一種球孢白僵菌種衣劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及球孢白僵菌種衣劑及其制備方法。一種微生物農藥的新劑型。
【背景技術】
[0002] 玉米是我國第二大糧食作物，年產3000億斤以上，可用來食用，也可以作為飼料 和工業原料生產工業酒精和燒酒等。而玉米螟（Ostrinia nubilalis)是玉米生產中的主 要害蟲，不僅取食玉米葉片、蛀入玉米主莖或果穗內，降低光合作用，影響養分運輸，還產生 各種次級病害，致使玉米減產降質，常年造成玉米的產量損失在7%-15%，嚴重年份減產50% 以上，甚至絕產，給我國糧食生產造成巨大的經濟損失。
[0003] 化學農藥在玉米螟的防治中一直起著主要的作用，保證了糧食增產和安全問題， 但是隨著大量、連續的化學農藥使用，農藥殘留對食用安全和環境經安全的危害越來越嚴 重，環境兼容性好的高效農藥已成為農藥發展的方向。球孢白僵菌（Beauveria bassiana) 是一種微生物農藥，是目前國內應用最廣泛的昆蟲病原真菌，可侵染鱗翅目螟蛾科、金花蟲 科、金龜子科、蚜蟲科800余種害蟲具有致病性強，殺蟲范圍廣，環境友好等優點，尤其是在 玉米螟和松毛蟲的防治中更是取得了輝煌的成就，已經在各個地區被廣泛應用。
[0004] 目前，在白僵菌防治害蟲中應用的劑型主要有粉劑、可濕性粉劑、顆粒劑、油劑、懸 浮劑以及油懸浮劑等幾大類，防治手段包括噴粉、撒顆粒劑、噴霧防治及無紡布掛條等，但 這些農藥劑型和防治手段均采用球孢白僵菌與害蟲直接接觸的觸殺方式，唯一目標是殺蟲 效率。近年來，隨著昆蟲內生真菌與植物互作關系研宄的深入，學者們發現球孢白僵菌可以 在玉米、高粱、小麥、西紅柿、香蕉、罌粟等植物體內共生，提高植物的抗病蟲能力，增強植物 對營養的吸收、對生物量的累積、對逆境環境的適應，是植物的生態益生菌。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種球孢白僵菌種衣劑及其制備方法，利用球孢白僵菌與 植物共生互惠的關系，其篩選到包衣種子孢子含量高、孢子萌發率高、可高效機械化播種的 種衣劑，該種衣劑能明顯促進玉米生長和提高玉米的抗蟲性；對玉米具有促生和抗蟲作用， 可機械化播種。
[0006] 本發明的技術方案是這樣實現的：一種球孢白僵菌種衣劑懸乳劑，包含如下組分： 1. Og懸乳劑、50-100g玉米種子，攪拌均勾，瞭干待播種。
[0007] 所述的懸乳劑包含如下組分：水55-75ml、聚乙烯醇3. Og,種衣成膜劑853 2. 〇g，麥芽糖2. 0g、蛋白胨3. 0g、黃原膠I. 0g、農乳600# 2. 0g、農乳603# 2. 0g、乳化劑 AllO 2. Og、乳化劑M0A23 2. 0g、大紅水性色素 I. 0g、乳酸鏈球菌素0. 5g、球孢白僵菌高 孢粉 10. 0-30. 0g。
[0008] 所述玉米種子選自市售玉米種子：肯粘1號，平均百粒重為23g，發芽率多90%。
[0009] 所述球孢白僵菌高孢粉為含水量為5-10%的球孢白僵菌高孢粉，細度為400目，孢 子萌發率多95%。
[0010] 所述的聚乙烯醇為成膜劑，購自國藥集團化學試劑有限公司。
[0011] 所述的種衣成膜劑853為成膜劑，購自廣州凡采精細化工有限公司。
