為常見，但將燕子掌通過組培方法進行快速繁殖，屬國內(nèi)首例。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明建立了燕子掌高效組培快繁體系，提高了燕子掌的繁殖速度和成活率，擴大了繁殖量，降低了成本，同時將優(yōu)良性狀的種苗固定下來，滿足優(yōu)質(zhì)種苗的大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0017]以下結合具體實施例進一步詳細描述本發(fā)明的技術方案實施例一:
一種燕子掌種苗的組培方法，包括以下步驟:
(1)外植體的選擇:采集當年新發(fā)的，健康、飽滿的葉片作為外植體；
(2)消毒:在超凈工作臺上用70%的乙醇處理5s，再用0.1%的氯化汞溶液消毒5分鐘，無菌水清洗5次，用濾水紙吸干水分備用；
(3)誘導培養(yǎng):將步驟(2)所得的外植體接種在裝有誘導培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C，光照強度2000LX，光照時間10小時/天；所述誘導培養(yǎng)基為改良 WPM+TDZ 2.0mg/L+IBA 0.4mg/L+ 瓊脂 7g/L+ 白糖 25g/L，pH 值為 5.8 ；同步進行誘導和增殖培養(yǎng)10天，更新相同培養(yǎng)基，并在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)至外植體萌發(fā)分化出0.5?1cm的不定芽；所述改良WPM的成分及其含量為:K2S04 1900mg/L, NH4N03 300mg/L，MgS04.7H20 350mg/L，CaC12.2H20 90mg/L，KH2P04 170mg/L，F(xiàn)eS04.7H2027.8mg/L，CuS04.5H20 0.25mg/L，ZnS04.7H20 8.6mg/L，Ca(N03)2.4H20 278mg/L，Na2Mo04.2H200.25mg/L，肌醇 100mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，維生素 B1 0.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
[0018](4)繼代增殖培養(yǎng):將步驟(3)誘導培養(yǎng)獲得的不定芽切成具2個不定芽的小塊，接種在繼代增殖培養(yǎng)基中繼代擴繁，產(chǎn)生新叢芽，繼代增殖培養(yǎng)條件為:溫度25°C，光照強度2000LX，光照時間10小時/天，繼代周期為30天/次，所述繼代增殖培養(yǎng)基配方為:改良 WPM+TDZ 1.5mg/L+KT0.3mg/L+IAA 0.2mg/L+ 瓊脂 7g/L+ 白糖 25g/L，pH 值為 5.8 ;所述改良 WPM 的成分及其含量為:K2S04 1900mg/L, NH4N03 300mg/L, MgS04.7H20 350mg/L，CaC12.2H20 90mg/L，KH2P04 170mg/L，F(xiàn)eS04.7H2027.8mg/L，CuS04.5H20 0.25mg/L，ZnS04.7H20 8.6mg/L，Ca (N03) 2.4H20 278mg/L，Na2Mo04.2H20 0.25mg/L，肌醇 lOOmg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，維生素 B1 0.5mg/L，甘氨酸 2mg/L。
[0019](5)生根培養(yǎng):在步驟(4)繼代增殖培養(yǎng)獲得的新叢芽中，選擇高度在2cm以上的小芽轉入生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，15天后得到生根的幼苗，生根培養(yǎng)條件為:溫度25°C，光照強度2000LX，光照時間10小時/天，所述生根培養(yǎng)基配方為:MS+IAA 0.lg/L+NAA0.3g/L+ 瓊脂 7g/L+ 白糖 20g/L，pH 值為 5.8 ;
(6)煉苗:將步驟(5)生根培養(yǎng)所得的幼苗從組培室取出后置于溫棚中，放置3天，溫棚條件為:溫度白天25°C，夜間15°C，濕度白天70%，夜間90%。
[0020](7)移植:將步驟(6)煉苗后的幼苗從培養(yǎng)基中取出，洗凈培養(yǎng)基后，移植到裝有育苗基質(zhì)的育苗杯，每一育苗杯內(nèi)移入一株生根苗，移栽后澆少量水，之后每兩天澆一次水，每7天噴施一次薄肥水，20天后，長出5-7個葉片，苗高達到5-lOcm，即可得到組培商品苗。所述育苗杯內(nèi)的育苗基質(zhì)按如下方法配制而成:將腐葉土、園土、河砂、鋸末，按腐葉土:園土:河砂:鋸末的體積比為4:3:1:2的比例混合而成；所述育苗杯內(nèi)育苗基質(zhì)下有少量蹄片；所述薄肥水由豆餅、菜籽餅、棉籽餅兌水慪制，充分腐熟后兌水稀釋而成。
[0021]實施例二:
一種燕子掌種苗的組培方法，包括以下步驟:
(1)外植體的選擇:采集當年新發(fā)的，健康、飽滿的葉片作為外植體；
(2)消毒:在超凈工作臺上用70%的乙醇處理5s，再用0.1%的氯化汞溶液消毒7分鐘，無菌水清洗6次，用濾水紙吸干水分備用；
(3)誘導培養(yǎng):將步驟(2)所得的外植體接種在裝有誘導培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度26°C，光照強度2500LX，光照時間11小時/天；所述誘導培養(yǎng)基為