一種以檸檬提取液為防褐化培養(yǎng)基的蝴蝶蘭防褐化組培方法
【專利說明】一種以檸檬提取液為防褐化培養(yǎng)基的蝴蝶蘭防褐化組培方 法
[0001] 本申請是申請?zhí)枮椋?01410003340X，申請日為：2013-4-27,發(fā)明名稱為：一種蝴 蝶蘭防褐化組培方法及防褐化培養(yǎng)基的分案申請
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明主要涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地說是一種蝴蝶蘭防褐化組培方法及防 褐化培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0003] 外植體褐變是植物組織培養(yǎng)中遇到的重要問題。有研宄表明，導致褐化的主要原 因是由多酚氧化酶作用于天然底物酚類物質(zhì)形成醌而引起的，通過加入抗氧化劑和吸附劑 可較好地控制褐化現(xiàn)象發(fā)生。
[0004] 針對這些產(chǎn)生褐化的原因，早前有研宄表明活性炭是能夠起到防褐化的作用的， 因為活性炭防褐化用的原理是活性炭的吸附作用，而活性炭本身吸附作用是有限的，也就 是說每瓶中我們不可能加入大量的活性炭，所以小量的活性炭的吸附作用是比較小的，一 旦吸附的有害成分達到飽和，基本上就沒有功效了，因此在培養(yǎng)過程中需更換新鮮培養(yǎng)基， 而植物的生長發(fā)育是連續(xù)的過程，對培養(yǎng)的內(nèi)在小環(huán)境是有嚴格要求的，頻繁更換培養(yǎng)基 不利于培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分產(chǎn)生作用，且在轉(zhuǎn)接過程中存在著污染的風險，高頻率的轉(zhuǎn)接 會加大污染死亡的機率，也就說活性炭防褐化的作用有嚴重的缺陷。隨后又有研宄表明 光照對初代培養(yǎng)的褐化是有影響的，結(jié)果表明，1000 lx和30001X光強培養(yǎng)可降低褐化率， 20001x光強培養(yǎng)的外植體褐化嚴重，差異顯著。不難發(fā)現(xiàn)這些方法存在著一定的缺陷和不 全面性且不環(huán)保，對于整個培養(yǎng)階段的防褐化和一個比較系統(tǒng)的防褐化方法的研宄還是甚 少。
[0005] 蝴蝶蘭又名蝶蘭（Phalaenopsis amabilis)，蘭科（Orchidaceae)蝶蘭屬 (Phalaenopsis)多年生附生草本植物，有著"洋蘭皇后"之稱的蝴蝶蘭，由于其花形如彩蝶 飛舞，色彩艷麗，體態(tài)輕盈、飄逸，在國內(nèi)外花丼市場上極受歡迎，一直都是消費者的寵兒。 而且蝴蝶蘭除了盆栽之外，還特別適宜用作切花，是藝術(shù)插花的高檔花材。
[0006] "V31"是蝴蝶蘭紅花系列的一個品種，以超長的花梗長度，良好的花序排列，中庸 的花形及花色，特別的花朵圖案，博得廣大生產(chǎn)者及消費者的歡迎，多年以來一直受到追 捧，是蝴蝶蘭中的佼佼者。但是蘭科植物在組織培養(yǎng)過程中的褐化問題是多發(fā)的常見的，幾 乎不可避免，褐化會導致植株的死亡，也就是培養(yǎng)中的植物不能繼續(xù)進行培養(yǎng)，所以防止褐 化是在蘭科植物組織培養(yǎng)中要極力解決的問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種蝴蝶蘭防褐化組培方法，通過該方法可以對蝴蝶蘭組 織培養(yǎng)過程出現(xiàn)的褐化問題進行改善，提高存活率，增加健康的組培苗數(shù)量從而增加最終 的產(chǎn)量。
[0008] 本發(fā)明的目的還在于提供提供一種植物防褐化組織培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基可以對植物 組培過程中出現(xiàn)的褐化問題得到顯著改善。
[0009] 本發(fā)明解決技術(shù)問題采用如下方案：
[0010] 一種植物防褐化組培培養(yǎng)基，其特點在于，各階段培養(yǎng)基由如下組分組成：
[0011] ⑴初代培養(yǎng)基
[0012] 每升MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA 8. 0mg、NAA 0. 5mg、金盞花提取液175mg、瓊脂8g、 蔗糖30g，培養(yǎng)基pH = 5.6 ;或
[0013] 每升N6基本培養(yǎng)基中添加6-BA 8. 0mg、NAA 0. 5mg、檸檬提取液150mg、瓊脂8g、 蔗糖30g，培養(yǎng)基pH = 5.6 ;或
[0014] 每升MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA 8. 0mg、NAA 0. 5mg、西紅柿提取液300mg、瓊脂8g、 蔗糖30g，培養(yǎng)基pH = 5.6 ;或
[0015] 每升MS基本培養(yǎng)基中添加 BA 8. Omg、NAA 0. 5mg、迷迭香提取液llOmg、瓊脂8g、 蔗糖30g，培養(yǎng)基pH = 5.6 ;