[0012] 所述的麥芽糖為高溫保護劑和營養劑，購自工生物工程(上海）有限公司。
[0013] 所述的蛋白胨為增稠劑和營養劑，購自北京澳博星生物技術有限公司。
[0014] 所述的黃原膠為增稠劑，購自淄博中軒生化有限公司。
[0015] 所述的農乳600#和農乳603#為乳化劑，購自山東天道生物工程有限公司。
[0016] 所述的乳化劑AllO和乳化劑M023為乳化劑，購自江蘇省海安石油化工廠。
[0017] 所述的大紅水性色素為警戒色，購自廣州凡采精細化工有限公司。
[0018] 所述的乳酸鏈球菌素為生物保護劑，購自天津艾瑪斯特生物科技有限公司。
[0019] 所述的水為純凈水，購自公主嶺市叮咚飲品有限公司。
[0020] 本發明積極效果是通過對球孢白僵菌種衣劑的制備，實現了球孢白僵菌與種子同 時播種，提高了球孢白僵菌施用的勞動效率；同時，本研宄獲得的球孢白僵菌包衣種子可短 時間保存，不影響種子和孢子活力，這對地下害蟲防治、促進玉米生長、提高玉米抗蟲性具 有重要意義，打破了球孢白僵菌僅僅作為殺蟲劑施用的現狀，對推進生物農藥球孢白僵菌 的商業化和產業化發展具有重要意義。
[0021] 為了更好地驗證本發明的效果，通過以下實驗例來進行說明： 一、試驗方法 1. 制備懸乳劑方法： 根據懸乳劑1-5的配方，向砂磨機料桶中依次加入純凈水、聚乙烯醇、成膜劑835、黃 原膠、蛋白胨、麥芽糖、農乳600#、農乳601#、乳化劑A110、乳化劑M023,2500rpm/min，砂磨 15-20min ;待將這些化合物攪拌均勾后加入大紅水性色素和乳酸鏈球菌素，2000rpm/min， 砂磨5min ;最后加入球孢白僵菌高孢粉，根據加入量的不同在2500rpm/min砂磨10-25min， 待懸乳劑成流動性不同的均勻膏狀體即可，球孢白僵菌高孢粉含量分別為l〇g、15g、20g、 25g、30g，具體見下表：
2. 懸乳劑品質檢測方法 2. 1.懸乳劑懸浮率檢測方法：參照GB/T14825-93執行，稱取適量試樣(懸浮液濃度為 最高噴灑濃度)，精確至0. 〇〇〇lg，置于盛有50mL標準硬水（30± I°C )的200mL燒杯中，用手 搖蕩作圓周運動，約每分鐘120次，進行2min，將懸乳液在同一溫度的水浴鍋中放置13min， 然后用30 ± I °C的標準硬水將其全部洗入250mL量筒中，并稀釋至刻度蓋上蓋子。以量筒底 部為軸心，將量筒在Imin內上下顛倒30次(將量筒倒置并恢復至原位為1次，約2s)。打 開塞子，在垂直放入無振蕩的恒溫水浴鍋中30min。用吸管在10~15s內將內容物的9/10 即（225mL)懸浮液移出。不要搖動或攪起量筒內的沉降物，確保吸管的頂端總是在液面下 幾毫米處，之后烘干稱取重量，并計算懸浮率，每組實驗重復三次。
[0022] 懸浮率=(試樣質量-25ml懸乳液中有效成分質量）/試樣質量X 10/9X 100%。
[0023] 2. 2懸乳劑粘度檢測方法：高孢粉懸浮液稀釋2倍后，采用粘度計直接讀數，單位 為mPa · s，讀數3次。
[0024] 2. 3懸乳劑孢子萌發率測定方法：高孢粉懸乳液稀釋100倍后，取Iml稀釋液加入 到9ml滅菌的含有抗生素的SDY液體培養液中，26°C、lSOrpnij·旦溫振蕩培養16h后顯微鏡鏡 檢萌發孢子，并統計孢子萌發率。每個樣品重復三次，取平均值。
