土壤條件下應用香草醛防治南方根結線蟲的施用方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于農業病蟲害防治領域，具體涉及一種利用香草醛的植保方法。
【背景技術】
[0002]南方根結線蟲(Meloidogyne incognita)是世界范圍內的重要病原生物之一，它給世界農業生產帶來了嚴重經濟損失。南方根結線蟲寄主范圍廣，共計超過1700種植物(Sasser et al., 1983.The internat1nal Meloidogyne project-1ts goals andaccomplishments.Annual Review of Phytopathology 21，271 - 288)。它的生命周期長短主要受溫度、濕度以及寄主種類的影響。土壤溫度20-30°C相對濕度40% -70%, pH4-8最有利于線蟲的生長和繁殖。南方根結線蟲在正常溫度和濕度下完成一個生命周期僅需要30-60天(陳森玉和陳品三，1990.大豆根結線蟲病病原生物學特性觀察.植物病理學報20，253-257.)。近幾年來，我國蔬菜大棚的快速發展，為南方根結線蟲的繁殖提供了適宜的溫度；同時作物種植時間長、連作現象嚴重，為南方根結線蟲的繁殖創造了有利條件。寄主范圍廣，生命周期短，傳播形式多樣，經濟損失嚴重，繁殖速度快，所以南方根結線蟲病害已經成為我國農業生產中的一大障礙。
[0003]南方根結線蟲J2幼蟲具有侵染植株的能力，它在土壤中感受到寄主分泌物的信號分子，并向寄主根尖部分趨向性迀移。迀移至根尖伸長區進行侵染。線蟲鉆入寄主根部后，利用口針將其食管腺細胞內的分泌物注射到寄主細胞內，誘導形成增大的、多核的、新陳代謝比較旺盛的并且為線蟲持續提供營養物質的巨細胞。此外其細胞壁內突生長并形成典型的傳遞細胞，這些細胞可以增加對維管束內營養物質的吸收。所以由于寄主根系受損導致水分和營養成分源源不斷的喪失，從而使寄主生長受損以及產量的降低(Castagnone-Sereno et al., 2013.Diversity and Evolut1nof Root-KnotNematodes, Genus Meloidogyne:New Insights from the Genomic Era.Annual Reviewof Phytopathology 51,203-220)。同時南方根結線蟲利用口針刺破寄主細胞壁形成的物理傷害為其他病原生物提供了入侵通道，加重了作物枯萎病、根腐病、立枯病等土傳病害的發生(van de Putten et al., 2006.Nematode interact1n in nature: Mode Is forSustainable Control of Nematode Pests of Crop plants ? Advances in Agronomy89，228-260.)。
[0004]目前，化學防治在根結線蟲的防治過程中占有重要地位，在實際生產中能達到立竿見影的效果，是果農、菜農深受青睞的方法。但目前使用的化學殺線劑存在毒性大、對環境污染嚴重等諸多問題。隨著公眾環保意識的增強和線蟲抗藥性的增加，化學殺線蟲劑的應用日益受到限制。生物防治是從生態學角度出發尋找的防治方法，以其環境效益好、安全等優勢成為無公害防治根結線蟲的研究熱點。采用生物防治的方法控制線蟲，不僅能達到除害增產的效果還可以減少化學防治帶來的災害，生態和社會效益顯著。
[0005]香草醛在自然界中廣泛存在，許多植物中都存在香草醛。香草醛無毒，在食品添加劑、醫藥、香料工業等方面有諸多應用。本課題組前期的研究結果表明抗性番茄品種(仙客系列)明顯抑制南方根結線蟲的侵染和繁殖，與易感品種相比其根系分泌物存在特異性物質香草醛。已初步在室內模擬條件下驗證香草醛具有較強的抑制線蟲孵化和殺線蟲的效果，但在復雜的土壤條件下香草醛防治線蟲的效應并不清楚。
【發明內容】
[0006]針對本領域的不足之處，本發明的目的是本發明提供一種香草醛在土壤條件下防治線蟲的施用方式和相應的最適濃度范圍，同時為通過生物學手段和措施防治根結線蟲對作物的侵染危害提供重要的理論和技術依據。
[0007]實現本發明上述目的技術方案為:
[0008]—種土壤條件下應用香草醛防治南方根結線蟲的施用方法，其是用香草醛溶液對土壤進行滴灌。
[0009]所述的施用方法，具體為，在番茄苗齡為三葉一心或五葉一心時移苗，每盆一株，移苗后向土壤中施用香草醛，施用的方式為直接施入或滴灌，按照土壤干重計，施用香草醛量為 0.2 ?8.0mmoI/kg.dry soil。
[0010]其中，土壤中有線蟲1000?1500條/kg。
[0011]其中，所述直接施入是將香草醛用水溶解，加入到土壤中，按照土壤干重計，香草醛加入的摩爾比例為0.2?8.0mmoI/kg.dry soil。
