一種獼猴桃初代培養芽誘導方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種獼猴桃初代培養芽誘導方法，屬于獼猴桃繁殖技術領域。
【背景技術】
[0002] 獼猴桃是人工馴化栽培的野生果樹，稱猴桃果實含有豐富的營養成分，豐富的維 生素，礦質元素以及14種氨基酸，每1009鮮果肉中Vc達到90-420mg，享有"維生素 C之 王"的美稱。獼猴桃可鮮食，也可加工成果醬果汁等，還有醫療保健作用，是深受人們喜愛的 水果。紅陽獼猴桃屬于中華獼猴桃系列，是在四川稱猴桃原產地蒼溪發現的自然變異品種， 早果性、豐產性和抗逆性強，具有極高的推廣前景，其紅肉的性狀極具開發利用價值。
[0003] 獼猴桃是雌雄異株，采用種子繁殖，周期長，且不易獲得大批雌株群體，而利用扦 插、嫁接，成活率低，效率低。采用傳統方法已經不能滿足規模化種植的要求了。因而采用 組織培養技術繁殖獼猴桃成為重要的良種繁育途徑。在獼猴桃組培中，不同的品種存在基 因型差異，不同品種需要不同的培養基。以往對紅陽獼猴桃的研究中，以MS為基本培養基 進行研究，得出叢生芽誘導率最高只有27. 27%，極大地影響了獼猴桃快繁體系的建立，制 約了紅陽獼猴桃的規模化生產。
[0004] 因此，目前的獼猴桃叢生芽誘導技術，存活率和萌發率過低，且褐化率過高，嚴重 影響了獼猴桃幼芽品質，無法滿足繼代增殖的需要。
【發明內容】
[0005] 發明目的：為了克服現有技術中存在的不足，本發明提供了一種獼猴桃初代培養 芽誘導方法。
[0006] 技術方案：為實現上述目的，本發明提供一種獼猴桃初代培養芽誘導方法，包括以 下步驟：
[0007] (1)外植體選擇：選擇獼猴桃當年生枝條為外植體，用剪刀剪掉后插在水中以防 水分蒸發；
[0008] (2)外植體消毒：將步驟（1)所得獼猴桃枝條葉片剪掉，然后初修剪、清洗，再轉到 無菌環境中，消毒，沖洗，再修剪，得莖段；
[0009] (3)接種：將上述莖段接種于芽誘導培養基上，每玻璃瓶接一個莖段；
[0010] (4)芽誘導培養：將接種后的外植體放在培養室中，先在弱光條件下培養，再在強 光條件下培養。
[0011] 作為優選，所述步驟（2)中初修剪和清洗的方法為：將所述枝條的長條先剪成 5_8cm長枝條，經過洗衣粉清洗，最后流水沖洗2_4h。
[0012] 作為另一種優選，所述步驟（2)中消毒、沖洗和再修剪的方法為：先用75%酒精消 毒20-30秒，再用0. 1 %升萊消毒6-8分鐘，再用無菌水沖洗8-10次后，剪成l-2cm長的莖 段。
[0013] 作為另一種優選，所述步驟（3)中培養基為WPM基本培養基，其還包括以下成分： 6-芐基氨基嘌呤0· 5-2mg/L、萘乙酸0· 1-lmg/L、活性炭2-5mg/L、維生素 C 5-10mg/L、瓊脂 7g/L、鹿糖 30g/L。
[0014] 作為另一種優選，所述步驟（3)中培養基調節pH為5. 8。
[0015] 作為另一種優選，所述步驟（4)中弱光條件為：光強為800-lOOOlux，培養時間為7 天。
[0016] 作為另一種優選，所述步驟（4)中強光條件為：光強為2500-30001UX，培養時間為 15-25 天。
[0017] 作為另一種優選，所述步驟（4)培養室中培養溫度為25 士 2°C。
[0018] 作為另一種優選，所述獼猴桃為紅陽獼猴桃。
[0019] 本發明中所述WPM基本培養基為本領域常用培養基，現有技術中已有記載。
[0020] 有益效果：相對于現有技術，本發明獼猴桃初代培養芽誘導方法，不僅具有現有技 術中遺傳性狀穩定和培養時間短的優勢，最重要的是通過整個方法，以及特殊的處理，大大 提高了外植體存活率和萌發率，同時也避免了出現褐化現象。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例對本發明作更進一步的說明。
[0022] 實施例1
[0023] (1)外植體選擇：選擇紅陽獼猴桃當年生枝條為外植體，用剪刀剪掉后插在水中 以防水分蒸發；
[0024] (2)外植體消毒：將步驟⑴所得獼猴桃枝條葉片剪掉，然后枝條的長條先剪成 5-8cm長枝條，經過洗衣粉清洗，最后流水沖洗2h，再轉到無菌操作臺上，先用75 %酒精消 毒20秒，再用0. 1 %升汞消毒6分鐘，再用無菌水沖洗8次后，剪成l-2cm長的莖段；
[0025] (3)接種：將上述莖段接種于芽誘導培養基上，每玻璃瓶接一個莖段，所述培養基 為WPM基本培養基，其還包括以下成分：6_芐基氨基嘌呤0. 5mg/L、萘乙酸0. lmg/L、活性炭 2mg/L、維生素 C 5mg/L、瓊脂7g/L、蔗糖30g/L，調節培養基pH為5. 8 ;
[0026] (4)芽誘導培養：將接種后的外植體放在培養室中，培養溫度為25 士 2°C，先在光 強為8001ux的弱光條件下培養，再在光強為25001ux的強光條件下培養15天。
[0027] 實施例2
[0028] (1)外植體選擇：選擇紅陽獼猴桃當年生枝條為外植體，用剪刀剪掉后插在水中 以防水分蒸發；
[0029] (2)外植體消毒：將步驟⑴所得獼猴桃枝條葉片剪掉，然后枝條的長條先剪成 5-8cm長枝條，經過洗衣粉清洗，最后流水沖洗4h，再轉到無菌操作臺上，先用75 %酒精消 毒30秒，再用0. 1 %升汞消毒8分鐘，再用無菌水沖洗10次后，剪成l-2cm長的莖段；
[0030] (3)接種：將上述莖段接種于芽誘導培養基上，每玻璃瓶接一個莖段，所述培養基 為WPM基本培養基，其還包括以下成分：6_芐基氨基嘌呤2mg/L、萘乙酸lmg/L、活性炭5mg/ L、維生素 C10mg/L、瓊脂7g/L、蔗糖30g/L，調節培養基pH為5. 8 ;
[0031] (4)芽誘導培養：將接種后的外植體放在培養室中，培養溫度為25 士 2°C，先在光 強為1000 Iux的弱光條件下培養，再在光強為30001ux的強光條件下培養25天。
[0032] 實施例3
[0033] (1)外植體選擇：選擇紅陽獼猴桃當年生枝條為外植體，用剪刀剪掉后插在水中 以防水分蒸發；
[0034] (2)外植體消毒：將步驟⑴所得獼猴桃枝條葉片剪掉，然后枝條的長條先剪成 5-8cm長枝條，經過洗衣粉清洗，最后流水沖洗3h，再轉到無菌操作臺上，先用75 %酒精消 毒25秒，再用0. 1 %升汞消毒7分鐘，再用無菌水沖洗9次后，剪成l-2cm長的莖段；
[0035] (3)接種：將上述莖段接種于芽誘導培養基上，每玻璃瓶接一個莖段，所述培養基 為WPM基本培養基，其還包括以下成分：6_芐基氨基嘌呤I.