明月草組織培養快速繁殖培養基及組織培養快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物組織培養技術領域，特別是涉及明月草組織培養快速繁殖培養基及組織培養快速繁殖方法。
【背景技術】
[0002]明月草(Angelica keiskei koidzumi)又稱金雞毛草，屬菊科菊三七屬，為宿根多年生長常綠直立草本植物，原產于新加坡。明月草含有多種天然活性物質，特別是富含特有物質查爾酮及香豆素(尹慧丹等，2011)，全草可入藥，具有增強人體免疫力、舒張血管、抑制胃酸分泌、抗血栓、降血糖、降血壓、抗組胺、防癌變等功效(Enoki T, et al.，2007)。近年來，明月草又成為人們喜愛的一種蔬菜，主要食用莖葉，食法多樣，可炒食、炸食、涼拌，氽湯或做成茶汁，其具有獨特的芳香，可解魚、肉的腥膻味，莖葉煮水后食味柔滑，口感清爽。
[0003]明月草以分株或扦插繁殖為主，多在每年3-5月進行，但受季節影響較大，且繁殖系數和出苗率低，難以滿足規模化生產的需求。組織培養繁殖速度快，所產種苗為脫毒苗，因此，采用組織培養技術是實現對明月草規模化繁殖的有效途徑。國內利用組織培養技術繁育明月草的研究尚未見報道。
【發明內容】
[0004]為了解決上述的技術問題，本發明的一個目的是建立一種有效的明月草組織培養快速繁殖方法，提高繁殖系數，縮短繁殖周期，并解決季節性限制問題。本發明的另一個目的是提供上述明月草組織培養快速繁殖培養基。
[0005]本發明的技術方案如下:
[0006]明月草組織培養快速繁殖培養基，包括腋芽誘導培養基、繼代培養基、壯苗培養基和生根培養基，其中:
[0007]腋芽誘導培養基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5~5.8 ；
[0008]繼代培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉3-4g/L，ρΗ5.5-5.8 ；
[0009]壯苗培養基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5~5.8 ；
[0010]生根培養基為1/2MSq+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5-5.8。
[0011]本發明所述的MS基本培養基成分構成如下:
[0012](1)大量元素:KN031260mg/L、NH4N031320mg/L、CaCl2.2H20 440mg/L、MgS04.7H20370mg/L、KH2P04170mg/L、FeS04.7H20 427.8mg/L、EDTA_2Na 37.3mg/L ；
[0013](2)微量元素:MnS04.4H20 22.3mg/L、ZnS04.7H20 8.6mg/L、H3P036.2mg/L、Na2Mo04.2H20 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuS04.5H20 0.025mg/L、CoCl2.6H20 0.025mg/L ；
[0014](3)有機物:C6H1206.2H20(肌醇)100mg/L、NH2CH2C00H(甘氨酸)2.0mg/L、C8Hn03N.HC1 (鹽酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4C00H(煙酸)0.5mg/L、C12H17C10S.2HCL(鹽酸硫胺素)0.lmg/L ；
[0015]余量為蒸餾水。
[0016]所述1/2MS基本培養基的成分為:大量元素是MS基本培養基的一半，其余成分微量兀素、鐵鹽、有機成分與MS基本培養基相同。
[0017]所述的MS。培養基成分構成如下:
[0018](1)大量元素:KN031260mg/L、NH4N031320mg/L、CaCl2.2H20 440mg/L、MgS04.7H20370mg/L、KH2P04170mg/L、FeS04.7H20 855.6mg/L、EDTA_2Na 37.3mg/L ；
[0019](2)微量元素:MnS04.4H20 22.3mg/L、ZnS04.7H20 8.6mg/L、H3P036.2mg/L、Na2Mo04.2H20 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuS04.5H20 0.025mg/L、CoCl2.6H20 0.025mg/L ；
[0020](3)有機物:C6H1206.2H20(肌醇)100mg/L、NH2CH2C00H(甘氨酸)2.0mg/L,C8Hn03N.HC1 (鹽酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4C00H(煙酸)0.5mg/L、C12H17C10S.2HCL(鹽酸硫胺素)0.lmg/L。