[0012]直接施入時，按香草醛0.1?1mmol用20ml水進行溶解。
[0013]其中，所述滴灌是在番茄移苗時在土中埋置滴灌裝置，將香草醛配制為濃度0.2?8.0mmol/L的溶液，每3天滴灌一次，每次滴灌100?150mL/kg 土壤。
[0014]直接施入方法中，優選在土壤中每1000?1500條南方根結線蟲，施用0.4?2.0mmol的香草酸。
[0015]滴灌方法中，優選在土壤中每1000?1500條南方根結線蟲，每3天滴灌一次0.4?2.0mmol的香草醛溶液。
[0016]本發明的有益效果在于:
[0017]本發明發現了香草醛對南方根結線蟲的防治作用，實驗了采用直接施入法和模擬滴灌法施入土壤來防治南方根結線蟲。土壤條件下香草醛直接施入土壤濃度為0.2-4.0mmoI/kg.dry soil時不僅確保番前正常生長發育同時抑制了線蟲的侵染和繁殖，其中對番茄根結數抑制率達26.5% -57.2%，對卵塊的抑制率達29.5% -46.20Z0o選擇防治線蟲的最適濃度范圍為0.2-4.0mmoI/kg.dry soil。土壤條件下香草醛模擬滴灌濃度為0.4-8.0mmol/L時不僅確保番茄正常生長發育同時抑制了線蟲的侵染和繁殖，其中對番茄根結數抑制率達38.8% -68.4%，對卵塊抑制率達62% -73%。選擇防治線蟲的香草醛適宜濃度范圍為0.4-8.0mmoI/Lο
【附圖說明】
[0018]圖1示出了土壤條件下香草醛直接施入土壤對番茄株高的影響。
[0019]圖2示出了土壤條件下香草醛直接施入土壤對南方根結線蟲侵染的抑制效果。
[0020]圖3示出了土壤條件下香草醛直接施入土壤對南方根結線蟲繁殖的抑制效果。
[0021]圖4示出了土壤條件下香草醛模擬滴灌對番茄株高的影響。
[0022]圖5示出了土壤條件下香草醛模擬滴灌對南方根結線蟲侵染的抑制效果。
[0023]圖6示出了土壤條件下香草醛模擬滴灌對南方根結線蟲繁殖的抑制效果。
【具體實施方式】
[0024]下面結合附圖和實施例，對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細描述。
[0025]如未特別說明，【具體實施方式】中所采用的手段均為本領域常規的技術手段。
[0026]實施例中的試驗材料，番前(Lycopersicon esculentum cv.)佳粉18，種子購自北京蔬菜花卉研究所。
[0027]南方根結線蟲(Meloidogyne incognita)從山東壽光溫室大棚中分離獲得。
[0028]香草醛(Vanillic,CAS: 121-33-5)，純度 99%，購自 Sigma 公司。
[0029]實施例1直接施入香草醛對南方根結線蟲的防治效應
[0030]本實施例中，南方根結線蟲的培養及收集方法如下:
[0031]植物種植:將佳粉18號番前種子用15% (V/V)過氧化氫溶液侵泡15min消毒后，清水洗凈，將種子均勻鋪在覆有兩層濕潤濾紙的培養皿中，避光處理放于恒溫培養室內。待發芽后播于含有蛭石的育苗板內。待幼苗長至三葉一心后移栽至裝有滅菌土的塑料盆內。移栽1d后接種線蟲。
[0032]線蟲接種方法:在番茄莖基部約Icm處均勻打4個2_3cm深的孔，將含有南方根結線蟲二齡幼蟲的懸浮液用移液槍打入孔中，隨后將孔封住并適當澆水。
[0033]線蟲的收集:接種線蟲30-50d后，選取已產生卵塊的番茄植株根系，去離子水沖洗干凈，用鑷子小心取下呈乳白色或者褐黃色的卵塊。將挑取得卵塊放在鋪有兩層吸水紙的篩子上。篩子放置于培養皿中，加入一定量的清水，使清水恰好侵沒吸水紙，蓋上皿蓋。隨之遮光放于28°C環境中培養，2-3天后開始收集盆養皿中的懸浮液。根據試驗需要調至不同濃度備用。
[0034]使用0.2mmol/kg.dry soil、0.4mmo1/kg.dry soil、0.8mmol/kg.dry soil、1.0mmoI/kg.dry soil、2.0mmoI/kg.dry soil、4.0mmoI/kg.dry soil、8.0mmoI/kg.drysoil香草醛以及去離子水(對照)，利用盆栽試驗，采用直接施入土壤的方式，以番茄株高、根結數和卵塊數為測定指標，實驗土壤條件下香草醛直接施入濃度為0.2mmol/kg.drysoil、0.4mmol/kg.dry soil、0.8mmol/kg.dry soil、L Ommol/kg.dry soil、2.0mmol/kg.dry soi1、4.0mmol/kg.dry soi1、8.0mmol/kg.dry soil 對南方根結線蟲的防治效果以及最適濃度范圍。具體方法如下:
[0035]將滅菌土分裝為Ikg/盆，做標簽，將0.1m