一種顱骨瓣儲存方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫學和生物工程領域，具體涉及一種顱骨瓣的儲存方法。
【背景技術】
[0002] 神經外科去骨瓣減壓術是解除因腦外傷、腦出血、腦腫瘤以及大面積腦梗塞等所 致顱內高壓的有效手段。但是，手術中去除骨瓣所造成的顱骨缺損，使患者失去正常顱骨的 屏障作用，并嚴重影響外觀，對患者將來回歸社會的生理和心理均造成很大影響，因此，一 般在手術后3-6月，待顱內高壓完全解除，患者基本康復后，大多數患者需要接受顱骨缺損 的修補手術。
[0003] 目前，在異質材料中，鈦合金相對早年的有機玻璃、硅膠等材料，其組織相容性好， 排斥反應小，在臨床上已被廣泛應用，但鈦合金的網板仍有諸多問題：（1)起皺、變形、邊緣 翹曲和網板松動等是金屬特有的缺陷，尤其當其受沖擊時產生的塑性變形，不僅影響美觀， 而且銳利的邊緣易刺破皮膚，導致鈦網外露和皮膚感染；(2)非自體組織，易使患者產生心 理障礙；（3)在影像學檢查時會產生偽影；(4)鈦網僅覆蓋顱骨外表面，在顱骨較厚區域的 內表面，缺損的顱骨內緣可因棱角造成腦組織的切割傷；（5)導熱性強，患者無法忍受長時 間陽光暴曬和嚴寒，不能起到隔熱、隔冷、防震、隔音和緩沖的功能，容易出現頭痛和癲癇發 作；(6)價格高。自體顱骨瓣作為顱骨缺損的修補材料，具有無需塑形，無排斥反應，患者心 理易接受，并能夠再生復活，恢復顱骨隔溫、隔音、防震和緩沖等自然屬性，具有廣闊的臨床 應用前景。
[0004] 然而，自體顱骨的儲存方法仍是困擾業界的巨大難題。現有技術中，自體顱骨的儲 存方法主要包括兩種：體內儲存和體外儲存。所謂體內儲存，是指將手術中取出的顱骨瓣直 接植入患者的大腿內側或腹部皮下備用，待患者3-6月后需行顱骨修補時，再將顱骨瓣取 出。然而，由于"自體骨吸收現象"，顱骨瓣植入后，隨時間的延長而逐漸縮小，以至于無法修 補原來的缺損。同時，這種儲存方式必須經歷兩次創傷，不僅增加新的疤痕，還增加了感染 風險。因此，越來越多的研宄者將目標放在自體顱骨瓣的體外儲存方法上。
[0005] 中國專利文獻CN103623464A公開了一種自體顱骨瓣回植技術的制備方法，包括 如下步驟：（1)去污工藝：采用普通洗滌劑將骨表面的油污等雜質清洗干凈，然后再用蒸餾 水沖洗干凈，晾干后獲得完全的自體顱骨基質；（2)病毒滅活工藝：在室溫條件下，用IOg/ L過氧乙酸和體積分數24%乙醇組成的過氧乙酸-乙醇混合液，微波震蕩浸泡自體顱骨基 質4-6小時；(3)去蛋白工藝：在室溫條件下，將自體顱骨基質放入濃度為10-20%的雙氧 水中微波震蕩浸泡48-72小時，然后再用純化水沖洗干凈；(4)脫脂工藝：用95%的酒精、 乙醚，及洗潔凈浸泡脫脂和純化水沖洗，把自體顱骨基質放入離心機脫水后，在常溫下自 然干燥；（5)脫細胞工藝：在2-5°C條件下，將上述去脂步驟后獲得的骨頭基質放入濃度為 0. 5-1. 0%的十二烷基硫酸鈉和濃度為0. 8-1. 2%的蛋白酶抑制劑PMSF的混合液中采用攪 拌震蕩的方式浸泡24-48小時，然后再用純化水循環沖洗24-48小時；在2-5°C條件下，再 將自體顱骨基質放入濃度為〇. 1-0. 4%的胰蛋白酶中浸泡12-24小時，然后再用純化水循 環沖洗20-28小時，獲得脫細胞基骨；（6)凍干工藝：將經脫細胞工藝后制備好的自體顱骨， 放入冷凍干燥機凍干；（7)包裝、滅菌工藝：在潔凈間內封裝，采用環氧乙烷或Co-60進行滅 菌。
[0006] 上述方法，為達到滅菌目的，需采用洗滌劑去污，過氧乙酸與乙醇的混合液病毒滅 活，雙氧水去蛋白，乙酸和乙醚脫脂以及十二烷基硫酸鈉、蛋白酶抑制劑脫細胞等工藝步 驟，不但工序復雜，無法實現規模化處理，而且，大量化學制劑的應用，使顱骨瓣中的活性物 質大量喪失，甚至使顱骨瓣完全喪失活性而成為死骨。更令人困惑的是，如何排盡那些殘留 于顱骨瓣中的化學物質，以及這些化學物質是否對身體產生長遠危害，目前尚無確鑿的理 論依據和最終定論。
