一種利用龍腦樟段木培育牛樟芝子實體的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種牛樟芝子實體的培育方法，尤其涉及一種以龍腦樟段木為基質培育牛樟芝子實體的方法。
【背景技術】
[0002]牛樟芝(Antrodia camphorata)又名牛樟燕，為中國臺灣地區特有真菌，是迄今牛樟樹上發現的唯一木腐菌。其宿主專一性較強，僅生長于牛樟樹上，而牛樟樹為中國臺灣地區特有的保育類樹種，數量稀少。牛樟芝含有許多的生理活性成分，如多糖體、三萜類化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白質(含免疫蛋白)、維生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、甾醇類、纖維素、血壓穩定物質等。牛樟芝的有效成分中以三萜類化合物為最特別，高達200種以上，是其他菌類無法比擬的，使牛樟芝具有顯著的抗癌、保肝等功效。牛樟芝子實體氣芳香味辛苦、平，有祛風行氣、化淤活血、溫中消結、解毒消腫、鎮靜止痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、提升機體免疫力之效；對于治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有獨特功能。
[0003]目前關于牛樟芝的人工培育方法，主要有液體深層發酵法、太空包法、皿式培養法及牛樟木段木培育法。以上方法各有其缺點，液體深層發酵法雖然周期短，但是得到的是菌絲體的形式，牛樟芝特有的三萜類化合物不能合成；太空包法及皿式培養法僅有含量極低的三萜類化合物；牛樟芝段木培育法能得到與野生牛樟芝完全一致的子實體，但是需要以牛樟木為基質，存在資源稀少、成本較高的缺點。
[0004]龍腦樟樹(Cirmamonun camphora)原產于印尼蘇門答臘島，1988年湖南首次發現有分布，現在已發展龍腦樟林木超過4萬畝；隨后江西也發展近萬畝。
[0005]迄今為止，還未有以龍腦樟段木為基質進行牛樟芝栽培的報道。
【發明內容】
[0006]本發明目的是針對現有技術的不足，提供一種利用龍腦樟段木培育牛樟芝子實體的方法，本發明擴大了牛樟芝宿主范圍，保護了珍稀的牛樟樹資源，子實體與野生牛樟芝功效成分一致，三蔽總量不少于80mg/100g，總多糖不少于50mg/100g，促進了牛樟芝產業的發展。
[0007]本發明的目的是通過以下技術方案來實現的:一種利用龍腦樟段木培育牛樟芝子實體的方法，該方法包括以下步驟:
[0008](I)將牛樟芝菌種接種到斜面培養基中，于20_30°C培養10-30d，制得斜面菌種；所述斜面培養基為:龍腦樟提取液10-20mL/L，蔗糖10_30g/L，MgSO4.7H20 0.5_2g/L，K2HPO4.3H20 l_5g/L，維生素Bj-lOmg/L，瓊脂15_20g/L，用馬鈴薯提取液補足體積至1L，pH為6.0-7.0 ;其中，所述龍腦樟提取液為:龍腦樟木料粉碎，過40目篩，得龍腦樟木料粉，按照龍腦樟木料粉和水的質量比1:200加水，常壓煮沸2小時，過濾得龍腦樟提取液；所述馬鈴薯提取液為:馬鈴薯100-300g去皮切塊，得馬鈴薯塊，按照馬鈴薯塊和水的質量比1-3:10加水，常壓煮沸30min，過濾得馬鈴薯提取液。
[0009](2)用無菌水沖洗步驟I制得的斜面菌種的孢子，制成孢子懸液，并用無菌水將孢子懸液的OD6。。調整為1.5;
[0010](3)將步驟2制成的孢子懸液按5% -10% (v/v)的比例接種到液體菌種培養基，于25-35 °C、100-200r/min條件下，避光培養5_25d，制得液體菌種；所述液體菌種培養基為:龍腦樟提取液 10-20mL/L，蔗糖 10_30g/L，MgSO4.7H200.5_2g/L，K2HPO4.3H20 l_5g/L，維生素Bj-lOmg/L，用馬鈴薯提取液補足體積至1L，pH為6.0-7.0 ;
[0011](4)將龍腦樟木料分解成5X 10X20cm的段木，用水浸泡12_48h，然后121°C滅菌20-60min。冷卻后，將步驟3制得的液體菌種接種到龍腦樟段木上。
[0012](5)于25_35°C、濕度70%-90%條件下，避光培養1-12個月。
[0013](6)鏟掉龍腦樟木段木表面的牛樟芝菌絲體形成的菌皮，于20-40°C、濕度70% -90%，避光培養12-36個月，即可得到牛樟芝子實體。
[0014]進一步地，采收后的龍腦樟段木，噴水濕潤后繼續培養，重復步驟(5)和(6)，可再收獲1-2次牛樟芝子實體。
[0015]本發明的有益效果是:本發明具有產量高、周期短、功效成分與野生牛樟芝一致、原料來源豐富穩定等特點，其三蔽總量不少于80mg/100g，總多糖不少于50mg/100g ;實現了牛樟芝宿主范圍的擴大，既有利于對資源稀少的牛樟樹的保護，又促進了牛樟芝產業的發展，能帶來良好的生態效應、社會效應及經濟效應。
【附圖說明】
[0016]圖1為正在培養中的牛樟芝子實體的實物圖；
[0017]圖2為采收后的牛樟芝子實體的實物圖。
【具體實施方式】
[0018]下面結合具體實施例，對本發明進行進一步的描述，但本發明所保護的范圍并不僅限于此:
[0019]實施例1:牛樟芝子實體培育
[0020]1.配制斜面培養基:龍腦樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4.7H20 0.5g/L，K2HPO4.3H20 lg/L，維生素Bjmg/L，瓊脂15g/L，用馬鈴薯提取液補足體積至1L，pH 6.0。龍腦樟提取液為:龍腦樟木料粉碎，過40目篩，得龍腦樟木料粉，按照龍腦樟木料粉和水的質量比1:200加水，常壓煮沸2小時，過濾得龍腦樟提取液；馬鈴薯提取液為:馬鈴薯100-300g去皮切塊，得馬鈴薯塊，按照馬鈴薯塊和水的質量比1-3:10加水，常壓煮沸30min，過濾得馬鈴薯提取液。
[0021]2.將牛樟芝菌種接種到斜面培養基，于20°C避光培養7-20d，制得斜面菌種。
[0022]3.用無菌水洗下斜面菌種上的孢子，用無菌水將孢子懸液的0D_調整為1.5，以5% (v/V)的接種量接入液體種子培養基，于28°C、200r/min條件下，避光培養3d。所述液體種子培養基配方:液體種子培養基:龍腦樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4.7H20 0.5g/L，K2HPO4.3H20 lg/L，維生素Bjmg/L，用馬鈴薯提取液補足體積至1L，pH 6.0。
[0023]4.龍腦樟木料分解成大小為5 X 10 X 20cm的段木，用水浸泡8h，然后121°C高溫滅菌20min。冷卻后，將液體菌種接種到龍腦樟段木。
[0024]5.于20°C、濕度70%條件下，避光培養1-12個月。
[0025]6.1產掉龍腦樟木段木表面牛樟芝菌絲體形成的菌皮，于20°C、濕度70%，避光培養12-36個月，可得到牛樟芝子實體。
[0026]7.采收后的龍腦樟段木，噴水濕潤后繼續培養，重復步驟5和6，可再收獲1-2次牛樟芝子實體。
[0027]