一種歐李組培快繁方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種歐李組培快繁方法。
【背景技術】
[0002]歐李(Cfera1SW1S Aw?i7i5.)為薔薇科樓桃屬多年生落葉矮小灌木，是世界上最矮小的木本果樹，也是我國特有的果藥兼用野生樹種。核果，形似櫻桃，味似李子，酸甜可口，風味獨特，有紅、黃、紫等多種顏色，因其植株矮、果實色多而艷麗，可進行盆栽，既可觀賞又可食用；果實營養價值豐富。其種仁和根皆可藥用，種仁在中藥上稱為“郁李仁”，可消毒化腫。此外，歐李也是一種適應性很強的樹種，具有耐干旱、耐瘠薄、耐寒冷、耐鹽堿等特點，是一種良好的生態樹種。由于歐李的營養價值高，其生態價值和社會價值也不可估量，開發利用前景非常廣闊，今后歐李良種種苗會供不應求，苗木需求量會越來越大，這為工廠化育苗提供了廣闊的市場。
[0003]目前，歐李主要采用播種、扦插、嫁接等方式進行繁殖，但繁殖系數低，生長周期長，同時易受外界環境條件等因素的影響。近年來，已培育了不少的優良歐李品種，但傳統的繁殖方式已不能滿足其良種推廣對種苗的需要，而釆用組織培養的方法，繁殖系數高，可以在任意生長階段進行選材擴繁，對歐李優良品種的選育和工廠化育苗提供了便利的條件。本發明以歐李帶腋芽莖段為外植體，經過誘導培養、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等步驟獲得了歐李離體再生植株，建立了歐李再生體系，為今后工廠化育苗及馴化栽培奠定堅實的基礎。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供出一種歐李組培快繁方法，本發明以歐李帶腋芽莖段為外植體，經過誘導培養、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等步驟獲得了歐李離體再生植株，建立了歐李再生體系，從而實現了本發明的目的。
[0005]本發明的一種歐李組培快繁方法，包括以下的步驟:
(I)外植體消毒:歐李枝條帶回實驗室，自來水沖去表面灰塵后置于飽和的洗衣粉水中浸泡20?40min，用軟毛刷徹底洗去灰塵后，放在流水下沖洗2?3 h，沖凈材料表面上殘留的洗衣液，在超凈工作臺上先置于70%?75%的酒精中浸泡30?60s，迅速用無菌水漂洗2?5次，然后用0.1%的升汞溶液消毒處理6?15 min，注意將外植體完全浸泡在升汞中，消毒后用無菌水沖洗4?7次，每次沖洗I?3min，無菌濾紙吸干外植體表面殘留水分后備用。
[0006](2)誘導培養:將經步驟(I)處理后的外植體剪成帶有I?2個腋芽、長度約為I?2cm的莖段，切掉與消毒液接觸的切口部分后接種于誘導培養基中進行叢生芽誘導。接種后置于每天光照12?16小時，光照強度為2000?40001x，置于培養溫度為18?22°C，空氣相對濕度為75%?80%的條件下培養30天后統計萌動率。
[0007](3)增殖培養:將步驟(2)莖段腋芽誘導得到的萌枝剪切成I?2cm長的莖段并接種到增殖培養基進行繼代增殖培養以得到更多的萌條。接種后置于每天光照14?16小時，光照強度為3000?50001x，培養溫度為15?20°C，空氣相對濕度為75%?80%的條件下培養25天后以不定芽長度多1.0cm為有效芽統計增殖倍數。
[0008](4)生根培養:經步驟(3)繼代3?5次后，選取健壯、生長勢相對一致的試管苗接種至生根培養中誘導生根。接種后置于每天光照14?16小時，光照強度為3000?50001x，培養溫度為15?20°C，空氣相對濕度為75%?80%的條件下培養25天后統計生根率及平均生根數。
[0009](5)煉苗移栽:選取經生根培養后，根系發達且植株生長健壯的組培苗進行煉苗移栽，首先洗去組培苗基部附著的瓊脂，之后將其移栽到事先澆透由草炭土:腐殖土:珍珠巖=2:1:1組成的混合基質中，之后向小苗進行噴霧，搭建簡易塑料拱棚，保證棚內空氣相對濕度達100%，覆蓋塑料薄膜，以保證煉苗期間棚內的濕度，之后逐漸掀膜通風透光并注意棚內的濕度。移栽20天后統計移栽成活率。
[0010]上述步驟(2)所述的誘導培養基為:MS+0.1?1.0mg/L NAA+1.0?3.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂 +1.0 ?3.0g/L LH+50 ?100g/L 馬鈴薯，pH 為
5.4 ?5.8ο
[0011]上述步驟(3)所述的增殖培養基為:MS+0.1?1.0mg/L NAA+1.0?3.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]上述步驟(4)所述的生根培養基為:1/2MS+1.0?3.0mg/L NAA+1.0?2.0mg/LABTi+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0013]與現有技術相比本發明的優點是:歐李(Cera1SW1S力應i7i5.)為薔薇科樓桃屬多年生落葉矮小灌木，是世界上最矮小的木本果樹，也是我國特有的果藥兼用野生樹種。近年來，已培育了不少的優良歐李品種，但傳統的繁殖方式已不能滿足其良種推廣對種苗的需要。植物組織培養的方法具有繁殖系數高、周期短、成本低等特點，是歐李快速繁殖的最佳方式。本發明以歐李帶腋芽莖段為外植體，經過誘導培養、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等步驟獲得了歐李離體再生植株，建立了歐李再生體系，為今后工廠化育苗及馴化栽培奠定堅實的基礎。
【具體實施方式】
[0014]以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。
[0015]實施例1
(O外植體消毒:歐李枝條帶回實驗室，自來水沖去表面灰塵后置于飽和的洗衣粉水中浸泡20min，用軟毛刷徹底洗去灰塵后，放在流水下沖洗2h，沖凈材料表面上殘留的洗衣液，在超凈工作臺上先置于70%的酒精中浸泡60s，迅速用無菌水漂洗4次，然后用0.1%的升汞溶液消毒處理12min，注意將外植體完全浸泡在升汞中，消毒后用無菌水沖洗5次，每次沖洗2min，無菌濾紙吸干外植體表面殘留水分后備用。
[0016](2)誘導培養:將經步驟(I)處理后的外植體剪成帶有I?2個腋芽、長度約為I?2cm的莖段，切掉與消毒液接觸的切口部分后接種于誘導培養基中進行叢生芽誘導。接種后置于每天光照14小時，光照強度為30001χ，置于培養溫度為18°C，空氣相對濕度為75%的條件下培養30天后統計萌動率為86.66%ο所述的誘導培養基為:MS+0.3mg/LNAA+1.5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.9g/L 瓊脂 +1.5g/L LH+70g/L 馬鈴薯，pH 為 5.8。
[0017](3)增殖培養:將步驟(2)莖段腋芽誘導得到的萌枝剪切成I?2cm長的莖段并接種到增殖培養基進行繼代增殖培養以得到更多的萌條。接種后置于每天光照14小時，光照強度為30001x，培養溫度為15°C，空氣相對濕度為75%的條件下培養25天后以不定芽長度多1.0cm為有效芽統計增殖倍數為6.53，培養30天后苗平均株高在3.5 cm左右，苗健壯，葉深綠色或黃綠色，葉片大而完全伸展。所述的增殖培養基為:MS+0.5mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA+18g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0018](4)生根培養:經步驟(3)繼代3次后，選取健壯、生長勢相對一致的試管苗接種至生根培養中誘導生根