[0016] (2)增殖分化培養(yǎng)基
[0017] 每升B5基本培養(yǎng)基中添加6-BA 8. 0mg、NAA 0· 5、金盞花提取液175mg椰汁150g、 瓊脂8g、蔗糖30g、培養(yǎng)基pH = 5. 6 ;或
[0018] 每升N6基本培養(yǎng)基中添加+6-BA 8. 0mg、NAA 0. 5mg、檸檬提取液150mg、椰汁 150g、瓊脂8g、鹿糖30g，培養(yǎng)基pH = 5. 6 ;或
[0019] MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA 8. 0mg、NAA 0. 5mg、西紅柿提取液300mg、椰汁150g、瓊 脂8g、鹿糖30g，培養(yǎng)基pH = 5. 6 ;或
[0020] MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA 8. 0mg、NAA 0. 5mg、迷迭香提取液llOmg、椰汁150g、瓊 脂8g、蔗糖30g、培養(yǎng)基pH = 5. 6。
[0021] 本發(fā)明同時提供一種蝴蝶蘭防褐化組培方法，包括外植體消毒、初代培養(yǎng)和增殖 分化培養(yǎng)，生根培養(yǎng)、煉苗和移栽，其特點在于，
[0022] 所述初代培養(yǎng)是指：
[0023] 將消毒處理的外植體接入權(quán)利要求1所述的初代培養(yǎng)基上，25±1°C、光照 1500-2000LX ;光照時間為10-12小時/天，培養(yǎng)5-6周；
[0024] 所述增殖分化培養(yǎng)是指：
[0025] 將初代培養(yǎng)后的沒有發(fā)生褐化的組織接入權(quán)利要求1所述的增殖分化培養(yǎng)基， 25±1°C、光照1500-2000LX ;光照時間為10-12小時/天，培養(yǎng)至分化出幼苗。
[0026] 所述生根培養(yǎng)是指：
[0027] 將增殖分化培養(yǎng)后的苗高2cm的無根小苗，按每瓶1株，接種于MS+6-BA 1.0 mg/ L+NAA 0. 2mg/L+瓊脂8g/L+蔗糖30g/L培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2周。
[0028] 所述煉苗是指：
[0029] 將生根培養(yǎng)后的成苗每隔25-30天重新轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，如此反復2-3次；將壯苗 后的成苗瓶口打開，在培養(yǎng)室半遮光放置2-3日，期間適時補充水分，使組培苗逐步適應外 界環(huán)境，達到煉苗的目的。
[0030] 所述移栽是指：
[0031] 將消毒處理過的水苔用清水浸泡，然后用脫水機脫去水苔中多余的水分至水苔手 緊握無水滴產(chǎn)生，待用；移栽時將苗的根系分開呈散射狀，中間填充水苔，再用水苔包裹整 個根系，然后將苗根部浸入營養(yǎng)液中，待水苔吸收營養(yǎng)液后再進行包苗，移栽。
[0032] 所述外植體消毒是指：
[0033] 從植株上剪下當年生嫩葉，自來水沖去泥沙，洗滌液浸泡IOmin并除去表面污垢， 自來水沖洗3h，置于超凈工作臺上：體積濃度75 %的酒精溶液浸泡35s，之后無菌水沖洗3 次，再用體積濃度〇. 2 %的取(：12溶液浸泡5-7min，無菌水沖洗8次，之后用500mg/L PVP浸 泡4-8min轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中，吸干附著水分等待接入初代培養(yǎng)基。
[0034] 本發(fā)明方法具有如下優(yōu)點或效果：
[0035] 1.本發(fā)明采用天然添加物金盞花和檸檬作為添加劑加入培養(yǎng)基中，是第一次將天 然物質(zhì)加入培養(yǎng)基中起到防褐化的作用，與傳統(tǒng)的化學試劑和活性炭相比較，這些天然物 質(zhì)天然純凈，綠色環(huán)保，利用添加物自身所含有益物質(zhì)起到防褐化的作用。
[0036] 2.本發(fā)明采用幾種不同的基本培養(yǎng)基與天然添加劑組合，找到了最優(yōu)化的防褐化 的組合方案，且方案不唯一，可以有多種選擇，為今后蝴蝶蘭組培過程中的防褐化提供思路 和解決辦法。
[0037] 4.本發(fā)明在最后階段，待組培苗長勢穩(wěn)定后接入不加防褐化試劑的培養(yǎng)基中正常 生根，極少發(fā)生褐化，起到節(jié)約成本的目的。
[0038] 5.本發(fā)明在初代和增殖過程都能起到防止褐化的作用，與傳統(tǒng)方法相比更全面， 從各個階段解決防褐化的問題，因而提高組培苗的成活率和質(zhì)量，同時對組培苗自身的生 長起到一定的促進作用，可以得到大量的優(yōu)質(zhì)成苗。
[0039] 6.本發(fā)明中的組培苗褐化率低，營養(yǎng)健康，溫光合理，長勢旺盛。
【具體實施方式】
[0040] 以下通過具體實施例對本發(fā)明技術(shù)方案做進一步說明。
[0041] 以下實施例MS培養(yǎng)基配方：每升培養(yǎng)基中含KN03(1900mg/L)，NH 4N03(1650mg/ L)，MgSO4 · 7H2