[0025] 孢子萌發率=萌發包子/(萌發孢子+未萌發孢子）*100% 3. 懸乳劑種子包衣方法： 懸乳劑3號和玉米種子按照下表比例加入到500ml三角瓶中充分攪拌，待玉米包衣均 勻后取出晾干，待用。每種包衣處理重復3次。
[0026] 4.種衣劑品質檢測方法 4. 1種衣劑球孢白僵菌孢子包衣率檢測方法： 取25粒包衣種子，放入無菌100mL三角瓶中，加入無菌的含0. 05%的吐溫-80無菌水 25ml，無菌玻璃珠25g，搖床200rpm/min震蕩洗滌包衣的球孢白僵菌孢子2小時，顯微鏡下 血球計數板計數孢子數目，計算每粒種子孢子包衣濃度。
[0027] 洗脫液孢子濃度(個孢子/ml菌懸液）=每個方格內孢子總數*稀釋倍數*4*106 種子包衣濃度(個孢子/粒種子）=洗脫液孢子濃度 4. 2種衣劑包衣孢子萌發率檢測方法： 取包衣種子孢子洗脫液Iml，加入到9ml滅菌的含有抗生素的SDY液體培養液中，26 °C、 ISOrpm恒溫振蕩培養20h后顯微鏡鏡檢萌發孢子，并統計孢子萌發率。每個樣品重復三次， 取平均值。
[0028] 孢子萌發率=萌發孢子/(已萌發孢子+未萌發孢子）*100% 4. 3種衣劑包衣種子發芽率檢測方法： 取包衣種子50粒，用種子發芽機25°C避光發芽，每12小時換一遍水，48小時候統計種 子萌發情況。種子萌發以胚芽吸脹穿透種皮為標志，記為萌發，以未包衣種子為對照處理。
[0029] 種子萌發率=萌發種子/(萌發種子+未萌發種子）*100% 4. 4包衣種子儲存時間檢測 包衣種子室溫干燥儲存，在1、5、10和15天時分別檢測包衣孢子和種子的萌發率，篩選 包衣種子的室溫儲存時間。
[0030] 5.種衣劑田間應用 5. 1包衣種子田間種植和管理方法 包衣種子采用播種機兩粒播種，垅距0. 75米，株距0. 25米，播種前用除草劑封閉除草 一次，播種時一次性施用長效緩釋復合肥，出苗10天后進行除草和間苗，約30天時進行二 次除草和趟地。未包衣種子為對照處理，3個重復。
[0031] 5. 2促生檢測方法 在種子出苗后，第30、45、55天用5米卷尺測量20株玉米苗的株高，計算玉米每天的生 長速率。重復3次。
[0032] 玉米生長速率（cm/天）=(后一次株高-前一次株高）/兩次測量的間隔時間 5. 3抗蟲檢測方法 7月5日早晨8:00前，調查玉米螟對玉米葉片的危害程度，危害標準和抗性程度參見 NY/T 1248. 5-2006 (見下表)。調查20株玉米，重復3次。
[0033] 5. 4增產檢測方法 在9月中旬，收獲玉米，檢測玉米百穗重、千粒干重，計算增產率。重復3次。
[0034] 增產率=(包衣千粒干重-非包衣千粒干重）/非包衣千粒干重*100% 所述的述砂磨機采用"眾時(上海）機械有限公司"生產的ZMD-550實驗室分散砂 磨機。
[0035] 所述的粘度計為上海天平儀器廠生產的NDJ-I型號粘度計。
[0036] 所述的顯微鏡采用重慶光電儀器有限公司生產的XSZ-HY2型生物顯微鏡。
[0037] 所述搖床為上海智誠分析儀器制造有限公司生產的ZWY-2102C型號搖床。
[0038] 所述電子稱為上海光正醫療儀器有限公司生產的YPB2003型號電子