[0021]明月草組織培養快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0022]步驟1，外植體的選擇:春季以明月草母株上帶有潛伏芽的新發枝條為外植體；
[0023]步驟2，外植體的消毒:剪去枝條葉片，用自來水沖洗2-3分鐘，再用洗潔精洗滌1-2次，接著用自來水沖洗3-5分鐘，再在超凈工作臺上以0.1 %取(:12溶液消毒8-12分鐘，最后用無菌水沖洗4-5遍，瀝干后待用；
[0024]步驟3，腋芽誘導培養:將消毒好的枝條切除莖尖，余下的枝條剪成每段帶有1-2個腋芽的莖段，接種到腋芽誘導培養基上放進培養室進行無菌培養，腋芽誘導培養基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5-5.8，MS 培養基經高壓滅菌15-20分鐘，培養條件為溫度25-30°C，光照強度1500-20001x，每日光照12小時條件下培養，接種后5天腋芽開始萌動，當15-20天伸長至2±0.5cm時，即可進入繼代培養；
[0025]步驟4，繼代培養:將步驟3中獲得的不定芽進行繼代培養，培養基為:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5-5.8，MS 培養基經高壓滅菌15-20分鐘，培養條件為溫度25-30°C，光照強度1500-20001x，每日光照12-14小時條件下培養，培養7-10天，待叢生芽長至1.5-2cm時進行壯苗培養；
[0026]步驟5，壯苗培養:將繼代苗切下接種進行壯苗培養，培養基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉3_4g/L，pH5.5-5.8，溫度、光照條件同步驟4，培養10天，將長至3-4cm的幼苗轉至生根培養；
[0027]步驟6，生根培養:將步驟5中獲得的幼苗進行生根培養，培養基為1/2MS。—蔗糖30g/L+瓊脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，培養條件同步驟4，培養兩周當生根條數達到6條以上，平均根長0.5cm以上時便用清水將根部瓊脂清洗干凈進行移栽；
[0028]步驟7，移栽與管護:育苗棚具有一定遮陰效果和通風條件，移栽基質選用黃心土，苗床提前1天用0.15% ΚΜη04消毒(袋苗需將黃心土裝袋后移栽前一天噴淋0.15%ΚΜη04消毒液)，生根苗移栽后用清水淋透，用塑料薄膜覆蓋，以后每隔一周噴施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌靈藥液，連續噴3-4次，20天后逐步通風，并移除遮蓋物。
[0029]本發明明月草組織培養快速繁殖方法中所述的高壓滅菌，優選壓力為1.lkg/cm2。
[0030]與現有技術相比，本發明具有如下優點:
[0031]1、本發明建立了以莖段為外植體的明月草組織培養快速繁殖方法，一個培養周期內的增殖系數達到5-6倍，生根率和移栽成活率均達到95%以上。
[0032]2、本發明克服了傳統繁殖方式受季節與氣候限制的不足，有效提高了明月草的繁殖系數，縮短了繁殖周期，并解決季節性限制問題，建立的規模化生產體系穩定、苗木品質高，生產周期只需一個半月左右，滿足了種苗繁育的工廠化需求，為該物種的保存及產業化提供了可靠、高效的繁殖方法。
【附圖說明】
[0033]圖1為明月草莖段誘導。
[0034]圖2為明月草叢生芽。
[0035]圖3為明月草生根苗。
[0036]圖4為明月草移栽袋苗。
[0037]圖5為苗床明月草小苗。
【具體實施方式】
[0038]下面以實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不局限于這些實施
[0039]例。實施例1:
[0040]明月草組織培養快速繁殖培養基，包括腋芽誘導培養基、繼代培養基、壯苗培養基和生根培養基，配制方法為:
[0041]腋芽誘導培養基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，ρΗ5.5，經1.lkg/cm2高壓滅菌20分鐘；
[0042]繼代培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉3_4g/L，pH5.8，經 1.lkg/cm2高壓滅菌 20 分鐘；
[0043]壯苗培養基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖 30g/L+瓊脂粉 3_4g/L，ρΗ5.8，經1.lkg/cm2高壓滅菌20分鐘；
[0044]生根培養基為1/2MSq+蔗糖30g/L+瓊脂粉3_4g/L，pH5.8，經L lkg/cm2高壓滅菌20分鐘。
[0045]實施例2:
[0046]明月草組織培養快速繁殖培養基，包括腋芽誘導培養基、繼代培養基、壯苗培養基和生根培養基，配制方法為: