地皮消的繁殖方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及中草藥繁殖技術，尤其涉及一種地皮消的繁殖方法。
【背景技術】
[0002] 地皮消 Pararuellia delavayana 為爵床科（Acanthaceae)地皮消屬 (Pararuellia)多年生草本，別名地皮膠、刀口藥、蛆藥，是我國特有藥用植物，產四川南部、 云南中北部及貴州，生于海拔750-3000m的山地草坡、疏林下。地皮消全草入藥具有清熱解 毒、散瘀消腫、拔毒生肌、散瘀生新、殺蟲等功效，主治肺炎、扁桃體炎、腮腺炎、瘰疬、膿腫瘡 毒、骨折等。在云南尋甸、石林、彌勒等原生地，當地人稱地皮消為"小奇藥"，用于感冒發熱、 跌打損傷、腰膝酸痛等。水煎服用于感冒發熱；用白酒浸泡成為藥酒溫熱外擦治跌打損傷； 治腰膝酸痛，則直接服用藥酒。
[0003] 地皮消通常以種子為繁殖單位，但其種子萌發率低，種子苗生長緩慢、后代變異 大，并受到萌發季節的限制，難以進行規模化、標準化（基因型背景一致）種植和高藥效品 種的大面積推廣。因此，需要尋求一種新的成本低、時間短、質量和成活率高，且能將優良性 狀固定下來的無性繁殖方法來擴大地皮消種苗的繁殖量，進行地皮消高品質種苗的工廠化 生產，以滿足種植需求。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于解決地皮消現有繁殖技術存在的缺陷，提供一種能夠在短時間 內獲得質優量大的地皮消無性種苗方法，該方法為保護地皮消野生資源和發展人工種植奠 定技術基礎，同時可將優良性狀予以固定，提供基因型背景一致的優質種苗以滿足人工種 植的需求。
[0005] -種地皮消的繁殖方法，包括將消毒滅菌處理后地皮消外植體先后接種于不同的 培養基中進行愈傷組織誘導、叢芽發生和增殖同步培養步驟。
[0006] 進一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，所述愈傷組織誘導的步驟包括：
[0007] 步驟1 :將消毒滅菌處理后地皮消外植體接種于培養基A中：
[0008] MS培養液 6-芐胺基嘌呤 6-BA 1 0-1.5 mg/L 萘乙酸 NAA 0.1-1.0 mg/L 激動素 KT 0.05-0.2mg/L 蔗糖 30000 mg/L 瓊脂粉 48000 mg/L pH 5.4-5.8
[0009] 培養條件：在光照度1500-20001x，光照時間12h/d，溫度控制在22± 1°C的條件下 進行愈傷組織誘導，培養20d后出現質地緊密的愈傷組織，繼續培養20d后愈傷組織分化出 大量致密叢生芽，此時將叢生芽切割為3-5株一叢，轉接至相同的新培養基A中繼續培養 20d，叢生芽繁殖生長為增殖芽；
[0010] 其中，所述外植體為生長健壯的野生植株帶芽莖段，按I. 5-2. Ocm長度切取。
[0011] 進一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，所述叢芽發生和增殖同步培養包括以 下步驟：
[0012] 步驟2 :將步驟1培養的增殖芽切割為3-5株一叢，轉接至培養基B中：
[0013] B5培養液 6-芐胺基噤呤 6-BA 1.0-1.5 mg/L 萘乙酸N A A 0.1-1.0mg/L 激動素 KT 0.05-0.2mg/L 鹿糖 20000 mg/L 瓊脂粉 48000 mg/L pH 5.4-5.8
[0014] 培養條件：在光照度1500-20001X，光照時間12h/d，溫度控制在22± 1°C的條件下 繼續培養40d ;
[0015] 步驟3 :將步驟2培養的增殖芽按40d的生長周期輪流接入培養基A和培養基B中 進行增殖，直到叢芽高3-4cm ;
[0016] 步驟4 :取步驟3叢芽中高3-4cm的健壯主苗接種于培養基C中：
[0017] MS培養液 萘乙酸 NAA 0.1-1.0 mg/L 蔗糖 30000 mg/L 瓊脂粉 48000 mg/L pH 5.4-5.8
[0018] 培養條件：在光照度1500-20001x，光照時間12h/d，溫度控制在22±1°C的條件 下，培養45d獲得苗壯根粗的生根苗；
[0019] 步驟5 :取步驟4中6-8cm高的生根苗置于室溫下煉苗3d后，從培養基中取出幼 苗，將殘留培養基清洗干凈，放入質量濃度0. 1-0. 2%的多菌靈溶液中消毒2-3min，后移栽 至消毒后的腐殖質中保溫保濕培養，生長30d后，即得移栽苗。
[0020] 進一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，步驟1中所述消毒滅菌處理的方法為： 先用自來水清洗表面的泥土和灰塵，再放到流水下沖洗2h后，置于超凈工作臺上用體積比 為75%的酒精消毒60s，再用質量百分比為0. 1 %的HgCl2滅菌6min，最后用無菌水沖洗若 干次后放在無菌濾紙上吸干表面水分，最終得到消毒滅菌處理的外植體。
[0021] 本發明提供的地皮消的繁殖方法具有以下有益效果：
[0022] 1、用組織培養技術在培養室內好可實現周年生產，既節約了土地資源，又提高了 經濟效益，克服了傳統繁殖方式無法周年進行生產的難點。
[0023] 2、實現了高效快繁的目的，40-55d為一個培養周期，繁殖系數可達15.0以上。
[0024] 3、解決了地皮消屬植物快速繁殖中易出現的玻璃化現象，提高了種苗質量。
[0025] 4、解決了傳統種子繁殖后代分離大、性狀不穩定而導致的種苗品質不一的難題， 通過本發明，可使所有種苗保持同一基因型背景，易于標準化、工廠化操作，有效地提高了 種苗質量，可為大面積推廣種植提供統一標準的優良種苗。
[0026] 5、對地皮消快速繁殖體系進行了優化，在同一培養基中，可同時進行愈傷組織誘 導、叢芽發生和增殖培養，簡化了培養程序；整個快速繁殖過程只需3種培養基就解決了從 愈傷組織、叢芽發生和增殖、克服玻璃化現象以及生根問題，利于安排生產計劃。
【具體實施方式】
[0027] 為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面本發明中的技術方案進行清 楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于 本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他 實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0028] 實施例
[0029] 1、外植體的獲取：選擇生長勢好、無病蟲害、無畸形的健壯植株，取其莖尖下第 3-5節莖段，用手術刀切割為約2-3cm長。
[0030] 2、將1步驟的帶芽莖段先用自來水