【發明內容】
[0007] 為此，本發明提供了一種工藝簡單，保留骨瓣活性物質，無化學物質殘留，易實現 標準化、規模化和可追溯化的自體顱骨瓣體外儲存方法。
[0008] 為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：
[0009] 本發明所述的一種顱骨瓣儲存方法，包括如下步驟：
[0010] S1、采用清洗液清洗取下的顱骨瓣；
[0011] S2、用所述清洗液浸沒所述顱骨瓣；
[0012] S3、低溫速凍，使得所述顱骨瓣固定在所述清洗液形成的冰塊中；
[0013] S4、經所述冰塊，鉆取若干個顱骨瓣通孔；
[0014] S5、對所述顱骨瓣進行干燥處理；
[0015] S6、對所述顱骨瓣進行輻照滅菌；
[0016] S7、將輻照滅菌后的所述顱骨瓣置于低溫環境下保存。
[0017] 優選地，所述步驟S2包括：
[0018] 在第一容器中放置所述清洗液形成的冰塊；
[0019] 將所述顱骨瓣凸面朝上放置在所述冰塊上；
[0020] 在所述第一容器中注入所述清洗液，以浸沒所述顱骨瓣。
[0021] 所述步驟S6中采用電子束或γ射線進行輻照滅菌，并且所述電子束或所述γ射 線的滅菌劑量為25kGy~35kGy。
[0022] 所述步驟S3中所述低溫速凍步驟的溫度為-4°C~_80°C。
[0023] 所述步驟S5中對所述顱骨瓣進行干燥處理的步驟采用冷凍干燥工藝，將所述顱 骨瓣的水分含量干燥至不高于6wt %。
[0024] 在所述步驟S4與S5之間，或者在所述步驟S5與S6之間還包括：
[0025] 在所述顱骨瓣上方設置隔離蓋；
[0026] 對所述第一容器進行密閉封蓋。
[0027] 對所述第一容器進行密閉封蓋之后還包括：
[0028] 將所述第一容器置于第二容器中；
[0029] 對所述第二容器進行封蓋。
[0030] 優選地，通過特衛強? (Tyvek?)對所述第一容器進行密閉封蓋；和/或
[0031] 通過鋁塑復合膜和/或聚酰胺/聚乙烯（PA/PE)復合多層膜和/或鋁箔和/或 特衛強? (Tyvek?)進行所述第二容器密閉封蓋；
[0032] 其中，對所述第一容器和/或所述第二容器進行密閉封蓋的步驟在氮氣氛圍或者 惰性氣體氛圍中進行。
[0033] 對所述第一容器進行密閉封蓋之后還包括通過第一蓋體與所述第一容器扣合封 蓋；和/或
[0034] 對所述第二容器進行密閉封蓋之后還包括通過所述第二蓋體與所述第二容器扣 合封蓋；
[0035] 其中，所述第一蓋體或所述第二蓋體為耐輻射的聚對苯二甲酸乙二醇酯-1，4-環 己烷二甲醇酯（PETG)、耐輻射的聚酰胺（PA)、耐輻射的聚乙烯（PE)中的至少一種。
[0036] 所述清洗液為氯化鈉水溶液，或者包括氯化鈉的水溶液以及乳酸鈉、碳酸氫鈉、硫 酸鎂、氯化鉀、碳酸鈣、葡萄糖中的至少一種。
[0037] 本發明的上述技術方案相比現有技術具有以下優點：
[0038] 1、本發明所述的自體顱骨瓣體外儲存方法，不使用任何化學制劑，既能有效避免 所述顱骨瓣在儲存過程中容易遇到的微生物污染問題，又能徹底解決化學物質的殘留問 題。
[0039] 2、本發明所述的顱骨瓣儲存方法，能在最大程度上實現顱骨瓣回植后成為活骨。 由于自體顱骨的回植無抗原抗體的排斥反應，因而大大降低了回植的手術風險。同時，自體 顱骨瓣保留了有別于異質材料的生物學構造和成骨所需的活性物質，擺脫了對異質材料的 依賴，實現了顱骨缺損的再生修復。
[0040] 3、本發明所述的顱骨瓣儲存方法，工藝簡單、易實現標準化、規模化和可追溯化， 可人工、半自動化甚至全自動化實施，具有深遠的社會價值和意義。
[0041 ] 4、本發明所述的顱骨瓣儲存方法，利用清洗液的液態和固態之間的相互轉換，將 不規則的顱骨瓣充分緊固在所述清洗液形成的冰塊中，形