一種天然林下外生菌根合成的專用菌源的使用方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于真菌學領域，具體涉及一種天然林下外生菌根合成的專用菌源的使用方法。
【背景技術】
[0002]據國內報道，外生菌根食用菌占已知食用菌種數的677個/966個，且多數因含人類必須活性物質而歸屬于人類健康食品，加上外生菌根菌對森林生態的巨大貢獻，必將成為未來食用菌產業的發展方向。包括正紅燕、松鸞、美味牛肝菌、松乳燕、雞縱、紅牛肝、黃牛肝、干巴菌，但不限止這些種類，相當多種類被公認是世界著名的健康+美味食品。
[0003]使林業樹木感染菌根菌并形成共生體的技術稱為菌根化技術。菌根化技術無疑是發展菌根食用菌的必由之路。目前實現產業化的塊菌菌根化技術就是一個經濟效益突顯的應用例子。
[0004]到目前為止，能夠穩定地進行規模化、商業化仿生栽培的菌根化模式僅塊菌{Ttuber sp)模式，該模式通過苗期接種、菌根合成、園林化移植、規范化管理來獲得可食用子實體，這些獲得成功的菌根食用菌的共同特征是可以在森林郁閉度較低環境下獲得子實體。而對于更大比例的中后期菌根菌，該模式無效。由于中后期外生菌根菌需要在郁閉度較高的成熟林分下才能采集到，不能采用塊菌菌根化的辦法，天然林下菌根化技術是中后期菌根食用菌開發的前提，技術應用前景廣闊。
[0005]世界各地，包括我國主要進行林業苗木菌根化，成林菌根化研究進展緩慢。究其原因包括:其一，林木幼苗期的細根幼嫩，易于菌根侵入(孟繁榮邵景文曲紹義，1995);其二，苗圃的土壤易于人工控制環境，直至使用消毒土壤以減少菌根接種過程的雜菌干擾；其三，苗木接種較易控制光溫水濕等外部條件。相比較而言，天然林下接種非但無上述有利條件，還得忍受林下土壤中豐富的微生物種類，包括先期定殖的菌根菌，對菌根菌接種的種種不利影響。林下接種難是外生菌根菌和菌根食用菌發展的瓶頸。試圖繞過這個瓶頸，采用美味牛肝菌共生苗木移入成林的辦法也無法成功(Hall 1.R.Lyon A.J.E.Wang Y.，1998)0
[0006]菌根化技術中通常使用的接種源有人工培養菌絲體和真菌孢子，人工培養菌絲體在微生物種類豐富的森林土壤中存活時間很短，難以接種成功；真菌孢子可以在森林土壤中獲得較長的存活期和較高接種率，但由于收集難、成本高，且無法進行人工繁殖，從而影響規模化、商業化發展，目前主要用于天然林下菌根化試驗。
【發明內容】
[0007]本發明的目的在于提供一種天然林下外生菌根合成的專用菌源的使用方法，不僅可以通過人工繁殖獲得大量在天然林下存活時間較長、接種成功率高的菌源，同時還彌補少數難于分離純化的菌根菌的繁殖問題。
[0008]為實現上述目的，本發明采用如下技術方案: 一種天然林下外生菌根合成的專用菌源的使用方法:培養與目標菌根菌有共生關系的健康林業苗木，實施苗期菌根化技術以獲得目標菌的成熟菌根；將精挑細選的健康菌根截成2±0.5mm長的片斷，按150±50個片斷/L的比例混入預先混勻經高溫滅菌且溫度為10°C _25°C的蛭石、泥碳土、無菌水的混合物中，直接用作菌源實施苗木或成林菌根化，或用作下一代菌根的接種源。
[0009]所述的蛭石、泥碳土、無菌水的混合物中蛭石、泥碳土、無菌水的重量比為1:1:
0.44。
[0010]精挑細選的健康菌根是指，剪切直徑2mm以下的細根，用無菌水仔細清洗浮泥；置顯微鏡下檢測，去除所有病變變色和/或菌套生長較弱的菌根，置10°c環境下無菌保存；使用前，先將菌根剪切成2±0.5mm長的片斷，再次抽樣鏡檢，確保菌根片斷無病率達顯著水平。
[0011]天然林下接種或苗圃接種方法:將接種物包被于寄主細根周邊，每穴放150±30ml容積的接種物，以確保接種后每個寄主細根的周邊平均8個，至少有I個菌源菌索與目標細根近距離接觸，接種時及其后的2周時間，按菌根菌對環境的要求進行光、溫、濕、氣調節。
[0012]本發明的顯著優點在于:本發明不僅可以通過人工繁殖獲得大量在天然林下存活時間較長、接種成功率高的菌源，同時還彌補少數難于分離純化的菌根菌的繁殖問題。本發明提供的接種源在10°C溫度+70%濕度的陰暗環境下，存活時間可達4周以上(供試的紅菇屬及牛肝菌屬真菌在15-20°C條件下，離體4周后的培養成功率30%);在25°C環境下，存活時間I周以上，比以菌絲或孢子為菌源的接種明顯提高接種的成功率。
[0013]I)技術簡單:苗木菌根化是一個很成熟的技術，故本發明獲得接種源技術簡單，易于操作；2)效果顯著:關鍵是將容易獲得的菌根截成小片斷后，其在適宜建立侵染關系的溫、濕條件下的森林根系及土壤中可以保持活力I周以上，確保菌根上的菌絲或菌索有足夠的時間延伸并獲得成功侵染；3)對于難于分離純化的菌根菌，也可通過其孢子作為初始接種源獲得大量繁殖，大幅度擴大接種源數量，在生產上有著極為重要的意義；4)繁殖系數高:幼苗接種成功后移植到天然苗圃繁殖長達2年，繁殖系數高達10000倍以上，方便大面積推廣應用。
【附圖說明】
[0014]圖1是處理Ihr后菌根(正常)及菌絲體(正常)顯微照片。
[0015]圖2是處理40hr后菌根(正常)及菌絲體(菌絲體內出現大量液泡)顯微照片。
[0016]圖3是處理I周后菌根(菌根周邊出現大量雜菌，但菌根依然有一定活力)及菌絲體(菌絲體溶解)顯微照片。
[0017]圖4是處理4周后的菌根顯微照片，仍有一些菌索伸出，顯示一定活力。
[0018]圖5是長滿大量白色菌索的絲栗栲苗木根部。
【具體實施方式】
[0019]本發明介紹的一種外生菌根真菌接種專用菌源的使用，包括在嚴格無菌條件下培養無菌林業苗木，在苗木長出細根至I周年之間的任意時期，控制溫光水濕氣條件下，采用人工分離菌絲體或菌根菌的孢子進行人工接種苗木細根，在適