一種利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及組織培養領域，特別是涉及一種利用未成熟果實進行燕子花離體快速 繁殖的方法。
【背景技術】
[0002] 燕子花（Iris laevigata)為鳶尾科鳶尾屬多年生宿根花丼，是優良濕地、淺水綠 化園林植物；夏季開花，色彩鮮艷，具有較高的觀賞價值和推廣應用價值。一般采用分株繁 殖的方法，但是由于繁殖系數很低，很難滿足市場需求。利用組織培養的方法可以利用有 限的外植體快速獲得大量的繁殖材料，大大提高繁殖系數。目前，關于鳶尾屬植物特別是 宿根鳶尾類的組培快繁報道較少，僅見于幾種常見的鳶尾屬材料；外植體的選擇有莖尖塊、 花蕾、花托、花苞、頂芽，但各有缺點，研宄發現以這些材料作為外植體時，雖然愈傷很多但 是分化芽很少；而自然情況下，結實率非常低（低于10%)，即使成熟，果實內部種子敗育 現象嚴重，且存在嚴重的休眠特性，并不是非常理想的外植體。現有技術還存在如下缺點： 1、自然條件下，大部分花不能坐果，結實率較低；2、即使獲得種子，種子發育不良，出苗率很 低，繁殖系數低；3、種子具有較為嚴重的休眠特性，出苗參差不齊；4、最常用繁殖方法分株 繁殖繁殖系數很低；5、組培難度大，誘導分化難。
【發明內容】
[0003] 本發明要解決的技術問題是提供一種繁殖效果好、周期短、操作簡便的利用未成 熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法。
[0004] 一種利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，包括如下步驟：
[0005] (1)人工授粉，大大提高坐果率，獲得幼嫩果實材料；
[0006] (2)選取燕子花健康幼嫩的果實，進行預處理后滅菌，獲得無菌材料；
[0007] (3)接種到不定芽誘導培養基上進行不定芽的誘導；
[0008] (4)分割獲得的不定芽，接種到增殖培養基上進行增殖；
[0009] (5)接種到生根培養基上進行壯苗和生根培養；
[0010] (6)移栽和馴化。
[0011] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，步驟（1) 和步驟（2)具體包括如下步驟：
[0012] 在花期時進行人工授粉，提高坐果率，在6月初-6月中旬之間采集燕子花健康幼 嫩的果實，剝開滅菌或直接滅菌，滅菌方法為：分別放到100mL磨口廣口瓶中，用自來水沖 洗2h后置于超凈工作臺上，用75%的乙醇滅菌Imin后，迅速用無菌水洗滌，接著用0. 1% 的HgCl2溶液振蕩滅菌8min，再用無菌水振蕩洗滌4~5次，即獲得無菌材料。
[0013] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，步驟（3) 具體包括如下步驟：
[0014] 剝開滅菌的果實直接接種到不定芽誘導培養基上，直接滅菌的果實選擇以下兩種 中的一種方式進行接種：
[0015] I.在無菌工作臺內剝掉滅菌后的果實的果殼，將果實內的幼嫩種子一一分開，接 種到不定芽誘導培養基上；
[0016] II.在無菌工作臺內將幼嫩果實直接切成小段，然后接種到不定芽誘導培養基上。
[0017] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，所述不定 芽誘導培養基為 MS+0. lmg/L NAA+l.Omg/L 6-BA 或 MS+0. lmg/L NAA+2.0mg/L 6-BA。
[0018] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，步驟（4) 中所述增殖培養基為MS+0. lmg/L NAA+2.0mg/L 6-BA。
[0019] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，步驟（5) 中所述生根培養基為1/2MS。
[0020] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，步驟（6) 具體包括如下步驟：
[0021] 待不定芽在生根培養基上生根后，將培養瓶打開放于室內環境下適應2d，然后取 出，洗凈培養基，移栽于體積比為1 :1 :1的泥炭、珍珠巖和松鱗的混合基質中，保濕。
[0022] 本發明所述的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法，其中，培養室的 培養條件為溫度25°C，光照強度為2000LUX，光照時間為12h。
[0023] 本發明利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法與現有技術不同之處在 于：本發明根據的燕子花坐果結實特性，通過人為輔助授粉大大提高坐果率，同時在大部 分果實敗育之前（果實在發育過程中又存在較大比較的敗育率），利用未成熟果實進行 燕子花離體快速繁殖的方法建立了燕子花的無性系，繁殖效果好，在本發明的不定芽誘導 培養基（MS+0. lmg/L NAA+2. Omg/L 6-BA)中出芽率可達到92%，在本發明的增殖培養基 (MS+0. lmg/L NAA+2. Omg/L 6-BA)中平均增殖系數可達到4. 5。本發明的果實滅菌和處理 方法和各階段培養基的選擇都是針對于燕子花這個特殊的植物來設置的。
[0024] 本發明利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法中進行了人工授粉，盡管 人工授粉未能顯著促進最終結實率，但可以大大提高早期坐果率，此時的果實即可作為繁 殖材料，為本發明的材料來源提供了保障。目前，關于鳶尾屬植物特別是宿根鳶尾類的組培 快繁報道較少，僅見于幾種常見的鳶尾屬材料，外植體的選擇有莖尖塊、花蕾、花托、花苞、 頂芽，但各有缺點，研宄發現以這些材料為外植體時，雖然愈傷很多但是分化芽很少，而成 熟的果實敗育現象嚴重，不適合做外植體。且如采用成熟的果實作為外植體，材料來源將會 大大減少（未成熟的果實很多，不一定都能后期成為成熟的果實，成熟后數量大大減少）。 果實采集時間也非常重要，為6月上旬到中旬，過完采集會導致萌發率大大下降。本發明移 栽過程中采用了特殊種類和配比的基質，體積比為1 :1 :1的泥炭、珍珠巖和松鱗的混合基 質，其中添加一定比例的松鱗是針對于燕子花的生物學特性來配制的，既能保證生長所需 的條件，又能一定程度上控制其根系生長（避免過長），適合燕子花的生長。
[0025] 下面結合附圖對本發明的利用未成熟果實進行燕子花離體快速繁殖的方法作進 一步說明。
【附圖說明】