鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于一種采用組織培養繁殖植物種苗的技術領域，具體涉及的是鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法。
【背景技術】
[0002]石斛為蘭科石斛屬植物，主要藥用石斛品種有環草石斛、馬鞭石斛、黃草石斛、鐵皮石斛和金釵石斛。尤以鐵皮石斛藥用價值最高，藥用石斛主要用于滋陰清熱，可以治療具有陰虛癥的急性及慢性咽喉炎、急性支氣管炎、結核病、甲狀腺機能亢進、糖尿病、慢性萎縮性胃炎和免疫功能低下等癥，并對中老年人群具有增強肌體免疫力、抗衰老的保健功效。
[0003]鐵皮石斛自然野生環境特殊，均生長在幾十米高的懸崖峭壁之上，自然繁殖系數極低，再由于人為過度采收，已屬瀕危物種。近些年人們想通過人工栽培方法來繁衍鐵皮石斛，雖有些進展，但一直無法解決成活率低，生產成本高和不能大規模生產等問題。中國專利。申請號2004100173806公開了 “一種鐵皮石斛的培育方法”，該技術在組培苗光照強度采用2000?30001X光照，其優點是可以縮短光照時間和組培苗培養周期，但存在葉片因光照強度大而發生紫紅色，葉綠素含量低，不利于組培苗健壯生長；中國專利申請號2004100844961還公開了一種“鐵皮石斛的人工大面積栽培方法”，該方法在組培苗來源上采用鐵皮石斛種子進行組培繁育，然后采用兩段式將組培苗移栽，先是經過4?5個月的煉苗移栽，然后再將煉苗后的石斛苗移栽到大田生產。這種方法優點是種子繁殖量大，易形成原球莖，并能提高移栽成活率，其不足在于種子繁殖易發生性狀分離變異，群體種性不穩定，種苗繁育生產周期長，生產成本高。
【發明內容】
[0004]根據現有鐵皮石斛組培繁育及人工栽培技術中存在的不足，本發明提出一種采用鐵皮石斛莖桿切片及專用組培配方進行組培繁育及仿野生栽培的方法，采用該方法有利于實現石斛人工規模化生產栽培。
[0005]實現上述目的的技術方案是:
[0006]一、種苗的組培繁育
[0007](1)將鐵皮石斛幼嫩莖桿切成1?2mm厚的切片接種到MS+BA4?5的培養基上，控制溫度在22?24°C、光照在1000?1500Lx條件下培養40?60天，誘導愈傷組織生長，形成原球莖:
[0008](2)將以形成的原球莖接種到滅菌后的MS+BA1.0?2.0+ΝΑΑ0.2?0.5增殖培養基上，溫度在22?24°C、光照1000?1500Lx條件下培養40?60天，使原球莖增殖生長。
[0009](3)將增殖的原球莖接種到MS+BA0.2?0.5+NAA0.05?0.1發芽培養基上，溫度在24°C、光照1000?1500Lx條件下培養60天，使之長出2?3cm長的生根鐵皮石斛苗；
[0010](4)將發芽苗移入MS+NAA0.05?0.1+酪蛋白40mg/L的發芽苗培養基上，在溫度22?24°C、光照1000?1500Lx條件下培養60?80天，使之生長成5?8cm的鐵皮石斛苗；
[0011](5)將鐵皮石斛種苗培養瓶移出培養室，去掉瓶蓋，在常溫下煉苗3?5天，將培養苗用鑷子輕輕取出，洗凈培養基，進行移栽。
[0012]上述光照時間為每天12小時，每隔1小時光照間歇開啟一次。
[0013]上述種苗的組培繁育步驟(1)?(4)為無菌式培育。
[0014]二、仿野生栽培
[0015](1)人工仿野生栽培地選擇
[0016]人工栽培鐵皮石斛選擇海拔高度為450?1000米之間的平地，建成高度為3?5米的大棚做栽培場地，大棚頂部覆蓋75%左右的遮陽網；
[0017](2)栽培床的制作；在大棚內制作栽培苗床，苗床高60公分，寬180公分，長度按大棚長度為準，下層為較粗的松樹皮，厚度5?8公分，上層是粉碎后的細松樹皮，厚3?4公分；
[0018]⑶栽培
[0019]按12X8公分的行、株距將鐵皮石斛苗栽培到床面上，每叢4?5株，移栽后用水澆透。
[0020](4)管理
[0021 ] 大棚內溫度控制在20?28 °C范圍內，棚內濕度控制在60?70 %，遮陰度達到70?80%，棚內高度3?5米，要求大棚四周通風良好，排水方便。每1?2月進行一次病蟲害防治，病害采用農用青霉素、鏈霉素防治，用藥濃度為1000ml水加40萬單位一支，兩種藥交替使用。蟲害可用生物農藥防治，或用揮發性農藥噴施在地面及過道上，放下四周薄膜，半小時后既可殺死害蟲，每年春季在栽培床表而追施腐熟、粉碎后的有機肥1.5?2.5斤/m2，追肥采用葉面噴施多微磷酸二氫鉀或營養液。
[0022](5)采收
[0023]人工栽培的鐵皮石斛3?4年即可采收，采收時間為立冬至清明前植株尚未萌芽前，用剪刀從鐵皮石斛基部將老植株剪下，留下嫩株繼續生長。
[0024]本發明的技術特點在于:
[0025](1)組培用材料選取的是優良石斛幼嫩莖桿切片作為外植體培養材料，其品種性狀穩定，不易發生分離變異。
[0026](2)組培光照強度控制為1000-15001x，采取間隙性光照時間，生成的組培苗葉片深綠，生長健壯，能極大提尚移栽成活率。
[0027](3)組培苗移栽采取先開瓶蓋煉苗3?5天后再移栽。直接移栽到大田苗床，無需穴盤練苗，降低了生產周期好生產成本，移栽后一周內保持80%以上的濕度，每日下午6?7時噴水，以增加葉面濕度(此方法適合漢中栽培，與南方管理方式正好相反)。
[0028](4)大田管理因北方濕度低。原則上不打藥防止病蟲害，只用石灰粉撒施地面，防蟲防病效果很好，沒有農藥殘留。
[0029](5)漢中的石斛生長速度較南方慢，但品質佳。多糖含量達到45.7%，超過藥典規定的20%超過一倍多(附漢中藥檢所檢驗報告)。
[0030]具體實施方法
[0031]下面結合實例對本發明作進一步說明。
[0032]實施例:
[0033]—、鐵皮石斛種苗的組培繁育
[0034]1、誘導愈傷組織:采用MS+BA1.0?2.0+4.0的培養基配方，將培養基配制
[0035]后分裝到培養瓶，在012MPa下滅菌30分鐘后，在超凈工作臺上將鐵皮石斛幼嫩莖桿材料切成1?2mm厚的切片，接種到培養基上，在溫度22?24°C、光照1000?1500Lx條件下培40?60天即可生長出癔傷組織，進而形成原球莖。
[0036]2、原球莖增殖:采用MS+BA1.0?2.0+ΝΑΑ0.2?0.5增殖配方，滅菌后將已形成的原球莖接種到原球莖增殖培養基上進行增殖培養，在溫度22?24°C、光照1000?1500Lx條件下，培養40?60天后可繼續轉接進行增殖培養。
[0037]3、原球莖生根發芽培養:采用MS+BA0.2?0.5+N